抗菌药物敏感性试验.ppt

药敏试验及2010年CLSI更新 2 细菌耐药性变迁 G 金葡菌MRSAVISAVRSACA MRSA青霉素不敏感肺炎链球菌PISPPRSP耐万古肠球菌VRE vanAvanBvanC Fresno11 00 3 肠杆菌科细菌大肠 肺克 奇异变形杆菌产ESBLs AmpC酶等大肠埃希菌 耐FQ耐第三代头孢 碳青霉烯类革兰阴性杆菌多重耐药及泛耐药菌 不动杆菌属 绿脓 肠杆菌科细菌中的某些种 Fresno11 00 4 细菌药敏试验的重要性 细菌耐药性仍呈增加趋势加强对耐药菌的检测 耐药菌带菌者的筛查和耐药机制研究正确合理选用抗菌药和控制耐药菌感染正确的药敏试验及报告非常重要 Fresno11 00 5 如何进行药物敏感性试验 纸片扩散法Kirby baure K B 法 稀释法试管稀释法 肉汤稀释法平板稀释法 琼脂稀释法 E Test Fresno11 00 6 细菌报告应注意的问题 有无细菌 苛养菌 难培养细菌正常菌群 病原菌 病史 病人体征 感染部位药敏结果报告 耐药菌株的提示或修改 Fresno11 00 7 完全抑制的抑菌圈直径 包括纸片的直径不反光的黑色背景 反射光下阅读结果抑菌圈的界限应该是以肉眼观察没有明显的可见细菌生长区域在抑菌圈边缘微弱生长的 仅能在放大镜下才能观察到的细小菌落应忽略 正确阅读纸片法结果 Fresno11 00 8 正确阅读抑菌圈内的 霾 现象 变形杆菌 迁移生长 以及磺胺类药物的纸片法药敏注意要读完全抑制的抑菌圈 对 霾 生长不予理会克林霉素对葡萄球菌的抑菌圈内如有薄雾状菌苔应报告细菌对克林霉素耐药 不管其是否显示 D 抑菌圈需在透射光 Transmittedlight 下阅读万古霉素 利奈唑胺和苯唑西林的抑菌圈 遇不敏感的结果需用稀释法测定MIC法确证 Fresno11 00 9 E test试验结果阅读 忽略溶血 读取生长完全被抑制处MIC0 032ug ml 杀菌型药物如氨基糖苷类产生 干脆利落 椭圆球MIC0 064ug ml 试条两边产生不同的交界点 读取较高数值侧的MIC 如果两侧差 1个稀释度 则须重复试验 MIC0 5ug ml 忽略变形杆菌的迁延现象 MIC0 064ug ml Fresno11 00 10 哪些需要做MIC 肺炎链球菌苯唑西林纸片法直径 19mm 需要明确受试菌对青霉素的敏感性 必须做青霉素的E 试验革兰阳性球菌万古霉素不敏感时 中介或耐药 必须做万古霉素的E 试验确认受试菌对万古霉素的敏感性 包括替考拉宁 利奈唑胺等 草绿色链球菌对青霉素 氨苄西林纸片法药敏结果不可靠 必须做上述两药的E test Fresno11 00 11 葡萄球菌 某些情况下 对万古霉素纸片法的分辨率低 ClinicalInfectiousDiseases2007 44 1536 42 Fresno11 00 12 万古霉素的MIC方法为常规药敏试验的方法 2009 2008 2009年取消了万古霉素对葡萄球菌纸片法药敏 Fresno11 00 13 增加万古霉素剂量不能改善临床疗效 大剂量万古霉素治疗医院获得性MRSA感染 MIC 2 g mL仍导致高治疗失败率 HidayatLKetal ArchIntMed 2006 166 2138 2144 一项单中心 前瞻性研究 对95例罹患医院MRSA感染的住院或住护理院的老年患者静脉滴注万古霉素 对临床疗效 死亡率 肾毒性进行评价 到达目标 万古霉素血浆谷浓度达到15 20 g mL 治疗反应 患者发热 白细胞增多症状部分或完全缓解 治疗反应 P 0 02 85 62 总体 MIC 1 MIC 2 Fresno11 00 14 耐青霉素肺炎链球菌的检测 苯唑西林 1ug 片抑菌圈直径 20mm为青霉素敏感株 MIC 0 06ug ml 抑菌圈直径 19mm可能为青霉素耐药 中敏或敏感株 必须进行青霉素MIC测定 Fresno11 00 15 肺炎链球菌对青霉素药敏试验的判断标准 mcg ml Fresno11 00 16 对于三个青霉素的判断标准我们都应该解释和报告吗 Fresno11 00 17 不可能出现的药敏结果 同一株细菌不可能出现的矛盾的药敏结果金葡菌 青霉素S 苯唑西林R 万古霉素R肠球菌 万古霉素S 替考拉宁R肠杆菌科细菌 第三代头孢菌素R 第二 第一代SCLSI附录E AppendixE 指出的少见或罕见的结果如遇到上述菌株必须重新鉴定细菌和药敏 Fresno11 00 18 2010CLSI主要更新内容 肠杆菌科相关的更新葡萄球菌属相关的更新其他菌种相关的更新表1和表2介绍内容中的更新 Fresno11 00 19 2010CLSI主要更新内容 主要格式的更新关于药敏质控的更新 新增Doripenem等质控范围 关于药敏试验操作的更新脆弱拟杆菌的累积药敏报告术语表的更新 新的抗生素亚组 抗MRSA活性的头孢菌素 Fresno11 00 20 肠杆菌科新旧折点 MICug l Fresno11 00 21 肠杆菌科新旧折点 纸片扩散法 mm 纸片扩散法折点标准还未建立CLSIM100CLSIM100 S20 Table2A Fresno11 00 22 已评估但未修正的肠杆菌科药敏折点 CLSIM100CLSIM100 S20 Table2A Fresno11 00 23 为什么CLSI降低了头孢菌素及氨曲南的折点 以前的折点标准建立于20年前 ESBLs以前 老的和新的 内酰胺酶耐药机制等相关知识的增加 ESBL问题的复杂化 多种酶导致ESBL检测的准确性降低新的建立折点标准工具的出现 PK PD知识的增加 Fresno11 00 24 为什么头孢唑啉没有纸片扩散法折点 修订的MIC折点与相关的抑菌圈直径标准尚未确立需要进一步的研究可能需要使用一种改变含药剂型的新型纸片 Fresno11 00 25 ESBLs检测 1 最初的建议 是基于 研究观察到某些产ESBLs菌株 药物的MICs有升高但仍然在敏感区 旧折点 有限的临床观察发现 对于产ESBLs菌株引起的感染 病人预后差 ESBLs试验建议是处理一个新型耐药机制的短期解决方案 Fresno11 00 26 ESBLs检测 2 多重耐药机制的出现可能会使ESBL确证实验受阻 ESBL AmpC ESBL 孔蛋白突变 ESBLs产生于肠杆菌科细菌 而不仅仅是大肠埃希菌 克雷伯菌属和奇异变形杆菌 对于其他的菌株确证实验则存在许多问题与 R 机制相比 MIC与临床预后具有更好的相关性 Fresno11 00 27 CLSIESBL检测建议 Fresno11 00 28 未被CLSI重新评估的折点头孢孟多头孢尼西头孢哌酮拉氧头孢 在USA这些药物通常是不可行的或为被使用假如使用这些药物的话 我们必须继续在大肠埃希菌 克雷伯菌属和变形杆菌中做ESBL初筛及确证实验 ESBL阳性 将头孢菌素类 青霉素类和氨曲南等药物 S 修改为 R Fresno11 00 29 MRS的结果报告原则 MRSA和MRCNS菌株对 内酰胺类药物 如青霉素类 内酰胺 内酰胺酶抑制剂 头孢类 除外新型的有抗MRSA活性的头孢菌素 如Ceftaroline Ceftobiprole 以及碳青霉烯类体外敏感但临床无效 均需报告为耐药 葡萄球菌属相关的更新 Fresno11 00 30 增加的 MRSA的定义 MRSA是指表达mecA基因或其它甲氧西林耐药机制 如青霉素结合蛋白对苯唑西林亲和力改变等 的金黄色葡萄球菌CLSIM100CLSIM100 S20 pp 60 MRSA 表达mecA基因和 或苯唑西林MIC 2 g ml Fresno11 00 31 金黄色葡萄球菌或路登葡萄球菌检测苯唑西林 OX 和头孢西丁 FOX 头孢西丁被作为苯唑西林耐药的替代药物 报告苯唑西林敏感或耐药是基于头孢西丁的结果 假如头孢西丁和苯唑西林都被用于测定金黄色葡萄球菌或路登葡萄球菌 那么两种药物中任一种耐药 该菌株即应被报告为对苯唑西林耐药 CLSIM100CLSIM100 S20 pp 62 Fresno11 00 32 金黄色葡萄球菌或路登葡萄球菌检测苯唑西林 OX 和头孢西丁 FOX Fresno11 00 33 葡萄球菌属 诱导性 内酰胺酶试验 青霉素MIC 0 12mg L抑菌圈直径 29mm诱导性 内酰胺酶试验对于严重感染 随后分离出的菌株 实验室应进行青霉素的MIC检测和 内酰胺酶诱导试验 Fresno11 00 34 内酰胺酶的诱导试验 苯唑西林 诱导剂 菌种划线 BAP MHA 贴 内酰胺类纸片 OXA FOX 过夜培养检测抑菌圈边缘的菌落 葡萄球菌属青霉素MIC 0 12mg L抑菌圈直径 29mm Fresno11 00 35 葡萄球菌属 D试验 15 26mmerm基因编码的23SrRNA甲基化报告评论 由于克林霉素诱导耐药试验阳性 推测此菌株对克林霉素耐药 但在少数患者治疗中克林霉素可能仍有效 Fresno11 00 36 修订的建议 Re 万古霉素MIC 什么时候葡萄球菌应该被送到一个参考实验室做进一步检测 金黄色葡萄球菌 MIC4 g ml Maybe MIC 8 g ml Yes 凝固酶阴性葡萄球菌 CoNS MIC 32 g ml Yes Fresno11 00 37 葡萄球菌属 利奈唑胺增加的 R 折点 对利奈唑胺不敏感的的金葡较少 占0 05 7 15280 CLSIagendabookJune2009 耐药机制已被识别 rRNA突变和cfe基因介导的耐药 其可被质粒编码 Mendesetal 2008 AntimicrobAgentsChemother 52 2244 Fresno11 00 38 溶血性链球菌组群 青霉素 S 可预报所列 内酰胺药物的结果适用于 溶血链球菌 大菌落 CLSIM100CLSIM100 S20 pp 93 Fresno11 00 39 删除的 链球菌属草绿色链球菌青霉素结果的外推 5 对青霉素敏感的链球菌可认为其对氨苄西林 阿莫西林 氨苄西林 阿莫西林 阿莫西林 克拉维酸 阿莫西林 舒巴坦 头孢克罗 头孢唑林 头孢地尼 头孢吡肟 头孢丙烯 头孢噻肟 头孢布烯 仅A群 头孢曲松 头孢呋辛 头孢泊肟 头孢拉定 头孢唑肟 头孢噻吩 头孢匹林 亚胺培南 厄他培南 氯碳头孢和美罗培南敏感 不需要测定这些药物 CLSIM100CLSIM100 S19S19 pp 81 删除 Fresno11 00 40 为什么注释re被删除 从草绿色链球菌的青霉素结果外推其他的 内酰胺类药物结果 尽管罕见 但已证实青霉素和头孢菌素类药物之间缺乏交叉敏感性 近来的交叉敏感性数据不多 许多草绿色链球菌对 内酰胺类药物不敏感 大多数草绿色链球菌AST检测来自于严重的感染 需要测定MIC值 需要可靠的数据 草绿色链