肿瘤诊断ppt课件.ppt

肿瘤的分子诊断MolecularDiagnosisofTumor 1 What smoleculardiagnosistumor 2 病理切片和影像扫描 3 4 5 肿瘤的分子诊断MolecularDiagnosisofTumor 6 一 肿瘤的分子诊断的目的与意义Purpose MeaningofMolecularDiagnosisofTumor 7 患家族性腺瘤性息肉瘤发现APC基因 乳腺癌 卵巢癌的BRCA1 2 3 70基因等 反向遗传学 reversegenetics 由基因的遗传连锁图分析 找到致病基因在特定染色体上的准确位置 经典遗传学 classicalgenetics 由疾病的表型改变去追溯有无肿瘤易感基因存在 8 9 2 早期诊断 Early stagediagnosisoftumor 寻找肿瘤的早期诊断的分子靶点 10 11 主要肿瘤的常用的多标志组合恶性肿瘤主要标志其他标志前列腺癌PSAf PSA PAP ALP CEA TPS乳腺癌CA15 3CEA CA549 CA72 4 hCG LASA erb B2子宫颈癌SCCCA125 CEA TPA直结肠癌CEACA19 9 CA72 4 NSE胃癌CA72 4CA19 9 CA50 CEA 铁蛋白 SA CA242原发性肝癌AFP GT ALP TPS GST肺癌NSEACTH 降钙素 CA72 4 CEA 铁蛋白 LASA淋巴瘤 2MKi 67 LASA LD2黑色素瘤黑色素瘤抗原NSE LASA 血儿茶酚胺 L 多巴脑胶质瘤VMAHVA NSE 铁蛋白 甲基卟啉卵巢癌CA125CA19 9 CEA TPS AFP LD hCG 胰腺癌CA19 9CA242 CA50 CA72 4 CEA ALP膀胱癌无CEA TPA 12 3 肿瘤分类 Classificationoftumor 13 WHO提出在传统病理学分型 分类的基础上 进行分子水平的分型 启动了肿瘤分子学分型工程 用分子生物学的检测技术对肿瘤进行分类 分型 能更准确地提供诊断 鉴别诊断和预后判断 染色体的t 15 17 易位的检测 区分M3型白血病 Bcr Abl基因检测 可确诊CML型白血病 14 4 预后监测 Prognosticinspectoftumor 对血液 痰液 尿液等进行监测 可较早判断肿瘤的复发和转移 15 一 过表达或低表达 Overexpressivityofgene 肿瘤细胞内癌基因过表达和抑癌基因低表达或突变后过表达 二 肿瘤的分子诊断依据 16 转录水平检测多拷贝基因使其转录增多 表现出mRNA过表达或突变体 17 18 1 点突变 Pointmutation 人类大部分的肿瘤几乎都存在相关基因的点突变 ForExample 肺癌 膀胱癌 结直肠癌 胃癌 乳腺癌 胆囊癌 胰腺癌等存在H Ras K Ras N Ras的12 13 61编码子的已知点突变 19 20 21 3 基因易位或重排易位或重排使目的基因与它的调控基因出现位置上分离 导致目的基因表达异常 使细胞恶变 ForExample B淋巴瘤 由于其Bcl 1断裂点发生t 11 14 q13 q32 易位 CyclinD1基因受到IgH启动子控制 IgH位于14号染色体 导致CyclinD1基因的过表达 导致细胞癌变 对基因易位或重排检测将有助于肿瘤的诊断和生物学分型 22 23 3 异常甲基化检测意义检测异常甲基化的启动子作为肿瘤标志物 2 异常甲基化导致基因表达失常的机制 低甲基化可使受抑制的癌基因过表达 增加了整个基因组的不稳定性 过甲基化可使抑癌基因的表达失活和蛋白质表达丧失 类似于突变所造成的基因功能丧失 甲基化的CpG位点是突变热点和易发点 Mutanthotspots 5 甲基胞嘧啶的嘧啶环4位脱氨基转变成胸腺嘧啶 24 四 肿瘤的分子诊断技术DetectionmethodsinvolvedintheMDT 25 1 基因的检测技术 基因点突变检测 Genepointmutation 基因缺失 易位检测 Geneloses translocation 基因过表达检测 Overexpressivityofgene 一 传统检测方法 Methodoftraditionaldetection 26 1 基因点突变检测 Genepointmutation 已知有义点突变检测 一直是肿瘤分子生物学检测的主要研究对象 等位基因特异性寡核苷酸分析 ASO 一种建立于基因杂交基础之上的已知点突变检测技术 27 ASO检测原理 28 PCR SSCP法 PCR 单链构型多态性检测 利用基因突变后 其单链DNA的二级结构发生改变 这样在非变性聚丙酰胺凝胶 5 6 电泳时会出现迁移率改变 29 荧光共振能量转移探针结合融合曲线分析 FluorescenceResonanceEnergyTransfer FRET 检测探针与靶DNA杂交后 根据杂交结合物的解链温度 Tm 的差异进行基因点突变的实时监测 并结合荧光融合曲线分析 提高点突变的检测分辨率 50 52 30 DNA序列分析 DNAsequencing 利用双脱氧终止法进行碱基序列分析 肿瘤DNA的核苷酸序列测定后 再与正常DNA序列进行比较 以确定突变的类型和突变的位置 31 染色体Giemsa染色分析采集新鲜的肿瘤组织 经短期培养后用秋水仙素处理 使细胞停留在有丝分裂中期 收集细胞 制片后经10 Giemsa染色显带 进行G带分析 染色体核型 单倍体 异倍体 缺失 重排 易位 倒位 插入等 32 荧光原位杂交 Fiuorescenceinsituhybridization FISH 荧光素标记核苷酸制被探针 通过原位杂交检测目的靶DNA存在的一种分子检测技术 33 FISH最大的优点 可以检测染色体结构异常和靶基因定位 可用于新鲜组织 也可用于固定组织的石蜡包埋切片 能用于有丝分裂中期细胞和间期细胞检测 具有较强的特异性 稳定性和无污染 34 35 Normal 36 N N N D H N H D 1 W 2 W 36 粒 33 粒 18 粒 35 粒 12 粒 29 粒 37 38 Westernblot 39 ELISA检测仪器 40 三 组学检测技术 生物芯片技术 TechniqueofDNAchip 生物芯片或微阵列技术是指在一小片 或微粒 固相载体上储存大量的生物信息 并形成高通量的检测技术 41 42 43 44 Wen用DNA芯片和DNA序列分析两种技术对108例卵巢癌p53基因突变进行检测 并比较两种技术的效率 敏感性 其中57例突变被两种方法同时检出 一致率为81 另外14例被芯片检出 但有6例由测序检出 45 2 蛋白质组检测技术 血清学检测 蛋白质组技术与血清学研究相结合 应