无菌生产管理和验证ppt课件.pptx

无菌生产管理和验证 1 内容 简介无菌生产管理要点无菌生产设备和工艺验证关键设备验证液体除菌过滤工艺培养基模拟灌装试验无菌生产新技术热点问题探讨小结 2 一 简介 无菌生产工艺 非最终灭菌产品部分或全部工序采用无菌生产工艺的为非最终灭菌产品通过对生产用的原料 环境 设备和人员加以控制和管理 以实现对微生物和微粒子数的监控 在此受控的条件下进行的无菌药品的生产 国际公认无菌生产工艺的一般SAL为10 3 无菌冻干粉针工艺无菌分装粉针工艺 3 非最终灭菌产品的无菌保证示意图 以粉针剂为例 原料 混合 灌装 成品 规格 无菌 无菌操作环境 1cfu m3 无菌操作环境 1cfu m3 西林瓶 灭菌后 无菌 无菌乳糖 模拟试验无菌确认5000袋以上 阳性0袋 1 10 3 无菌保证水平1 10 3 对于冻干产品 溶液的除菌过滤是产品无菌保证的关键工艺 4 二 生产管理要点 环境和人员监测无菌生产用物料处理和传递小结 5 1 环境和人员监测 环境和人员监测洁净级别标准无菌区人员的更衣确认和监测环境监测 6 洁净级别及标准 新版GMP 2010修订 和EU GMP WHO GMP2010建议稿标准一致 7 洁净级别及标准 8 微生物控制动态标准 无菌区人员更衣确认和监测 每个手套 5只手指 胸口处 衣帽结合处 帽兜额头处 靴子与工作裤接口处 前臂 无菌区人员更衣确认和监测 9 其它事项每个受训者必须经过3次更衣试验确认合格后才能进入无菌操作区 资格确认合格的操作员工每年需重复一次更衣试验 当有已确认合格的人员有违反更衣程序趋向时 须重复l 3次更衣试验 连续3次监测不合格人员 取消相关资质 需重新培训和进行更衣验证 在连续10次监测中 如有4次不合格的人员 取消相关资质 需重新培训和进行更衣验证 无菌区人员监测合格标准 无菌区人员更衣确认和监测 10 环境监测案例 11 环境监测案例 12 2 无菌生产物料处理和传递 无菌生产用物料处理和传递胶塞的处理和传递铝盖的处理和轧盖方式其他物品 13 胶塞处理 处理方法一胶塞清洗 硅化和灭菌分别处理 在胶塞清洗设备内用清洗剂CIP100 PW和WFI对胶塞进行清洗和硅化处理 再用WFI漂洗去除颗粒 之后用过滤无菌无油压缩空气吹干 在胶塞清洗机出口在A级 100级单向流 净化空气保护下对清洗吹干后的胶塞进行双层呼吸袋的无菌包装 分装好的胶塞进行经过121 30分钟纯蒸汽灭菌和真空干燥至水分标准 湿热灭菌后直接进入B级生产区 胶塞处理设备可采用清洗机 灭菌机两台设备或清洗后取出装袋 然后仍然放入设备灭菌的清洗灭菌两用设备 14 胶塞处理 处理方法二胶塞清洗 硅化和灭菌在同一设备内用清洗剂CIP100 PW和WFI对胶塞进行清洗和硅化处理 并经过121 30分钟纯蒸汽灭菌和真空干燥至水分标准 经洗涤灭菌处理后的胶塞在A级 100级单向流 洁净空气的保护下出箱 并分装于经过湿热灭菌处理的 无菌专用胶塞密封容器中 并将容器放置在胶塞暂存室内 在验证的保存有效期内待用 处理后的无菌胶塞在取出操作时 必须确认设备入口门处于在关闭状态 设备内压力和温度回复到常温常压 同时应确认层流罩在开启后层流稳定状态下 层流罩开启后的时间需经过验证确定 方可打开设备出口门 Rubberstoppersarewashedsterilized driedandsealedintobags已灭菌干燥的胶塞在层流下封入袋子 15 胶塞的转运 1 呼吸袋法将双层呼吸袋包装好的已灭菌胶塞用普通不锈钢小车运输至分装机的RABS旁 在分装机的RABS胶塞缓冲区去第一层外包装后进入RABS 在RABS内开第二层内包装 通过物料口用手套管操作 将胶塞导入胶塞料斗中 16 胶塞的转运 2 清洗 灭菌 干燥处理 无菌转移 胶塞清洗胶塞灭菌层流小车灌装半压塞 层流小车法 17 胶塞的转运 3 同一容器清洗 灭菌 无菌转移胶塞贮罐经过在线清洗 CIP 和在线灭菌 SIP 后 使用专用的无菌胶塞贮罐输送 操作人员将无菌胶塞贮罐 灭菌容器 向灌装机搬运 并与灌装机的层流隔离装置连接 18 方法3的关键连接部件 RTP 19 带RTP接口的容器 方法3的关键连接部件 RTP 20 轧盖方式 EU GMP明确两种轧盖的方式 一种是用无菌铝盖的标准无菌操作方式 B级下的A级 另一种是只需提供A级单向流空气的洁净操作方式 在无菌灌装区域内保持B级下的A级 轧盖区域允许C级下的A级 EU规定 最低可以D A 21 轧盖方式 新版GMP无菌药品第十三条规定 和欧盟GMP一致需要注意的是轧盖前产品视为未完全密封状态 根据已压塞产品的密封性 轧盖设备的设计 铝盖的特性等因素 轧盖操作可选择在C级或D级背景下的A级送风环境中进行 A级送风环境应当至少符合A级区的静态要求 轧盖前的转运是否要求 B A 企业视产品密封性决定 因轧盖能产生粒子 小瓶轧盖设备应设单独的操作室 建议增加层流避免争议 22 铝盖处理 无菌轧盖工艺 铝盖必须灭菌铝盖是否需要清洗 铝盖转运通常铝盖生产的最后清洗和包装应在D级区铝盖在使用过程中产生大量微粒多次清洗会增加对铝盖表面涂层的伤害轧盖区的特殊设计非无菌轧盖工艺 铝盖不必灭菌 23 轧盖工艺的设置 第三十五条轧盖会产生大量微粒 应当设置单独的轧盖区域并设置适当的抽风装置 不单独设置轧盖区域的 应当能够证明轧盖操作对产品质量没有不利影响 24 其他设备 物品处理 生产设备 尽可能采用CIP SIP的方法采用拆卸手工清洗 灭菌 转运 组装工器具 清洗灭菌后使用层流小车 清洗后双层呼吸袋包装 灭菌 拆包使用思考题 湿热灭菌 干热灭菌在无菌生产中的运用 对于无菌生产工艺 干热灭菌柜是否必须 25 FDA无菌药品指南建议 FDAAsepticGuideline 2004Anyinterventionorstoppageduringanasepticprocesscanincreasetheriskofcontamination Ratherthanperforminganasepticconnection sterilizingthepreassembledconnectionusingsterilize in place SIP technologyalsocaneliminateasignificantasepticmanipulation Toensuresterilityofproductcontactsurfacesfromthestartofeachoperation theentirepathofthesterileprocessingstreamshouldbesterilized Itisexpectedthatmaterialsthatpermitheatsterilization e g SIP willberenderedsterilebysuchmethods Wheredecontaminationmethodsareusedtorendercertainproductcontactsurfacesfreeofviableorganisms aminimumofasix logreductionshouldbedemonstratedusingasuitablebiologicalindicator 由无菌工艺生产的无菌药品指南 2004无菌工艺的中断会导致污染风险的增加 减少无菌操作的另一个有价值的例子是对预先组装的连接进行在线灭菌以替代无菌连接 为确保接触产品的表面自每次运行开始起即处于无菌状态 应将整个无菌工艺的通道灭菌 能经受在线灭菌的材料 一般采用热力灭菌法 比如SIP 当接触产品的表面用这类方法灭菌时 应使用适当的生物指示剂 证明达到了至少下降6个对数单位的要求 26 小结 第五十九条无菌生产所用的包装材料 容器 设备和任何其它物品都应当灭菌 并通过双扉灭菌柜进入无菌生产区 或以其它方式进入无菌生产区 但应当避免引入污染 注意正确理解 无菌生产区 并不是真正的无菌 灭菌范围 应该是直接用于无菌生产的物料 物品 而不是广义上的生产所用 比如记录 文件 测试仪器 工作人员等无菌保证体系的建立 特别是 操作人员的技能 行为习惯培训 27 三 无菌生产验证 验证要点介绍 工艺验证原理关键设备验证隧道烘箱冻干机关键工艺验证CIP SIP验证灭菌工艺验证 BI试验 容器密封性验证除菌过滤工艺培养基模拟灌装补充 气体除菌过滤器 28 洗瓶 湿热灭菌 轧盖 贴签包装 灌装 冻干 无菌冻干粉针工艺验证范围 灌装 除菌过滤 配液 干热灭菌 目检 29 洗瓶有强排风除湿 预热段有弱排风除湿 影响洁净室间的压差 运行时洁净区对机房压差不能大 否则难以达到高温 关机时洁净区对机应有正压 保持洁净室洁净度 因此 洁净区送风须随设备运行状态调整 手段 自动补偿或风门联锁 湿汽 瓶子流向 HCB HCE 隧道式洗瓶灭菌柜工作原理图 湿汽 热空气 HEPAFilter 30 隧道烘箱的确认和验证 通常应包括 高效过滤器的检漏 PAO 试验过滤器出口风速确认隧道烘箱内洁净度确认各区域压差确认灭菌程序设定 灭菌温度和传送带速度的确认空载热分布的验证热穿透细菌内毒素挑战试验微生物挑战性试验 31 干热灭菌参照温度 干热灭菌中孢子的D值是变化的干热灭菌温度分布均一性及穿透性均不如湿热灭菌国际上以121 为标准灭菌温度 相应时间以Fo表示 干热灭菌一般取170 为参照温度 相应灭菌时间以FH表示中国药典2005版中规定的是一幅度 160 170 2小时以上 170 180 1小时以上 250 45分钟以上 32 各国药典干热灭菌条件对比 33 FH在干热灭菌中的计算 取170 作为参照温度 该温度下灭菌时间用FH表示 在180 下灭菌30分钟时 可按下式计算其FH值 Z取20 L FH FT DH DT 10 T 170 20FH F180 10 180 170 20FH 30 3 162 94 86分结论 180 下灭菌30分钟 相当于170 下灭菌95分钟 34 去热原标准 中国药典灭菌法 250 45分钟以上 在340 去热原时 达到同样结果需多少分钟 L FH FT DH DT 10 340 250 54 46 41340 下1分钟相当于250 下46 41分钟结论 340 不到1分钟 即可达到250 45分钟的效果 Z也可由供货商提供 如46 4 不一定为54 35 FH在去热原中的计算 1 去热原中Z取54 如在340 下曝热0 5分钟 试计算FH FH F340 10 340 170 54FH 103 148 0 5FH 703分钟 11 7小时 结论 340 灭菌0 5分可达到170 下11 7小时的去热原效果 36 FH在去热原中的计算 2 去热原中Z取54 如在320 下暴热0 5分钟 试计算FH FH F320 10 320 170 54FH 102 78 0 5FH 301分钟 5小时 结论 320 暴热0 5分可达到170 下5小时的去热原效果经验值 FH大于1000时 细菌内毒素可下降3对数单位 37 干热灭菌与去热原的关系 去热原工艺条件比孢子杀灭程序要苛刻得多 通常相当于标准干热灭菌时间FH的数十倍 如果干热法去热原工艺能使细菌内毒素下降3个对数单位 就不必再进行微生物的生物指示剂挑战性试验 38 隧道烘箱的验证 空载热分布目的 确认温度分布的均一性方法至少16支热电偶探头探头位置 西林瓶高度使用自动数据采集仪到达设定温度时 启动输送带数据采集频率 10秒到30秒一次为宜合格标准隧道灭菌温度差不超过 20 温度传感器 39 隧道烘箱的验证 热穿透试验方法通常 隧道烘箱灭菌的最差位置在第一排 最后一排 输送带边缘以及中间堆放密度高的容器中 至少16支热电偶探头按上图布置探头放置在容器中 并接触容器 以确保测定的温度是容器表面温度 而不是空气的温度 由于气流很容易为灭菌瓶体所阻挡 瓶体本身的最低点通常是热穿透效果最差的位置 因此热穿透数据能够真实反映出冷点的灭菌情况 采用数据采集仪收集灭菌温度数据 40 隧道烘箱的验证 内毒素挑战试验 去热原工艺生物指示剂 大肠埃希菌内毒素 Escherichiacoliendotoxin 内毒素量 不低于1000单位使用前需要测定复核可使用直接采购的内毒素挑战测试管 也可自制放置位置 冷点位置 升温最慢区域 每个点2个样品 合格标准 经灭菌后 内毒素至少下降3个对数单位 数量级为103级 用于干热烘箱除去细菌内毒素 热原 验证的生物活性指示剂 41 冻干系统主要组成及其确认 干燥箱及搁板真空冷凝器制冷系统热传导系统真空系统仪表自控系统等6个部分组成需在供货商指导下 对各系统进行确认 42 冻干设备功能确认 最低温度 75 二级干燥条件 30 高真空 1Pa与冻干箱温差 约 50 与冻干箱压差 25pa程序结束 P 30 Hg 3分 在10 3mbar真空下冻干 并能在121 下灭菌 搁板各点以及搁板之间的温差 1 温度范围为 55 80 最大压力 1 6MPa最高温度 125 43 1 干燥箱及搁板确认 箱体上的连接口包括 冷凝器 导热媒体管道进出口 空气或氮气进口 排水口 真空仪表传感器探头 验证用操作孔等 箱体底板应自然倾斜 排水口可靠近箱门 并设置一个可拆卸的水过滤器 搁板两侧和后面应设置挡轨 以避免制品脱离搁板 搁板宜采用特殊空心夹板 强度高 密封性好 板层内部的导热媒体循环管 管道长度要均等 确保板层温度的均匀性 在长期热胀冷缩的工作条件下 不变形 不渗漏 其升降系统便于西林瓶压塞和装料及托盘冻干进出料 升降机构出入于箱体内部活塞或螺杆 应能灭菌 44 2 真空冷凝器确认 它位于干燥腔室的后方 配有窥视镜便于观察 每一组盘管分别单独与一台压缩机连接 增加干燥过程的安全性和灵活性 它应有冷却盘管制冷剂的进出口 蒸汽进口 压力 安全阀接口 凝结 化霜水排放口 真空管 真空计接口 在线灭菌气体入口 验证孔 冷却盘管 45 3 制冷系统确认 冻干机制冷方式 传统制冷系统 略 单一制冷系统 略 三重制冷系统真空冷凝器保温性能好 冻干箱搁板层冻结 升温及冷阱在冻干过程中协调运行 抗故障能力强 46 3 制冷系统确认 三重热交换 板式冷凝器 RL 3016BS 结冰状态 47 3 制冷系统确认 压缩机系统的每台制冷压缩机都应有液体中间冷却器和自动温控装置 每一组压缩机都连接 配以阀门和单独控制的系统 每台制冷压缩机的下方都应配置一个不锈钢的凝结水托盘 从而使压缩机上的凝冰融化后经托盘排走 避免损害下部机件 制冷效果 空载搁板最低温度应 50 冷凝器最低温度应 75 48 4 热传导系统确认 搁板的温度控制可通过调节媒体加热系统和压缩机组的开关完成 同一层搁板上各点 搁板与搁板之间的温度分布梯度应小于 1 搁板的温度适应范围为 55 80 49 5 真空控制 标准 整机真空泄漏率应低于1 10 2bar L Sec 通常用渗气法和调节阀门控制系统的真空 通过进气阀门引入定量的空气或氮气到干燥箱体内 使腔室内压力能控制在设定的范围以内应设置引入气体的除菌过滤装置 控制气体中的微生物 50 6 仪表自控系统确认 控制系统应具有冻干曲线设定 除霜 灭菌 在线清洗 真空控制 干燥状态检测 故障报警和维修检查的功能 系统使用界面包括 系统内所有部件的运行状况 接受操作信息及报警 控制冻干周期的参数 处理和存储操作数据 提供冻干过程报告 排除可能发生的误操作 防止未被受权的人员操作系统 控制系统应可预置和修改产品曲线 51 液体除菌过滤 过滤器的工作原理过滤器的选择与确认细菌截留试验完整性测试灭菌基于PDATR26 2008修订 52 除菌过滤基本概念 0 2 0 22 m 估测细菌截留能力的有限指标细菌截留能力的定义除菌级过滤器在工艺条件下 每平方厘米的有效过滤面积中 能够拦截107cfu 菌落形成单位 个缺陷短波单胞菌 ATCC19146 的过滤器 53 液体过滤的原理 过滤流体通道经过多孔材料而实现颗粒的去除驱动力能够产生压差或压力降的压力或真空源相的分离固相 液相 54 液体过滤的截留机理 截留颗粒和微生物保留在表面 并通过下列力学效应被包埋在过滤矩阵中 尺寸排除 分子筛截留 物理捕获 直接拦截过滤器的效率过滤器截留颗粒的能力如果颗粒的尺寸大于孔径 则100 保留只要压力不会使颗粒或空隙变形 则具有独立的压差 55 过滤器的选择与确认 典型的无菌级别的膜材料 56 过滤器的选择与确认 根据应用进行选择 例如LVP SVP注射物眼科疫苗血液制品抗生素抗体培养基缓冲溶液 选择的因素 例如流速总的产量收率化学兼容性细菌截留过滤器的洁净度 如脱落 溶出物 57 过滤器的选择与确认 确认和验证建议 L 批放行标准Q 确认V 针对具体工艺的验证E 对测试需要的评估 58 过滤器的选择与确认 确认和验证建议 L 批放行标准Q 确认V 针对具体工艺的验证E 对测试需要的评估 59 非特异性 测量总的析出物 滤出物TOC 总有机碳NVR 不挥发残留物特异性 检测 分类 确定 量化单一化合物HPLC 高效液相色谱GC 气相色谱FTIR 傅里叶变换红外光谱LC MS 液 质联用GC MS 气 质联用 常用分析方法 60 细菌截留试验 除菌过滤是一种能够去除流体中微生物 而不对产品造成影响的工艺 所有灭菌过滤膜的比较 ASTMF838 05标准技术规范 确定细菌截留的标准微生物 缺陷型假单胞菌ATCC19146 最小浓度107cfu cm2 61 细菌截留试验 影响因素 62 细菌截留试验方法 1 直接接种法2 改进法有时也称为 间接法二步法再循环法 63 细菌截留试验 直接法 直接接种测试 微生物活性 缺陷短波单胞菌 挑战的微生物 测试膜 泵 滤液的微生物分析 64 细菌截留试验 间接法 微生物活性 否 调整产品 工艺 过滤器预处理 缺陷短波单胞菌 挑战的微生物 泵 测试滤膜 抗生素防腐剂温度pH 1 2 滤液的微生物分析 65 过滤器的完整性试验 过滤器 压力表 调压阀 Bubbles 气源 泡点BubblePoint前进流ForwardFlow压力维持PressureHold 三类完整性检测方法的原理类似 基于特定压力条件下气体穿透润湿滤膜的物理现象 66 完整性测试仪 完整性测试仪 67 完整性测试仪 68 什么时候需要完整性试验 当过滤器用作除菌过滤时 使用后 完整性试验必须做 使用前 根据实际情况而定 69 过滤器的灭菌 灭菌方法 蒸汽灭菌高压灭菌在线灭菌 SIP 辐照灭菌气体灭菌 每个灭菌过程都必须对其预定目的进行验证考虑对过滤性能的影响完整性稳定性析出物和滤出物灭菌后的完整性测试确认过滤器在灭菌过程中没有被损坏 70 培养基灌装模拟试验简介培养基模拟灌装试验考虑因素污染分析 71 简介 1 培养基模拟灌装试验 ProcessSimulationTest 使用培养基作为药品的替代品 placebo 进行无菌模拟生产 对无菌生产工艺进行验证 在某种意义上是挑战性试验 因为几乎在所有情况下 微生物在培养基中的生长和繁殖要比实际产品中更容易 2 全面反映整个生产过程采用无菌生产工艺生产无菌产品的能力 3 各国药品法规要求的基本内容 72 培养基模拟灌装试验考虑因素 试验的数量和频率培养基 产品的替代品 灌装的数量容器 玻璃瓶 体积灌装体积生产速度 或灌装速度 灌装过程的持续时间工作班次监测措施干预措施 常规的和非常规的培养方法可接受标准 73 培养基和培养温度的选择 培养基选择注意事项 适应广谱微生物生长 包括细菌和真菌较好的澄明度 较小的粘度易于除菌过滤通常采用经 射线灭菌的培养基常用培养基 3 大豆胰蛋白肉汤 TSB 大豆消化酪素琼脂培养基 SCD 厌氧培养基仅在特殊情况下使用 如果产品在缺氧条件 通常在氮气保护下灌装时 需要考虑使用厌氧培养基 液体硫乙醇酸盐培养基 FTM 74 培养基和培养温度的选择 注意点如果培养基中含有动物源性成分 可能导致朊蛋白污染 那么 培养基供应商能够提供证明 确认相关物质来源于没有牛海绵状脑病 BSE free 的国家 另外 可以使用从植物中提取的TSB培养基 SDC粉末可能受到支原体的污染 并且无法在无菌过滤中去除 因此 可以先对粉末进行灭菌 使用 射线 培养温度FDA 20 35 目标值 2 5 不少于14天 如选择两个温度 则每一温度下至少培养7天 从低温开始 PIC 20 25 下至少14天 或 先20 25 下7天 然后30 35 下7天 75 待培养产品的放置方式正常放置倒置两种方式的兼顾培养箱 培养房间的验证空载热分布满载热分布培养过程中的温度监控培养时间的控制 76 灌装体积与数量 灌装体积每只容器灌装体积不少于容积的1 3 也不宜过大 也需考虑保留25 40 的顶空确保存在的微生物有足够的氧气生长 既要考虑到瓶倒转或旋转时 培养基能充分接触到容器和密封件的内表面 又要保证容器内有足够的氧气支持微生物生长 灌封数量综合考虑统计学要求和实际生产批量 FDA和中国GMP 5000瓶 如果正常生产的批次量低于5000瓶 则取实际生产的最大批次量 PIC 3000瓶 如果正常生产的批次量低于3000瓶 则取实际生产线的最大批次量 77 灌封时间与批次量控制 灌装时间对于初始性验证 培养基灌封实验应安排在一周内的不同时间进行 对于再验证 可选择在一周结束或其它最差条件下进行 灌封时间要涵盖实际生产班次 批次量控制初次验证 至少要连续成功灌封3个批次 再验证至少需要成功灌封1个批次 78 操作及注意事项 药液 培养基 除菌过滤 无菌灌装 部分冻干程序 轧盖容器内灌封好培养基 以半压塞状态装入冻干机冻干机部分抽真空 500mbar 在室温放置一定的时间 不得冷冻 用无菌空气破真空 不使用惰性气体 全压塞轧盖注意 如果所使用的容器透明度不高 应将内容物倒出进行检查 79 培养基灌装试验频率 无菌药品 第47条培养基模拟灌装试验的首次验证 每班次应当连续进行3次合格试验 空气净化系统 设备 生产工艺及人员重大变更后 应当重复进行培养基模拟灌装试验 需要连续3批试验常规生产条件下的再验证 培养基模拟灌装试验通常应当按照生产工艺每班次半年进行1次 每次至少一批 注 所有生产人员 包括环境监测人员等 应参与培养基灌装试验 80 培养基灌装试验合格标准 中国GMP 2010 和FDA EU WHO采用同样的标准 无菌药品 第48条规定 培养基灌装容器的数量应足以保证评价的有效性 对于小批量产品而言 培养基灌装数量应至少等于产品批次量 目标是不长菌并遵循以下原则 灌装少于5000支时 不应检出污染品灌装在5000至10000时 有1支污染需进行调查 并考虑重复培养基灌装试验 2支污染需进行调查 并可即视作再验证的理由灌装超过10000支时 1支污染需进行调查 2支污染需进行调查 并可即视作再验证的理由 81 原标准 可信限为95 污染概率分布表 82 培养基适应性检查 应符合培养基的无菌性检查和灵敏度检查要求 应用药典规定的标准微生物或工厂特定微生物 分离来自环境人员监测或无菌试验 来试验 加入菌液应小于100CFU 单位 结果判定 空白对照管应无菌生长 加菌的培养基管均生产良好 83 培养基阳性对照试验 选取灌装的培养基样品 按照药典要求 常用枯草芽孢杆菌 白色念珠菌或工厂分离菌作为阳性菌 每个菌种准备含 100CFU 0 1ml的菌液 每个菌种接种2支培养基样品 同时并平板计数 双份 对真菌在20 25 培养 对细菌在30 35 下培养 5天内需有生长迹象 通常情况下 在14天培养结束后 一些玻璃瓶 从生产开始 中间 结束时取样 进行微生物接种 接种量 100CFU 分别培养3天 细菌 和5天 酵母菌和霉菌 84 发生失败 污染 时 必须确定最根本的原因 或者至少是最可能的原因 能够对微生物进行分离和鉴别 鉴定到种 这一点非常重要 实施适当的纠偏措施和预防措施必须评估失败对已经放行批次 如果有的话 的影响当纠偏措施实施后 应该进行一次新的培养基灌装试验 以确认其有效性 污染分析 85 污染率 灌装过程 时间或灌装量 在灌装过程中污染率上升 这表明污染可能来源于液体培养基 如与培养基贮罐非无菌连接 在循环管路中受到污染 很重要的是 在灌装结束后 保持培养基贮罐处于无菌状态 当等到培养基灌装结果时 可以核实这样的假设 污染分析 86 污染率 灌装过程 时间或灌装量 在灌装过程中污染率下降 这表明污染发生于生产设备中 胶塞容器 轨道 计量泵 针头 在灌装过程中污染被部分或全部 清洗掉 污染分析 87 污染率 灌装过程 时间或灌装量 在灌装过程中污染率出现尖峰 一个尖峰 在短时段的一些产品被污染 可能与在灌装过程中不正确操作导致的关键失误有关 对于这个原因 很关键的是必须知道被污染产品灌装的准确时间 以及当时实施的干预措施 灌装操作过程的录像是非常有用的 污染分析 88 污染率 灌装过程 时间或灌装量 污染率出现尖峰后 呈上升趋势 与前面的例子相同 但如果错误的干预措施能够影响到液体的管路 回路时 如培养基贮罐的变化 泵或针的替换 污染分析 89 污染率 灌装过程 时间或灌装量 孤立事件 试验中少数污染 不幸的是 这些现象是最普通的 也是最难调查的 如果这种现象在多次试验中反复出现 可能说明这个工艺存在 环境噪声 所以需要根本的措施 如更衣 着装 消毒剂和气流模式的改变 污染分析 90 四 新技术的应用和发展 1 隔离操作技术LABS RABS ISOLATOR 指不同形式的隔离操作技术最低标准 LAB