7-电泳1总结.docx

一、 选择题。下面哪一项不属于SDS-PAGE的特点。(D) A.成本低 B.操作简便,快速 C.具有较高的重复性 D.需要非常纯的样品IEFE优点不包括（C）。A.分辨率高 B.灵敏度高 C.对溶液种类无要求 D.重复性好纸电泳和板电泳分别是根据什么区分的？。（B）A、支持介质和支持介质的大小 B、支持介质和支持介质的形状 C、支持介质的大小和支持介质 D、支持介质的形状和支持介质银染的灵敏度大约是考染的多少倍。（C）A 25倍 B 50倍 C 100倍 D 200倍纸电泳属于哪一类电泳？A、自由界面电泳 B、区带电泳 C、稳态电泳（置换电泳） D、其他电泳支持介质的选择时，以下哪种是液体介质（A）A、蔗糖 B、琼脂糖 C、葡聚糖 D、PAG在以下哪种温度范围内聚合凝胶会比较透明且富有弹性。（B）A. 10-25 B. 25-35 C. 35-40 D. 40-45下列哪项属于薄膜类凝胶电泳？（A）A.纸电泳；B. 琼脂糖凝胶电泳；C. 聚丙烯酰胺凝胶电泳；DSDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳以下哪个不是影响电泳迁移率的因素：CA.缓冲液pH；B、电渗；C、温度；D、待分离大分子的性质电泳支持介质应具备的特性不包括：（D）A、 物理化学性质稳定B、 不干扰大分子的电泳过程C、 均匀，电内渗小，结果重复性好D、 与电泳分子特异性结合聚丙烯酰胺凝胶电泳的优点包括：（ABC）A、 可以在天然状态分离生物大分子B、 可分析蛋白质和别的生物大分子的混合物C、 电泳分离后仍然保持生物活性D、 没有分子筛作用碱性pH时，阳极电泳缓冲系统的考虑原则包括：（ABC）A、 分离胶缓冲系统的选择B、 先导离子的选择C、 尾随离子的选择等电聚焦的优点包括：（ABCD）A、 分辨率高B、 灵敏度高C、 电泳区带相当狭窄D、 重复性好E、 适用在pI不溶或发生变性的蛋白质双向电泳分析中的样品制备原则不包括：（D）A、 应使所有待分析的蛋白样品全部处于溶解状态（包括多数疏水性蛋白），且制备方法应具有可重现性B、 防止样品在聚焦时发生蛋白的聚集和沉淀C、 防止在样品制备过程中发生样品的抽提后化学修饰D、 不用完全去除样品中的核酸和某些干扰蛋白E、 尽量去除起干扰作用的高丰度或无关蛋白，从而保证待研究蛋白的可检测性生物大分子在电场中移动的速度由什么决定？（B）A. 大小、溶液浓度B. 带电性质、电荷多少C. 样品数量、样品种类D. 介质种类、溶液颜色样品的浓缩效应使不连续体系对蛋白有分离作用。下列不是不连续体系的是：（D）A. 凝胶孔径不连续性 B. 缓冲体系离子成分的不连续性C. pH值的不连续性 D. 溶液浓度的不连续性电泳时pH值、颗粒所带的电荷和电泳速度的关系，下列描述中正确的是（ E）ApH值离等电点越远，颗粒所带的电荷越多，电泳速度也越慢BpH值离等电点越近，颗粒所带的电荷越多，电泳速度也越快CpH值离等电点越远，颗粒所带的电荷越少，电泳速度也越快DpH值离等电点越近，颗粒所带的电荷越少，电泳速度也越快E pH值离等电点越远，颗粒所带的电荷越多，电泳速度也越快聚丙烯酰胺凝胶是一种人工合成的凝胶，其优点是（E）A机械强度好、弹性小、无电渗作用、分辨率高B机械强度好、弹性大、有电渗作用、分辨率高C机械强度好、弹性大、有电渗作用、分辨率低D机械强度好、弹性大、无电渗作用、分辨率低E机械强度好、弹性大、无电渗作用、分辨率高某蛋白质的pI为7.5，在pH6.0的缓冲液中进行自由界面电泳，其泳动方向为（A)A、 向负极移动 B、向正极移动C、不运动D、同时向正极和负极移动等电聚焦电泳法在电极之间形成的pH梯度是（E ）A稳定的B间断的C连续的D瞬间的E线性的电泳对支持物的一般要求为（ABDE）A不溶于溶液，不导电B吸液量多而稳定C不带电荷，有电渗D不吸附蛋白质等其它电泳物质，热传导度大E特结构均一而稳定，分离后的成份易析出电泳技术根据其工作原理可分为（ABCDE）A移界电泳B区带电泳C等速电泳D等电聚焦电泳E免疫电泳聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质，除一般电泳电荷效应外，欲使分辩力提高还应有的作用（D）A浓缩作用B扩散作用C重力作用D分子筛作用E电渗作用蛋白质加入到SDS溶液中，使得电泳时蛋白质分子的迁移速度则主要取决于？（A）A. 蛋白质分子大小B. 蛋白质带电量C. 蛋白质核质比下列哪一项不属于电泳技术按支持介质形状的不同划分的？（D）A. 薄层电泳B. 板电泳C. 柱电泳D. 纸电泳生物大分子的净电荷取决于？（C）A. 电场强度B. 分子本身的性质C. 环境的pH影响电泳迁移率的因素不包括： （ C ）A、待分离大分子的性质 B、缓冲液pH C、组分复杂度 D、电渗1、SDS是什么？ （ C ）A、十二烷基亚硫酸镁 B、十二烷基亚硫酸钠 C、十二烷基磺酸钠 D、十二烷基磺酸镁下面关于电泳的手法中不正确的是？（C）A.电泳是指带电粒子在电厂的作用下发生定向迁移的现象。B.迁移率与球形粒子所带电荷数量、粒子大小、溶液黏度以及电场强度有关。C.DNA分子的空间构型对泳动率影响较大，其大小顺序为：共价闭环DNA直线DNA开环双链DNA。D.蛋白质电泳的浓缩效应起源于缓冲液成分以及pH的不连续性。下面关于净电荷PAGE的手法中不正确的是？（C）A.什么是非解离电泳是在恒定的非解离的缓冲系统之中进行蛋白质分离的电泳手段。B.为什么根据电泳的迁移率可以得到天然蛋白质的分子量的原因在于在电泳过程之中，蛋白质仍然保持其天然构象，保持亚基间的相互作用以及具有生物活性不变。C.聚丙烯酰胺作为介质的优点是防止对流，把扩散减小到最小，不具有分子筛作用。D.聚丙烯酰胺凝胶电泳不连续体系中凝胶孔径、缓冲体系离子成分、pH值、电位梯度不连续。下面关于SDS-PAGE的说法中不正确的是？（D）A.SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳是在普通的电泳系统中引入SDS（十二烷基磺酸钠）后得到的新的电泳系统。B.经SDS与还原剂处理的蛋白质样品中的肽段是无二硫键连接的。C.不同分子质量范围的蛋白质应该选用不同的凝胶浓度。D.当蛋白质的分子质量范围围内时，电泳迁移率与分子量值呈直线关系。下列关于等电聚焦的说法中，不正确的是？（D）A.使用激光对IEFE进行定量分析的原因是激光光源强度大、单色性好。B.正极附近是低pH区，负极附近是高pH区。C.等电聚焦电泳是一种利用具有pH梯度的支持介质分离等电点不同的蛋白质的电泳技术。D.由于PAGE分辨率较IEFE更高，特别适用于分离分子量相同而电荷量不同的生物大分子。聚丙烯酰胺凝胶的特点不包括（A）。A 化学性能稳定 B 对pH变化稳定 C 对温度变化不太稳定 D 分辨率高以下不是等电聚焦优点的是（C）。A 分辨率高 B 灵敏度高 C 电泳区带较宽 D 重复性好以下不是等电聚焦电泳的染色方法的是（D）A 考马斯亮蓝染色 B银染色 C同工酶染色 D淀粉碘化钾染色以下不是电泳支持介质应具备的特性的是（B）。A 均匀 B 电内渗较大 C 物理性质稳定 D 化学惰性电泳迁移率，即带电颗粒在单位电场强度下的移动速度与（ABC）有关，与(D)无关。 A 电荷数量 B 粒子大小 C 溶液粘度 D 电场强度1907年，（A）和（ ）用电泳理论作指导，研究设计出填充有琼脂糖凝胶的桥管，成功地分离了白喉毒素和它的抗体。A Field Teagua B Smoluchowski Hardy C Picton & Linder D Helm holts 单体和交联剂比例为120时，其凝胶性能为（B）。A 凝胶脆、硬，呈乳白状 B 凝胶呈糊状C 凝胶富有弹性，且完全透明 D 凝胶不可能聚合一般地，琼脂糖的电内渗值在0-0.3之间；琼脂的在（C）以上。A 0.3 B 0.4 C 0.5 D 0.6环形DNA分子样品，其中有三种构型的分子：共价闭合环状的超螺旋分子（cccDNA）、开环分子(ocDNA)、和线形DNA分子(IDNA)。这三种不同构型分子进行电泳时的迁移速度大小顺序为（D）。A IDNAcccDNAocDNA B ocDNAIDNA cccDNA C cccDNAocDNAIDNA D cccDNAIDNAocDNA当蛋白质的分子量为（A）KD时，电泳迁移率与分子量的对数呈线性关系。 A 26 B 226 C 526 D 1226迁移率与下列（D）因素无关？A 电荷数量 B 粒子大小 C 溶液黏度 D 电场强度下列不是区带电泳的是（C ）A 纸电泳 B 醋酸纤维素薄膜电泳 C 等电聚焦电泳 D .聚丙烯酰胺凝胶电泳筛孔越小，则颗粒在移动的过程中所受到的阻力也就越（B）；介质的纯度影响聚焦效果；介质的非特异性吸附会（ ）电渗。A 大；减小 B大；增大 C小；减小 D小；增大聚丙烯酰胺凝胶是一种人工合成的凝胶，其优点是（ B）。A 机械强度好、弹性小、无电渗作用、分辨率高B 机械强度好、弹性大、无电渗作用、分辨率高C 机械强度好、弹性大、有电渗作用、分辨率低D 机械强度好、弹性大、无电渗作用、分辨率低20 世纪 60 年代中期问世的等电聚焦电泳，是一种（D ）。A 分离组份与电解质一起向前移动的同时进行分离的电泳技术B 能够连续地在一块胶上分离数千种蛋白质的电泳技术C 利用凝胶物质作支持物进行的电泳技术D 利用有 pH 值梯度的介质，分离等电点不同的蛋白质的电泳技术固定化膜应具备的条件不包括（A）A孔径较小 B易与靶蛋白结合 C不影响蛋白检测 D准确反映电泳结果样品的处理方式不包括：（C）A 还原SDS处理 B 带有烷基化作用的还原SDS处理C 不有烷基化作用的还原SDS处理 D 非还原的SDS处理不连续电泳过程中有三种物理效应，下列不是的是：（D）A 样品的浓缩效应 B 凝胶的分子筛效应C 一般电泳分离的电荷效应 D 离子电离效应蛋白质与SDS的结合程度，下列不是影响它们结合的主要因素是（B）A 溶液中SDS单体的浓度 B 反应温度C 样品缓冲液的离子强度 D 二硫键是否完全被还原以下哪个不是影响电泳迁移率的因素：（C）。A 缓冲液pH B 电渗 C 温度 D 待分离大分子的性质下列性质中不影响离子在电场中移动速度的是？（D）A 带电量 B 颗粒大小 C颗粒形状 D以上都不是下列说法错误的是（D）A 电泳最主要的指标是分辨率高 B 电泳技术的发展使得电泳缓冲液的使用减少，电泳速度提高 C 电泳时在凝胶中没有温度梯度，可以保证蛋白带的平直 D 等电聚焦时不可以在凝胶表面上直接测定pH梯度 二、 填空题。1. 增加样品溶解性的手段有（变性剂）、(表面活性剂) 、（还原剂）、（起载体作用的两性电解质）。2. 等电聚焦电泳，是一种利用具有（pH梯度）的支持介质分离（等点电不同）的蛋白质的电泳技术。3. SDS的主要作用是：（消除或屏蔽蛋白质的自身电荷）4. 粒子的移动速度与(电场强度)、(粒子所带电荷量)成正比，而与（粒子直径）及（溶液粘度）成反比5. SDS电泳的检测方法一般为(考马斯亮蓝染色)和（银染色）6. 电泳按支持介质的不同可分为(纸电泳)(醋酸纤维素薄膜电泳 )(琼脂糖凝胶电泳)(聚丙烯酰胺凝胶电泳)( SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳)几类7. 聚丙烯酰胺凝胶电泳的优点：（可以在天然状态分离生物大分子）（可分析蛋白质和别的生物大分子的混合物）；（电泳分离后仍然保持生物活性）。8. 蛋白质印迹定义：把电泳或色谱分离的蛋白质转移到（固定基质）上，再对其进行进一步分析的方法。固定基质通常是一些纸或膜9. 物质离子在电场中（差速迁移）是电泳分离的基础10. HPCE中影响电渗流的因素有（电场强度）、(毛细管材料)、(电解质溶液性质)、(温度和添加剂)。11. 电泳是指带电粒子在电场的作用下发生定向迁移（与其本身所带电荷相反的电极移动）的现象。利用电泳现象将多组分物质分离、分析的技术叫做电泳技术。12. 高效毛细管电泳带电粒子的迁移速度=电泳+电渗流；两种速度的矢量和。13. 淌度是指带电离子在单位电场下的迁移速度，分为度：绝对淌度、有效淌度、表观淌度，淌度不同是电泳分离的基础。14. HPCE检测器：紫外吸收、荧光检测、激光诱导荧光、质谱、电导法、化学发光、电化学检测。15. HPCE进样方式：流体力学进样、电动进样、扩散进样。16. 法不如常规聚丙烯酰胺凝胶电泳和等点聚焦电泳多，一般为考马斯亮蓝染色和银染色。17. 免疫印迹：抗体与附着于固定基质上的靶蛋白发生特异性反应。抗体是最常用的专一探针。18. 固定化膜应具备的条件：易与靶蛋白结合；不影响蛋白检测；准确反映电泳结果。NC膜与蛋白结合的机理：疏水作用、离子作用、结合作用大小与孔径成反比。19. 负染：能专门提高PAGE胶上蛋白质的回收率，但不能用于膜上染色。结果表现为胶面着色，蛋白质点透明。20. SDS-PAGE显色剂：有机染料和银染、负染、胶体扩散染料、有机荧光团染料、金属螯合染料。21. 电渗现象：外加电场作用下，与固体支持物接触的液体层发生移动的现象。22. 决定PAG（聚丙烯酰胺凝胶）特性的主要因素：单体和交联剂的总浓度（T），单体和交联剂的比例(C)。23. 提高电泳分辨率的措施：加大凝胶上的电场强度、保持凝胶温度均匀。24. 等电聚焦电泳（IEFE）是一种利用具有pH梯度的支持介质分离等点电不同的蛋白质的电泳技术。25. pH梯度的建立：用多种两性电解质混合物建立稳定良好的pH梯度。载体两性电解质本质：一系列脂肪族多氨基多羧酸同系物和异构体，具有很多既不相同又十分接近相互连接的pI值。pH范围：pH310。26. 聚焦后的检测方法：染色法（考马斯亮蓝染色；银染色；同工酶染色；专一蛋白染色；荧光标记以及免疫方法）；扫描与定量；电泳转移；双相电泳；滴定曲线分析。27. 蛋白质电泳：常规PAGE，SDSPAGE，等电聚焦电泳IEF，双向电泳2DE，蛋白质印迹。 28. 不连续体系的体现：A. 凝胶孔径不连续性B. 缓冲体系离子成分的不连续性C. pH值的不连续性D.电位梯度的不连续性。29. 聚丙烯酰胺胶电泳体系不连续系统中，带电颗粒电泳时具有浓缩效应、电荷效应、分子筛效应。30. 不连续梯度系统是指在不连续系统中，分离胶使用浓度梯度胶，有线性，指数和阶梯梯度。31. SDS电泳和常规聚丙烯酰胺凝胶电泳一样，也需要三个步骤：制样制胶、电泳和检测。32. 操作过程中水封的目的：保持分离胶上沿平直，排气泡。33. 自由电泳是指在溶液中进行的电泳。又分为几种：显微电泳、移界电泳、柱电泳、自由流动幕电泳、等速电泳。34. 电渗流是毛细管电泳分离的主要驱动力。35. 薄膜类电泳分离的主要原理：生物大分子的电荷密度。凝胶类电泳分离的主要原理：电荷密度和分子大小。36. 结合SDS的比率大约是一个蛋白质分子中每两个氨基酸残基结合一分子的SDS。37. 琼脂糖凝胶的主要性能指标：电内渗、胶凝温度、熔化温度、凝胶强度、脱水收缩作用。38. 非球形分子（如线状DNA）在电泳过程中受到更大的阻力，即粒子的泳动速度与粒子形状有关。39. 在一定的电场强度下，DNA分子的迁移速度取决于分子筛效应，即分子本身的大小和构型是主要的影响因素。DNA分子的迁移速度与其相对分子量成反比。40. 按仪器装置分电泳可分为：水平式、垂直式、悬架式。41. 按电泳的分离原理来分，电泳可分为：自由界面电泳,区带电泳,稳态电泳。42. 在恒定的、非解离的缓冲系统中来分离蛋白质，属于非解离电泳。43. 分离胶的孔径小，各分子由于大小和形状不同，所受阻力不同，表现出不同的 泳动速度，即分子筛作用。分子量小，形状为球形的泳动速度最快。44. 电泳结束后，取下凝胶模，卸下胶框，用凝胶铲小心撬开短玻璃板，从凝胶板上切下一角作为加样标记.45. 蛋白质的电泳行为：带电的蛋白质分子在电场中发生电泳迁移。46. 等电聚焦就是在电泳介质中放入载体两性电解质。47. 双向电泳的分类：非变性2D-PAGE、非变性/SDS-2D-PAGE、非变性/还原/SDS-2D-PAGE、变性2D-PAGE。48. SDS电泳是根据SDS和还原剂将蛋白质分子解聚后亚基的大小，在恒定pH（碱性）缓冲系统的分离。49. 蛋白质的净电荷是组成它的氨基酸残基的侧链基团上所有正、负电荷的总和。50. 样品的浓缩效应是不连续体系对蛋白的分离作用产生的。 51. 不连续体系是指凝胶孔径不连续性、缓冲体系离子成分不连续性、pH值不连续性、电位梯度不连续性。52. 胶束在SDS-PAGE系统中的电泳迁移率不受蛋白质原有电荷的影响，而是取决于蛋白质或亚基分子量的大小。53. 带电颗粒放在一个没有干扰的电场中，使颗粒具有恒定迁移速率的动力来自于颗粒上的有效电荷Q和电位梯度E，且该动力与介质的摩擦阻力f抗衡。54. 电泳时分离胶缓冲系统的实际pH要比配制时高约0.5 ，所以样品在此pH的溶解度和稳定性都好，且所有样品组分应带有同性电荷。 55. 等电点是蛋白质的物理化学常数，与其组成有关。56. 载体两性电解质的合成本质是一系列脂肪族多氨基多羧酸同系物和异构体，具有很多既不相同又十分接近相互连接的pI。57. 在测定未知蛋白时，可先采用pH3-10的载体，经初步测定后改用较窄的以提高分辨率。58. 蛋白质印迹实验的基本步骤包括：蛋白质凝胶电泳、蛋白质转移、免疫检测、封闭。59. 高效毛细管电泳在技术上采取了两项重要改进：一是：采用了0.05mm内径的毛细管，二是采用了高达数千伏的电压。60. 当蛋白质的分子量间时，电泳迁移率与分子量的对数值呈直线关系，符合如下方程式： Lg MW =b m R + K 其中，MW 为蛋白质的分子量，m R 为相对迁移率，b为斜率，K为截距。当条件一定时，b与K均为常数 。61. 使颗粒具有恒定迁移速率的动力来自于颗粒上的有效电荷Q和电位梯度E。62. 水封的目的：保持分离胶上沿平直、排气泡。63. 常见的不正常电泳现象有：涂抹痕迹；条纹拖尾；条带变浅；前段指示剂缺失；条带仅在凝胶顶部；混杂因素等。64. 核酸电泳通常采用TAE、TBE、TPE三种缓冲系统，但最常用的还是TAE。65. 在较低pH下，核酸分子中碱基上的氨基解离，只有1磷酸基团解离，因此分子带正电。66. 使用阳极电泳时，钾离子为常用的先导离子。67. 蛋白质分子中每两个氨基酸残基结合一个SDS分子。68. 在测定未知蛋白时，可先采用pH为310的载体，经初步测定后采用较窄的pH范围以提高分辨率。69. 常用的染色剂有 溴化乙锭 和银。70. 电泳印迹是指在电场中将凝胶中带负电荷的蛋白质分子转移到膜上。71. 电场作用下，毛细管柱中会出现电泳现象和电渗流现象。72. 物质离子在电场中差速迁移是电泳分离的基础。73. 对于石英毛细管，溶液pH增高时，表面电离多，电荷密度增加，管壁zeta电势增大，电渗流增大，pH=7，达到最大。74. 电泳过程产生焦耳热，散热过程中，在毛细管内形成（温度梯度），破坏了（塞流），导致区带展宽。75. 电渗流速度和电场强度成正比，当毛细管长度一定时，电渗流速度与工作电压成正比。 缓冲溶液离子强度，影响双电层的厚度、溶液黏度和工作电流，明显影响电渗流大小。缓冲溶液离子强度增加，电渗流下降。76. 电泳是指带电粒子在电场的作用下发生定向迁移的现象。77. 电泳根据其分离原理来分，可分为自由界面电泳、区带电泳、稳态电泳。78. 等电聚焦电泳IEFE的优点有分辨率高，灵敏度高、电泳区带相当狭窄、重复性好。79. 迁移率仅与球形粒子所带电荷数量、粒子大小及溶液粘度有关而与电场强度无关。80. 纸电泳与醋酸纤维素薄膜电泳均属于薄膜类电泳技术。81. 凝胶类介质相比于薄层类介质具有分子筛作用。82. 凝胶电泳仪按形式可分为垂直型和水平型。83. 凝胶的有效分离范围随着电压增大而减小，电泳时一般采用低电压，不超过4V/cm。84. 蛋白质的净电荷是组成它的氨基酸残基的侧链基团上所有正、负电荷的总和。85. 电泳中常用的凝胶为葡聚糖、交联聚丙烯酰胺和琼脂糖。凝胶电泳具有机械强度好、弹性大、透明、化学稳定性高、无电渗作用、设备简单、样品量小 (1100g）、分辨率高等优点。86. 等电聚焦电泳过程是一种利用有pH值梯度的介质，分离等电点不同的蛋白质的电泳技术。87. PAGE中核酸带的染色：EB或银染法，其中银染法的灵敏度较高。88. 粒子的移动速度与电场强度、粒子所带电荷量成正比，而与粒子半径及溶液粘度成反比。 89. 带电颗粒电泳时具有浓缩效应、电荷效应、分子筛效应的系统是不连续系统90. 在电泳介质中放入载体两性电解质，当通入直流电时，正极附近是低pH区，负极附近是高pH区。91. SDS电泳后，可在凝胶中、电洗脱后，在自由溶液中或固定在转移膜上恢复蛋白的生物活性。92. 银染色的第一步是固定，有两个目的：一是将蛋白固定在凝胶中或至少是防止蛋白在凝胶中扩散。第二个目的是去除干扰染色物质，如去污剂，还原试剂和缓冲液的一些组分。93. 电泳槽与凝胶中缓冲液的成分、pH值和离子强度均不相同。使得不连续电泳过程中有三种物理效应：样品的浓缩效应；凝胶的分子筛效应；一般电泳分离的电荷效应。由于这三种物理效应，使样品分离效果好，分辨率高。 94. 分离胶的孔径小，各分子由于大小和形状不同，所受阻力不同，表现出不同的泳动速度，即分子筛作用。分子量小，形状为球形的泳动速度最快。分子量小，阻力小，移动快；分子量大，阻力大，移动慢。95. 蛋白质在含有强还原剂的SDS溶液中与SDS分子结合时，可形成SDS-蛋白质复合物。这种复合物由于结合大量带负电荷的SDS，从而起到消除各蛋白质分子之间自身的电荷差异的作用。因此在电泳时，蛋白质分子的迁移速度则主要取决于蛋白质分子大小。96. 对外循环恒温系统的要求：温度稳定，流量大。97. 等电聚焦就是在电泳介质中放入载体两性电解质，当通以直流电时，两性电解质即形成一个由阳极到阴极逐步增加的pH梯度，在此体系中，不同的蛋白质即移动到或聚焦于其相当的等电点位置上，也就是说被聚焦于一个狭的区带中。98. 样品的溶解是2-DE成功分离蛋白质的最关键因素之一。溶解的目标：样品中非共价结合的蛋白质复合物和聚积体完全破坏，从而形成各个多肽的溶解液；溶解方法必须允许可能干扰2-DE分离的盐、脂类、多糖和核酸等物质的去除；溶解方法要保证样品在电泳过程中保持溶解状态。99. 样品中核酸对电泳的影响：增加样品粘度、与蛋白质形成复合物后会出现假象迁移和条纹。100. 理论上讲，要获得最好的图谱质量和重复性所需最佳时间是IEF分离达到稳定态所需的时间。聚焦时间太短，会导致水平和垂直条纹的出现。过度聚焦虽然不会导致蛋白质向阴极漂移，但会因为活性水转运而导致过多水在IPG胶表面渗出（电渗）而造成蛋白图谱变性，在胶条碱性端产生水平条纹以及蛋白丢失。最佳时间的确定需要根据不同蛋白样品、上样量、pH范围和胶条长度通过经验来确定。 101. 电泳是指带电粒子在电场的作用下发生定向迁移（与其本身所带电荷相反的电极移动）的现象。102. 生物大分子在电场中的速度与样品性质和带电条件有关103. 带电颗粒放在一个没有干扰的电场中，使颗粒具有恒定迁移速率的动力来自于颗粒上的有效电荷Q和电位梯度E。104. 影响电泳迁移率的因素：1）待分离大分子的性质 ：所带的电荷、分子大小和形状，分子带的电荷量越大、直径越小、形状越接近球形，则其电泳迁移速度越快；2）缓冲液pH和离子强度：pH值距pI愈远，Q越大，V越大105. 电渗：在电场中液体对固体支持物的相对移动。当电渗方向与电泳方向一致时，会加快颗粒泳动速度，反之，当两者方向相反时，会减慢颗粒泳动速度.106. 电泳包括：电源、电极、电解液（支持介质）、点样、显色(剂).107. 抗对流、抗扩散的支持介质应具备以下性质：物化性质稳定；化学惰性;均匀、电內渗小、重复性好。108. 蛋白质印记：把电泳或色谱分离的蛋白质转移到固定基质上，再对其进行进一步分析的方法109. 等电聚焦就是在电泳介质中放入载体两性电解质，当通以直流电时，两性电解质即形成一个由阳极到阴极逐步增加的pH梯度，在此体系中，不同的蛋白质即移动到或聚焦于其相当的等电点位置上，也就是说被聚焦于一个狭的区带中，电泳技术中的等电点聚焦也称为聚焦电泳。110. 样品的处理方式：还原SDS处理、带有烷基化作用的还原SDS处理、非还原的SDS处理111. 电泳技术按支持介质的不同可分为：纸电泳、醋酸纤维素薄膜电泳、琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳、SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳112. 聚丙烯酰胺胶电泳的二种体系：连续系统、不连续系统。有浓缩效应的是：不连续系统。113. 不连续电泳过程中有三种物理效应：样品的浓缩效应、凝胶的分子筛效应、一般电泳分离的电荷效应。114. 蛋白质与SDS的结合程度。影响它们结合的因素主要有三个：溶液中SDS单体的浓度、样品缓冲液的离子强度、二硫键是否完全被还原115. 当蛋白质的分子量间时，电泳迁移率与分子量的对数值呈直线关系，符合如下方程式： Lg MW =b m R + K （注：MW 为蛋白质的分子量，m R 为相对迁移率，b为斜率，K为截距。当条件一定时，b与K均为常数 ）116. 临床常用的电泳分析方法主要有醋酸纤维素薄膜电泳、凝胶电泳、等点聚焦电泳、双向电泳和毛细管电泳等。117. 决定PAG特性的主要因素是单体和交联剂的总浓度和单体和交联剂的比例。118. T和C的经验公式是：C=6.5-0.3T119. 蛋白质双向电泳技术是大多数蛋白质组研究中分离复杂蛋白质混合物的首选技术。120. SDS是一种阴离子去垢剂，在SDS-蛋白质复合物中，SDS的作用是消除各蛋白质分子之间自身的电荷差异的作用。121. SDS电泳的成功关键之一是电泳过程中，特别是样品制备过程中蛋白质与SDS的结合程度。122. 等电聚焦电泳按照电泳的分离远离来分类属于_稳态电泳_123. 电渗流是_毛细管电泳_电泳的驱动力。124. 银染的机制是将蛋白带上的硝酸银（银离子）还原成金属银，以使银颗粒沉积在蛋白带上。银染色的第一步是固定，固定有两个目的：一是将蛋白固定在凝胶中或至少是防止蛋白在凝胶中扩散。第二个目的是去除干扰染色物质，如去污剂，还原试剂和缓冲液的一些组分，如甘氨酸。固定液可以使甲醛、乙醇（甲醇）和醋酸或三氯醋酸。固定后的凝胶才能由银颗粒显色。对SDS电泳的凝胶进行染色，一定要在染色前去除SDS，所以经过几次漂洗的程序。125. IEFE一种利用具有pH梯度的支持介质分离等点电不同的蛋白质的电泳技术。 126. 在电泳介质中放入载体两性电解质，当通入直流电时，两性电解质形成一个由正极到负极逐渐增加的pH梯度，正极附近是低pH区，负极附近是高pH区。127. 把电泳或色谱分离的蛋白质转移到固定基质上，再对其进行进一步分析的方法叫蛋白质印迹。128. 毛细管分离过程中，正离子在负极最先流出 ；中性粒子无电泳现象，受电渗流影响，在阳离子后流出；阴离子在电渗流 电泳时,阴离子在负极最后流出。129. 粒子的移动速度(泳动速度V)与电场强度(E)、粒子所带电荷量(Q)成正比，而与粒子半径(r)及溶液粘度()成反比。130. 凝胶干燥器主要形式是热空气干燥和真空干燥。131. 分子带的电荷量越大、直径越小、形状越接近球形，则其电泳迁移速度越快132. 外加电场作用下，与固体支持物接触的液体层发生移动的现象叫电渗现象133. 在自由溶液中施加恒定电场，粒子的移动速度与电场强度、粒子所带电荷量成正比，而与粒子半径、溶液粘度成反比。134. 常规聚丙烯酰胺凝胶电泳不连续体系中，带电颗粒具有浓缩效应、电荷效应、分子筛效应。135. SDS-PAGE主要用于测定蛋白质亚基分子量。136. SDS-PAGE的检测方法一般为考马斯亮蓝染色和银染色。137. 电泳迁移率仅与球形粒子所带电荷数量、粒子大小及溶液粘度有关而与电场强度无关。138. 按电泳的分离原理来分类，可分为自由界面电泳、区带电泳、稳态电泳（置换电泳）这三类。其中稳态电泳又可以分为等速电泳、等电聚焦电泳。139. SDS电泳和常规聚丙烯酰胺凝胶电泳一样，也需要三个步骤：制样制胶、电泳和检测。140. 决定PAG特性的主要因素：单体和交联剂的总浓度、单体和交联剂的比例。141. 电泳是指带电粒子在（电场）的作用下发生定向迁移的现象，其迁移方向与其本身所带电荷（相反）的电极移动；带电颗粒放在一个没有干扰的电场中，使颗粒具有恒定迁移速率的动力来自于颗粒上的有效电荷和电位梯度。142. 电泳迁移率仅与球形粒子所带电荷数量、粒子大小及溶液粘度与关而与电场强度无关。143. 毛细管电泳分离的主要驱动力是电渗流，其大小直接影响分析结果的精确度，准确度。144. 聚丙烯酰胺胶电泳连续系统中带电颗粒电泳时仅具有电荷效应、分子筛效应；不连续系统中带电颗粒电泳时具有浓缩效应、电荷效应、分子筛效应。145. 不连续体系的四个不连续性分别为凝胶孔径不连续性、缓冲体系离子成分的不连续性、pH值的不连续性、电位梯度的不连续性。146. 等电聚焦电泳是一种利用具有pH梯度的支持介质分离等电点不同的蛋白质的电泳技术。147. 对IEFE谱带的扫描最合适的为激光光源，因为它具有强度大、单色性好的特点。148. 顺序抽提法是根据细胞蛋白溶解性的差异，用具有不同溶解能力的蛋白溶解液进行抽提的方法。149. 迁移率仅与球形粒子所带电荷数量、粒子大小及溶液粘度有关，而与电场强度无关。150. 电泳技术按支持介质的不同可分为：纸电泳，醋酸纤维素薄膜电泳，琼脂糖凝胶电泳，聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE），SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）。151. 按支持介质不同可分为：薄层电泳；板电泳；柱电泳；152. 电渗现象是指外加电场作用下，与固体支持物接触的液体层发生移动的现象。153. 毛细管电泳分离的主要驱动力是电渗流。154. 等电聚焦电泳（IEFE）的优点有分辨率高，重复性好，电泳区带狭窄。155. IEFE一种利用具有pH梯度的支持介质分离等点电不同的蛋白质的电泳技术。156. IEFE适用于分离分子量相同而电荷量不同的生物大分子。157. 在测定未知蛋白时，可先采用pH=310的载体，经初步测定后改用较窄的以提高分辨率。158. 聚焦后染色的检测方法有考马斯亮蓝染色，银染色，同工酶染色，专一蛋白染色，荧光标记以及免疫方法等。159. SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳中的SDS是十二烷基硫酸钠。160. SDS电泳制胶时单体贮液不需要抽气，以免产生泡沫。161. 制胶过程中水封的目的是保持分离胶上沿平直，排气泡。162. 胶凝好的标志是胶与水层之间形成清晰的界面。163. SDS电泳中使用的染色法一般是考马斯亮蓝染色和银染色。164. SDS-PAGE主要用于测定蛋白质亚基分子量。165. 凝胶浓度低于3或高于25都不能被使用。166. 蛋白质是通过分子内和分子间的氢键，疏水相互作用以及半胱氨酸之间的二硫键来维系它们的天然结构的。167. 自制的SDS凝胶可以在室温下保存4天。168. 凝胶配制过程要迅速, 加速剂TEMED要在注胶前再加入,否则凝结无法注胶。注胶过程最好一次性完成,避免产生气泡。169. 蛋白质的净电荷是组成它的氨基酸残基的侧链基团上所有正、负电荷的总和。170. 聚丙烯酰胺胶电泳体系有二种：连续系统和不连续系统 。171. 不连续梯度系统是指在不连续系统中，分离胶使用浓度梯度胶，有线性，指数和阶梯梯度。172. 蛋白质印迹定义是把电泳或色谱分离的蛋白质转移到固定基质上，再对其进行进一步分析的方法。173. 蛋白质印迹的固定基质通常是一些纸或膜。174. 电泳印迹是将在电场中将凝胶中带负电荷的蛋白质分子转移到膜上，又称电泳转移。175. 染色法不能对蛋白质进行专一性检测。176. 大多数蛋白质组研究中分离复杂蛋白质混合物的首选技术是2-DE技术。177. 核酸对电泳的影响：增加样品粘度、与蛋白质形成复合物后会出现假象迁移和条纹。178. 双向电泳的分类有：非变性2D-PAGE，非变性/SDS-2D-PAGE，非变性/还原/SDS-2D-PAGE。179. 带电颗粒放在一个没有干扰的电场中，使颗粒具有恒定迁移速率的动力来自于颗粒上的有效电荷Q和电位梯度E。该动力与介质的摩擦阻力f抗衡。180. 通过电泳将混合物分离的基础是各组分不同的电泳迁移率（泳动度/淌度），即带电颗粒在单位电场强度下的移动速度。181. 电泳时，分子带的电荷量越大、直径越小、形状越接近球形，则其电泳迁移速度越快。182. 聚丙烯酰胺电泳不连续电泳过程中有三种物理效应：样品的浓缩效应；凝胶的分子筛效应；一般电泳分离的电荷效应。浓缩效应包括A. 凝胶孔径不连续性B. 缓冲体系离子成分的不连续性C. pH值的不连续性 D.电位梯度的不连续性。三、简答题。DNA分子在电场中的移动速度受哪些因素影响？1.样品物理性状：分子大小、电荷数、颗粒形状和空间构型。一般而言，电荷密度愈大，泳动率越大。但是不同核酸分子的电荷密度大致相同，所以对泳动率的影响不明显。对线形分子来说，分子量的常用对数与泳动率成反比，用此标准样品电泳并测定其泳动率，然后进行DNA分子长度（bp）的负对数泳动距离作标准曲线图，可以用于测定未知分子的长度大小。DNA分子的空间构型对泳动率影响很大，如质粒分子，泳动率大小顺序为：共价闭环DNA直线DNA开环双链DNA 。2.支持物介质：核酸电泳常用琼脂糖凝胶和PAG两种。含有不同浓度的琼脂糖的凝胶构成的分子筛的网孔大小不同，适于分离不同浓度范围的核酸分子；PAG网孔的大小由Acr与Bis的相对比例决定；琼脂糖凝胶适合分离长度为200bp至50kbp的分子；聚丙烯酰胺凝胶对于小片段（5bp-500bp）的分离效果最好；选择不同浓度的凝胶，可分离不同大小的DNA分子3.电场强度。E增加，电泳迁移加快；但凝胶的有效分离范围随着电压增大而减小。电泳时一般采用低电压，不超过4V/cm。4.缓冲溶液离子强度。核酸电泳常采用TAE、TBE、TPE三种缓冲系统，各有利弊；选择不同浓度的凝胶，可分离不同大小的DNA分子。什么是“鬼带”，如何处理？ “鬼带”就是在跑大分子构象复杂的蛋白质分子时，常会出现在泳道顶端（有时在浓缩胶中）的一些大分子未知条带或加样孔底部有沉淀，主要由于还原剂在加热的过程中被氧化而失去活性，致使原来被解离的蛋白质分子重新折叠结合和亚基重新缔合，聚合成大分子，其分子量要比目标条带大，有时不能进入分离胶。但它却于目标条带有相同的免疫学活性，在WB反应中可见其能与目标条带对应的抗体作用。 处理办法：在加热煮沸后，再添加适量的DTT或Beta巯基乙醇，以补充不足的还原剂；或可加适量EDTA来阻止还原剂的氧化。对于蛋白质样品中核酸的影响及去除方法是什么？对电泳的影响：增加样品粘度、与蛋白质形成复合物后会出现假象迁移和条纹。解决方法：用适量纯的不含蛋白酶的核酸内切酶进行降解，或是利用合成载体两性电解质（SCA）同核酸结合形成复合物的能力，再通过超速离心来去除复合物。 电泳中“ 微笑”（两边翘起中间凹下）形带原因？ 答：主要是由于凝胶的中间部分凝固不均匀所致，多出现于较厚的凝胶中。 处理办法：待其充分凝固再作后续实验。聚丙烯酰胺胶电泳体系有两种分别说明其组成和不同？（1）连续系统：缓冲液的离子成分、PH、凝胶浓度、电位梯度都相同，带电颗粒电泳时仅具有电荷效应、分子筛效应。（2）不连续系统：缓冲液离子成分、pH、凝胶浓度、电位梯度不连续，带电颗粒电泳时具有浓缩效应、电荷效应、分子筛效应。简述双向凝胶电泳（二维电泳）是指哪两向？答：第一向采用等电聚焦 ， 第二向采用了十二烷基硫酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳。简述运用凝胶电泳技术染色脱色的步骤？答：电泳结束后，取下凝胶模，卸下胶框，用凝胶铲小心撬开短玻璃板，从凝胶板上切下一角作为加样标记，在两侧溴酚蓝染料区带中心，加入考马斯亮蓝染色液染色1-2 h，再用脱色液脱色，直至蛋白质区带清晰，即可计算相对迁移率请简述电泳的基本原理。物质分子在正常情况下一般不带电，即所带正负电荷量相等，故不显示带电性。但是在一定的物理作用或化学反应条件下，某些物质分子会成为带电的离子（或粒子），不同的物质，由于其带电性质、颗粒形状和大小不同，因而在一定的电场中它们的移动方向和移动速度也不同，因此可使它们分离。生物大分子在电场中移动的速度由什么决定？样品性质：分子的大小、形状、带电性质、电荷多少；电泳条件：介质阻力、电场强度、溶液粘度。请简述电场强度对电泳过程及结果的影响。E高，带电颗粒泳动快。过高，产生焦耳热，样品和Buffer扩散增加，条带增宽；蛋白变性。过低，电泳时间增加，扩散。当需要增大电场强度以缩短电泳时间时，需附有冷却装置。请简述电渗的意义即其对电泳的影响。外加电场作用下，与固体支持物接触的液体层发生移动的现象。当电渗方向与电泳方向一致时，会加快颗粒泳动速度，反之，当两者方向相反时，会减慢颗粒泳动速度；请简述聚丙烯酰胺凝胶作为介质的优点。（1）防止对流，把扩散减少到最小；（2）具有分子筛作用。请简述聚丙烯酰胺凝胶电泳的优点。（1）可以在天然状态分离生物大分子；（2）可分析蛋白质和别的生物大分子的混合物；（3）电泳分离后仍然保持生物活性。电泳时间比正常要长，可能是什么原因？ 可能由于凝胶缓冲系统和电级缓冲系统地PH选择错误，即缓冲系统地PH和被分离物质的等电点差别太小，或缓冲系统的离子强度太高。蛋白质双向电泳中样品中含有核酸会对电泳产生什么影响？有什么解决方法？增加样品粘度、与蛋白质形成复合物后会出现假象迁移和条纹。解决方法：用适量纯的不含蛋白酶的核酸内切酶进行降解，或是利用合成载体两性电解质同核酸结合形成复合物的能力，再通过超速离心来去除复合物。等电聚焦电泳的应用有哪些？1.分析分离制备蛋白质、多肽；区分人血清蛋白测出异常免疫球蛋白基因分型2.测定pI可鉴定蛋白质、多肽；3.双相电泳中，IEFE作为第一相；常规PAGE缓冲系统为碱性PH时，阳极电泳缓冲系统的考虑原则有哪些？(1)分离胶缓冲系统的选择；(2)先导离子的选择；(3)尾随离子的选择; (4)浓缩胶缓冲系统的选择;(5)反向离子的选择;(6)电极缓冲液的选择; 影响电泳迁移率的因素有哪些？1. 待分离大分子的性质；2. 缓冲液pH和离子强度；3. 电场强度；4. 电渗；5. 支持介质；增加样品溶解性的手段有哪些变性剂、表面活性剂、还原剂、起载体作用的两性电解质等电点聚焦的分离容量受哪些因素影响？1、聚焦后每一区带的蛋白量取决于密度梯度所能支持的蛋白质，提高密度可以提高分离容量；2、容量与区带高度的平方成正比，降低电压可使区带变宽，提高容量，但分辨率降低，聚焦时间长，用窄的pH梯度范围可以使区带变宽，提高分辨率；3、分离的容量与柱的横载面成正比，用440毫克柱时，可加粗蛋白质5克，每一区带可达一克。样品中核酸对电泳具有什么影响？答：增加样品粘度、与蛋白质形成复合物后会出现假象迁移和条纹。影响IPG胶条对蛋白载样量的因素包括哪些？待分析的蛋白点的量应满足随后的质谱分析。电泳的目的：如果只是得到一张好的图片，则无需考虑太多其它因素。待研究蛋白的丰度。样品的复杂度：复杂度较高的样品，为了尽可能的了解所包含的每种蛋白，需要反复实验才能完成。如果将待检样品被富集以后则更易分析。IPG胶条的pH范围。高效