食品中大肠菌群微生物不确定度.doc

食品中大肠菌群MPN法结果不确定度的评定卢春凤 邢荣花 史方 河南出入境检验检疫局技术中心安阳分中心 455000摘要： 通过分析影响食品中大肠菌群多管发酵法结果的不确定度来源，建立一种简单的大肠菌群多管发酵法不确定度评定方法。结果表明，影响食品中大肠菌群多管发酵法结果不确定度的主要因素为取样量的不确定度、稀释倍数的不确定度、加样体积的不确定度、月桂基硫酸盐胰蛋白胨(LST)肉汤和煌绿乳糖胆盐(BGLB)肉汤管产气比例产生的不确定度，其中后两者产生的不确定度所占分量比较大。关键词：食品；大肠菌群；MPN法；不确定度1 检验方法 依据GB 4789.3-2010 食品卫生微生物学检验大肠菌群计数中第一法大肠菌群MPN法进行检验，流程如下：25g样品+225ml无菌生理盐水+1ml 稀释过的大肠埃希氏菌液 10倍系列稀释 LST肉汤36oC培养48h BGLB肉汤36oC培养48h 计数产气数，查MPN表报告结果。2 各分量的不确定度2.1样品制备称量过程中引入的不确定度（A类）无菌条件下用精度为0.1g的电子天平称取样品25.0g，用250ml的量筒量取225ml无菌生理盐水加入，根据电子天平检定证书给出的最大允差为0.1，量筒按JJG196-2006常用玻璃量器的容量允差为5ml，由于按级使用的数字式仪表、测量仪器最大允差误差导致的不确定度属于矩形（均匀）分布，则天平和玻璃容器的标准不确定度分别为：（m样）=0.0577g（v样）=1.1547ml相应地它们的相对不确定度分别为：U(m样)= =0.0023U(v样)= =0.0051则该步产生的相对标准不确定度：U(取样)= =0.00562.2样品稀释过程中引入的不确定度（A类） 样品10倍系列梯度稀释采用1ml和10ml量出式分度吸量管进行。JJG196-2006常用玻璃量器规定，20oC时1ml和10ml（B级）的容量允差分别为0.015和0.1，取矩形分布，则它们的标准不确定度分别为：（1ml）=0.00866ml （10ml）=0.05774ml相应地它们的相对标准不确定度分别为：U(1ml)= =0.00866U(10ml)= =0.005774则该步产生的相对不确定度U(稀释)，可根据普送关于微生物培养产生的不确定度定量测定理论中的公式计算：U(稀释)= = =0.009368样品的5稀释方法相同，则U2(总稀释)=kU2(稀释)，k为10倍系列梯度稀释次数，如第一次取1ml样液到9ml稀释液中相当于10倍，则k为1，以此类推。本次试验为105倍的MPN结果，则k为5，则U(总稀释)= =0.2164 本次试验在20oC标准温度的环境中进行，因此，忽略溶液温度与校准时温度不同引起的不确定度。若溶液温度不为标准温度时，则必须考虑温度对量器体积的影响。2.3样品加样体积的相对标准不确定度（A类） 分别用1ml分度吸量管取1ml接种于LST培养基中（每梯度3支），其产生的：U(吸取)=U(1ml)=0.008662.4 LST和BGLG肉汤管产气相对标准不确定度（A类）同一样品重复测量10次，取其平均值作为测量结果。10次重复测量的结果列入表O-1中。表O-1给出不确定度评定的全部计算过程。具体计算过程如下：列出测量结果（表O-1第2列）；取对数，得到对数的平均值为：=4.48572 ；求残差-；求残差的平方，得到残差平方和为2=0.017190705合成标准不确定度测量结果为10次重复测量的平均值，故平均值的标准不确定度为： ()=()=0.0138206表O-1 单一样品重复测量的计算过程序号10-110-210-310-410-5测量结果-（-）21231231231231231+-240004.3802-0.105520.011134472+-460004.66270.176980.031321923+-240004.3802-0.105520.011134474+-240004.3802-0.105520.011134475+-240004.3802-0.105520.011134476+-240004.3802-0.105520.011134477+-240004.3802-0.105520.011134478+-460004.66270.176980.031321929+-240004.3802-0.105520.0111344710+-460004.66270.176980.03132192平均值306004.485720.0171907052.5花生酱中大肠菌群的MPN值的合成不确定度和扩展不确定度 由上述各相对不确定度合成大肠菌群MPN值相对标准不确定度：U(总MPN)= =0.027672.6扩展不确定度由于置信概率p=95%，自由度v=10-1=9，由t分布表可得k=2.26。于是U95=2.260.02767=0.06253422.7取得反对数，由坐标回到坐标 由于与之间的非线性关系，不能直接求扩展不确定度U 的反对数。因此首先确定的取值范围为：=4.485720.0625342，或写成4.42318584.5482542取反对数后可得2.61043.5104 3结果报告本次实验中对培养基，盐水，试管，吸管，均质袋做了相应的空白验证，以及对无菌室空气做了沉降验证试验，结果皆为零。影响大肠菌群MPN值测定结果不确定度的因素很多，本次试验中除了上述不确定度之外，还有样品保存条件、培养基质量、培养条件（温湿度）、培养时间等方面引起的不确定度。本次试验主要分析样品取样、样品稀释、样品加样体积、肉汤管产气比例对测量不确定度的影响。故本次试验食品中大肠菌群的不确定度报告结果MPN值即在2.8104和3.3104之间。参考文献：1 微生物分析测量不确定度评定2 测量不确定度培训知识 （中国电子产品可靠性与环境试验研究所）3 食品的菌落数检测结果不确定度之评定 （胡巅 丁武 李素芳 中国卫生检验杂志）4