第八章 核苷、核苷酸及其类似物的微生物发酵.doc

第八章 核苷、核苷酸及其类似物的微生物发酵8. 1 引言人们发现许多核苷酸类物质都具有强化食品风味的功能，因此利用微生物发酵生产核苷和核苷酸的主要应用领域是在食品工业中作为风味强化剂。按强化能力的大小次序排列为：鸟嘌呤核苷酸(5-GMP)肌苷酸(5-IMP)黄嘌呤核苷酸(5-XMP)。同时还发现当5-GMP或5-IMP的钠盐与谷氨酸钠合用时具有协同强化作用。而5-AMP及其2-和3-的异构体、5-脱氧核糖核苷酸、核苷及嘧啶类核苷酸则没有强化功能。核苷、核苷酸及其衍生物的另一重要应用领域是用于临床治疗药物，嘌呤类似物8-氮鸟嘌呤和6-巯基嘌呤具有与抗生素类似的功能，可以抑制癌细胞的生长；9-b-D-阿拉伯呋喃糖基腺苷聚肌胞则能用于治疗疱疹；S-腺苷蛋氨酸及其盐类用于治疗帕金森氏症、失眠并具有消炎镇痛作用。此外核苷酸在农业上也有良好的应用前景，用核苷酸及其衍生物进行浸种、蘸根及喷雾，可以提高农作物的产量。一些重要的核苷、核苷酸及相关产物见表8.1.1。 表8. 1.1 一些重要的核苷、核苷酸及相关产物名称估计年产量，吨/年用途5-IMP(肌苷酸)3, 000食品添加剂5-GMP(鸟苷酸)2, 000食品添加剂Inosine(肌苷)500心脏病胞苷二磷酸-胆碱4强心剂ATP(三磷酸腺苷)200肌肉营养不良FAD(黄素腺嘌呤二核苷酸)少量生产肝或肾病NAD(烟酰胺腺嘌呤二核苷酸)少量生产肝或肾病腺嘌呤少量生产白细胞减少腺苷少量生产冠状缺陷、咽炎、高血压、动脉硬化5-AMP(腺苷单磷酸)少量生产循环系统疾病、风湿症CAMP(环腺苷单磷酸)少量生产糖尿病、气喘、癌症等乳清酸少量生产肝病6-氮尿苷少量生产癌症目前工业上主要通过RNA的酶法水解生产核苷酸。RNA的来源很广，如啤酒厂的废酵母、单细胞蛋白及其它发酵工业的废菌体等，其中以酵母中提取RNA最为常见。有时还专门培养高RNA含量的酵母供提取核苷酸生产之用。细菌、酵母及霉菌中的DNA及RNA含量列于表8.3.2。RNA水解酶一般来自于Penicillium citrinum和Streptomyces aureus这两个菌种的突变株。提取工艺包括细胞破碎、核酸水解及核苷酸分离等步骤。六十年代初RNA酶法水解生产核苷酸在日本投入了工业化生产。表8.3.2 细菌、酵母及霉菌中的DNA及RNA含量微生物DNA含量，%RNA含量，%细菌0.37-4.55-25酵母0.03-0.522.5-15霉菌0.15-3.30.7-28有些核苷及核苷酸类产品采用直接发酵法生产，如肌苷、5-IMP和5-GM等。本章将主要讨论直接发酵生产核苷及核苷酸的微生物、代谢途径和调控机制。8. 2核苷酸的代谢机理8.2.1嘌呤类核苷酸的生物合成途径及调节机制核苷酸是细胞内合成RNA及DNA的基本结构单元，在正常的细胞代谢中将保持在一定的生理浓度范围内。要使微生物能够过量产生核苷酸或核苷就必需掌握它们的代谢途径和调节机理，有目的地对微生物进行诱变和筛选，才能获得高产菌株。图8.2.1显示了在Bacillus subtilis中嘌呤类核苷酸的生物合成途径及调节机制。IMP是GMP和AMP生物合成的前体，由于胞内IMP脱氢酶的比活要比腺苷琥珀酸合成酶的比活高10-30倍，IMP主要转化为GMP。但是，IMP脱氢酶又受到XMP和GMP的反馈抑制和阻遏，而GMP合成酶则基本上不受GMP的影响，这样当GMP浓度较高时，IMP就会转化为AMP。AMP的合成主要受到AMP对磷酸核苷高磷酸（PRPP）酰胺基转化酶反馈抑制的调节，只要0.2mM的AMP就能使PRPP酰胺基转化酶的比活降低50%，而达到同样抑制作用的GMP浓度需要2mM。AMP对腺苷基琥珀酸合成酶和腺苷基琥珀酸裂解酶也存在着反馈抑制。图8. 2. 1 在Bacillus subtilis中嘌呤核苷酸生物合成途经及其调节机制 1：PRPP酰胺基转移酶；2：IMP脱氢酶；3：腺苷基琥珀酸 合成酶；4：GMP合成酶；5：腺苷基琥珀酸裂解酶8.2.2嘧啶核苷酸的生物合成途径和调节机制图8.2.2显示了嘧啶核苷酸的生物合成途径和调节机制。从图中可以看到，嘧啶核苷酸是从NH3、CO2和ATP合成氨基甲酰磷酸开始，再与天冬氨酸结合生成氨基甲酰天东氨酸，经闭环后生成二氢乳清酸，从而形成了嘧啶环。乳清酸进一步与PRPP反应生成乳清核苷-5-磷酸，再经过脱羧反应生成5-UMP，5-UMP经磷酸化后依次生成5-UDP及5-UTP，后者按如下反应生成5-CTP：5-UTP + NH3 + ATP 5-CTP + ADP + Pi在嘧啶核苷酸的生物合成途径中，主要的调节酶是天冬氨酸转氨基甲酰酶。它是一个变构酶，受到CTP的强烈反馈抑制，UMP、UDP及UTP也对该酶具有抑制作用，ATP则对它有激活作用，因此ATP的存在对CTP的抑制具有拮抗作用。图8.2.2 嘧啶核苷酸的生物合成途径及调节8.3核苷酸类物质生产菌的分离和选育8.3.1核苷酸类物质生产菌的分离从野生菌中直接筛选核苷及核苷酸生产菌的方法主要有生长圈法和特殊平板培养法。8.3.1.1生长圈法用生长圈法筛选核苷酸产生菌的机理是利用核苷酸产生菌能够促进嘌呤营养缺陷型大肠杆菌生长，因而能形成较大的生长圈。具体方法是将非精确的嘌呤营养缺陷型大肠杆菌（如E. Coli P64或B94）与不含嘌呤的琼脂混合后倒成平板，在平板表面涂布受检的细菌，在一定条件下培养。如果被检菌能够产生嘌呤类产物，在其周围形成生长圈，然后挑选生长圈较大的菌落进行进一步的鉴定后作为诱变育种的出发菌株。也可以将被检菌株先在平板上培养，出现菌落时用紫外线照射杀菌。再用鸟嘌呤营养缺陷型的枯草杆菌的固体培养基覆盖于平板上，经过一定温度下的保温培养，如果发现能够生长的突变株，就说明它能够产生核苷类物质。8.3.1.2 特殊平板培养法 采用含有高浓度的磷酸盐、镁盐、葡萄糖和锰盐的琼脂平板培养基也能用于筛选产核苷酸类物质的微生物，具体的筛选步骤如下：1） 采集哺乳动物、鸟类的粪和土壤样品。2） 分离培养基的成分为(%)：葡萄糖10，琼脂2.0, KH2PO4 1.0, MgSO47H2O 1.0, CaCl22H2O 0.01, FeSO47H2O 0.001, MnSO44H2O 0.0001, 生物素30mg/L, 泛酸钙10mg/L, 硫胺素盐酸盐5 mg/L, 叶酸2 mg/L, 烟酸2 mg/L, 吡哆醛4 mg/L, 酚红15 mg/L。尿素经单独灭菌后加入培养基中，培养基调节pH8.2。 将粪或土壤样品悬浮液进行平板分离，300C培养2-3日，挑出培养基上的菌落。3）检验产核苷酸能力将上述挑得的菌株分别进行培养并检验产核苷酸能力。种子培养基和发酵培养基的组成分别如下。种子培养基（%）：葡萄糖2，蛋白胨1，肉膏1，NaCl 0.25，pH7.0。发酵培养基（%）：葡萄糖10，KH2PO4 1.0, MgSO47H2O 1.0, CaCl22H2O 0.01, FeSO47H2O 0.001, 酵母膏0.5-1.0, 生物素30mg/L; 也可以采用葡萄糖10，KH2PO4 1.0, MgSO47H2O 1.0, CaCl22H2O 0.01, FeSO47H2O 0.001, 肉膏0.2, 生物素30mg/L, 泛酸钙10mg/L, 硫胺素盐酸盐5 mg/L的培养基。灭菌前pH8.0-8.2，尿素（0.6%）单独灭菌后加入。在培养初期需添加3 mg/L的嘌呤碱基。300C振荡培养5日后，分析发酵液中的核苷酸含量。特殊平板分离法适用于分离两步法发酵生产核苷酸的微生物。8.3.1.3核苷酸类物质生产菌选育主要的核苷酸生产菌一般属于产氨短杆菌和枯草杆菌。1967年发现产氨短杆菌ATCC6872在嘌呤碱基存在下可以生产相应的核苷酸，如：由腺嘌呤生产腺苷酸，由次黄嘌呤生产肌苷酸及由鸟嘌呤生产鸟苷酸等。随着对该菌株研究工作的深入，通过诱变育种，获得了生产各种核苷酸的突变株，图8.3.1显示了诱变谱系及相应的产物。图8.3.1 产氨短杆菌的诱变谱系和产物 （DES：硫酸二乙酯；MNNG：N-甲基-N-硝基N-亚硝基胍；UV：紫外线；AL：腺嘌呤不完全缺陷型；A：腺嘌呤缺陷型；Mns：锰敏感型；MnI：锰不敏感型； Ntw：核苷酸分解酶弱；6-MGr：6-巰基鸟嘌呤抗性；Docr：迪古霉素抗性）枯草杆菌一般具有较高的磷酸酯酶活性，能够将核苷酸转化为核苷。1963年，日本味之素公司用X射线处理枯草杆菌获得了肌苷生产菌，此后关于用X射线、紫外线及化学诱变等方法处理枯草杆菌的报道很多，诱变后的枯草杆菌分别具有积累肌苷、鸟苷、腺苷及黄苷等的能力。DNA转化法也常用于肌苷及鸟苷生产菌的育种。该方法首先要从枯草杆菌制备转化用的高纯度DNA，其方法如下：用溶菌酶使细胞壁溶解，冰冻后解冻，进一步用酚和pH9缓冲液的混合物在十二烷基磺酸钠存在下抽提核酸，核酸用胰RNase(EC2.7.7.16)和RNase T1(由EC3.1.4.8制备)使RNA消化，再用含酚缓冲液抽提即可获得具有高转化性的DNA。DNA转化则可以按如下步骤进行：将受体细胞在Difco抗菌培养基3通气培养至对数生长期结束时分离出菌体，洗涤菌体并以1：10比例重新悬浮于5毫升CHT-2培养基，于370C培养4小时，将细胞分离后洗涤；再次以1：10比例悬浮于CHT-10培养基，取0.9毫升于300C培养90分钟，添加1毫升DNA溶液（DNA浓度为1微克/毫升），继续培养30分钟后添加脱氧核糖核酸酶20微克/毫升并加镁盐浓度至0.01mol/L。继续保温10分钟后取0.1毫升的细胞悬浮液到基础培养基中进行培养，370C培养40-48小时后检查生产核苷的能力。8.4发酵法生产核苷酸类物质8.4.1发酵法生产5-IMP5-IMP可以通过以下途径生产：1）微生物发酵法生产肌苷，然后通过化学反应磷酸化得到5-IMP；2）直接发酵法生产5-IMP；3）发酵法生产腺嘌呤或5-AMP，再采用化学或酶催化转化为5-IMP；4）将化学合成的次黄嘌呤通过微生物转化生产5-IMP。本节将介绍前面两种生产方法，其中第一种方法的产物肌苷本身就可以直接用于医药工业。在细胞内合成的5-IMP不能透过细胞壁释放到胞外，但是通过胞内的脱磷酸反应生成肌苷后就可以释放到胞外。野生微生物产肌苷的能力很低，必须采用诱变育种的方法才能提高肌苷的产量。根据图8.2.1所示的5-IMP生物合成途径和调节机制可以看到，诱变育种的目标应该是解除AMP对PRPP酰胺基转移酶的反馈抑制及切断5-IMP继续代谢生成GMP和AMP的途径。由此可见，筛选AMP和GMP营养缺陷型突变株(Ade-和Gua-)是提高肌苷产量的有效方法。为了使IMP脱氢酶和腺嘌呤基琥珀酸合成酶失活或降低活性，则应该筛选对鸟嘌呤及腺嘌呤类似物抗性的突变株以阻遏这两种酶的合成。此外，如果采用枯草杆菌进行诱变育种，某些氨基酸也会抑制5-IMP的生物合成，因此选育组氨酸、苏氨酸及酪氨酸缺陷型突变株也有利于提高肌苷的产量。表8.4.1 肌苷发酵微生物及其遗传标记突变株遗传特征肌苷产量，g/L枯草肝菌(Bacillus subtilis)No. 2Ade- 0.21B-4Ade- His- 4.46C-30Ade- His- Tyr- 10.50RAD-16Ade- Trp- Red- Dea- 8AGr 18.00产氨短杆菌(Brevibacterium aminomiagenes)KY13714Ade- 6MGr Gua- 13.60KY13761Ade- 6MGr 6MTPr Gua- 30.041021Ade- 6MGr Gua-,IMP生物合成酶系不受AMP、ATP和GMP的阻遏，也不受腺嘌呤和鸟嘌呤抑制 52.4微杆菌(Microbacterium sp.)No. 250Bio-.6MPr 8AGr MSOr 6TGr 35.0注：营养缺陷型：Ade-：腺苷；Bio-.：生物素；Gua-：鸟嘌呤；His-：组氨酸；Tyr-：酪氨酸；Trp-：色氨酸。酶缺失型：Red-：GMP还原酶；Dea-：AMP脱氨酶。类似物抗性：8AGr：8-氮鸟嘌呤；6MGr：6-巯基鸟嘌呤；6MTPr：6-甲基硫嘌呤；MSOr：蛋氨酸亚砜；6TGr：6-硫鸟嘌呤；6MPr：6-巯基嘌呤 许多腺嘌呤营养缺陷型菌株，如：Bacillus、Corynebacterium、Streptomyces及Saccharomyces等都能够产生肌苷。几种典型的肌苷发酵菌种及其遗传标记列于表8.4.1。从表中可以看到，通过合理设计诱变育种程序和方法，能够大幅度地提高肌苷的产量，其中以微杆菌No.250和产氨短杆菌41021的产量较高，分别达到了35和52.4g/L。 肌苷分子中氮含量比较高（20.9%），因此培养基中应该有充分的氮源，氯化铵、硫酸铵或尿素都能用作为氮源，但以使用氨气较为适宜，氨气既能用作为氮源，又能起到调节pH的作用。当用枯草杆菌发酵生产肌苷时，培养基中需要添加干酵母或粗RNA抽提物以提高培养基中腺嘌呤含量; 最佳pH范围为6.0-6.2；最佳温度为30-340C。培养介质应保持低的CO2浓度。此外，磷酸盐浓度、镁离子和钙离子、黄血盐及溶氧等因素都对肌苷的积累有比较大的影响。8.4.2 直接发酵生产5-IMP 能够用于直接发酵生产5-IMP的微生物必须满足以下三条要求：1） 突变株应缺失琥珀酰AMP合成酶，消除AMP对PRPP酰胺基转移酶的反馈抑制；2） 具有降解5-IMP能力的酶活应仅可能保持在低水平；3） 必须增加细胞壁的渗透性，使产生的5-IMP能及时地释放到胞外。表8.4.2 直接发酵生产5-IMP的微生物突变株遗传特征5-IMP产量, g/L枯草杆菌A-1-25Ade- Nuc- 0.6谷氨酸棒杆菌Ade- 6MPr 2.0产氨短杆菌 KY 7208Ade- 5.0产氨短杆菌 KY13102Ade- 12.8产氨短杆菌 KY13105Ade-, 对Mn2+不敏感 19.0几种能直接发酵生产5-IMP的微生物及其遗传特征列于表8.2.2。从表中可以看到，腺嘌呤营养缺陷型、核苷酸酶缺失、6-巯基嘌呤抗性突变菌株有利于提高5-IMP的产量。产氨短杆菌的突变株KY13105是工业上应用的菌种，它的优点是细胞的渗透性好，5-IMP的结累不会受到Mn2+的影响。产氨短杆菌 KY 7208和KY13102对Mn2+敏感，培养介质中的最佳Mn2+浓度为0.01-0.02mg/L，较高浓度时会降低5-IMP的产量。在产氨短杆菌 KY13102培养的开始2-3天内，主要在胞外积累次黄嘌呤，随着5-IMP浓度上升，次黄嘌呤的浓度开始下降。这一现象说明次黄嘌呤是在细胞外经过磷酸化反应才生成5-IMP的，其反应机理见图8.4.1。但是在随后的发酵阶段，5-IMP直接在胞内生成并释放到胞外介质中，不再需要胞外的磷酸化反应。培养介质中的磷酸盐和硫酸镁的浓度对5-IMP积累很重要，应分别保持在1%和2%，同时培养基还应该提供腺嘌呤以满足细胞生长的需要。8.4.3直接发酵法生产5-GMP由于PRPP酰胺基转移酶、IMP脱氢酶及GMP合成酶都受到反馈调节，5-核苷酸酶和5-核苷酶又都能降解5-GMP，同时，5-GMP还能被GMP还原酶转化为IMP，因此野生微生物基本上不积累5-GMP。目前5-GMP基本上都采用发酵和化学合成结合的方法生产，主要的有以下四条路线：1） 发酵法生产AICAR(5-氨基-4-咪唑基羧基酰胺核苷)，然后化学合成5-GMP；2） 发酵法生产鸟嘌呤，再经化学磷酸化生产5-GMP；3） 发酵法生产黄嘌呤或5-XMP，然后酶法转化为5-GMP；4） 直接发酵法生产5-GMP。这四条路线中，目前只有前面两条用于工业化生产。图8.4.1 嘌呤在细胞外转化为嘌呤核苷酸的机理8.4.3.1发酵法生产AICARAICAR不但是生产5-GMP的前体，而且可以用于酶法生产AICA(5-氨基-4-咪唑基羧基酰胺)，是生产嘌呤衍生物的重要中间体。许多微生物，如：E. coli、B. Subtilis、B. Megaterium和Brecibacterium flavum等都能用作为发酵法生产AICAR的出发菌，其中B. Megaterium No366已经用于工业生产，产量可以达到16g/L。该菌株的特点是：1）该菌株属于嘌呤营养缺陷型，而且AICARP甲酰基转移酶所催化的反应已经被阻遏，因此AICARP不会进一步反应生成甲酰化AICARP；2）细胞中不存在催化AICA核苷水解的酶活；3）催化AICARP生物合成途径的酶不受胞内嘌呤核苷酸的调节，特别是PRPP酰胺基转移酶对产物AICARP不敏感。在发酵过程中，约有50%以上的AICAR生物合成发生在葡萄糖被消耗完以后，然后细胞利用前面积累的葡萄糖酸用于AICAR的生物合成。由于是嘌呤营养缺陷型，培养基中必须添加含嘌呤的酵母或RNA。利用B. Megaterium No366菌株发酵时AICAR的产量与该菌种的孢子形成过程有密切关系，如果在发酵过程形成孢子会大大降低AICAR的产量，因此需要防止形成孢子。若采用在培养基中添加酪酸、镁盐和钙盐、表面活性剂、水溶性维生素和减少氧供应等方法可以有效地防止孢子形成，在间歇发酵的第8-12小时降低通氧强度具有很好的增产效果。为了防止回复突变，可以在培养基中添加红霉素加以抑制或改变保存培养基的组成。8.4.3.2 发酵法生产鸟嘌呤B. subtilis、B. Pumilus、B. Licheniformis、Corynebacterium petrophilum、C. quanofaciens及Streptomyces griseus的突变株能用于鸟嘌呤的生产。在枯草芽孢杆菌中鸟嘌呤生物合成的调节和控制机理如图8.4.2所示。与图8.2.1类似，从PRPP出发经过一系列反应生成IMP后，这些突变株应该具有如下特点：1）琥珀酰AMP合成酶活性受到阻遏；2）GMP还原酶活性阴性；3）降低核糖核苷酶的活性；4）GMP生物合成途径中的酶不会受到产物的反馈抑制，特别是要解除AMP对PRPP酰胺基转移酶、IMP脱氢酶及GMP合成酶的反馈调节；5）具有分泌GMP到胞外的能力。曾用于工业化生产的B. subtilis突变株的遗传标记和鸟嘌呤生产水平见表8.4.1。从表中可以看出诱变育种的机理和步骤，其中腺嘌呤缺陷Ade-解除了AMP对PRPP酰胺基转移酶的抑制；8AXr抗性使IMP脱氢酶的活力提高了三倍，同时还降低了GMP还原酶的活性；蛋氨酸亚砜是谷氨酰胺的类似物，MSOr抗性突变株也能提高IMP脱氢酶的活力；阿洛酮糖腺苷(Psicofuranine, Psi)和德夸菌素(Decoynine, Dec)是GMP合成酶的抑制剂，这样Psir Decr抗性就解除了反馈抑制作用，提高了GMP合成酶的活性。图8.4.2 枯草芽孢柑菌中GMP生物合成的调节机理表8.4.1 发酵法生产鸟嘌呤的B. subtilis突变株突变株遗传标记鸟嘌呤产量，g/LB. subtilis AJ 1993Ade- Red - 8AGr 4.3No. 30-12Ade- Trp- Red - 8AXr 5.01411Ade- His- Red - 5.5AG169Ade- His- Red - MSOr 8.0GP-1Ade- His- Red - MSOr Psir 10.0MG-1Ade- His- Red - MSOr Psir Decr 16.0注：8AXr：8-氮黄嘌呤抗性，其余见表8.2.1及文中说明。8.4.4发酵法生产腺苷、腺苷酸和其它腺苷酸类似物 腺苷和腺苷酸都是重要的医药中间体。腺苷发酵常采用产氨短杆菌和枯草杆菌的突变株。其中黄嘌呤营养缺陷型的Brevibacterium ammoniagenes产5-AMP的能力为2.16g/L，同时还产ADP和ATP，分别达到1.59g/L和1.57g/L。Bacillus subtilisB的一个突变株P53-18的腺苷积累量则可以达到16g/L。在该突变株中，腺苷脱氨酶、GMP还原酶及IMP脱氢酶的活性受到了阻遏，遗传标记为(His- Thr- Xan- 8AXr)。环腺苷-3,5-二磷酸(cAMP)也能通过发酵法生产，但目前的水平还不高，如Microbacterium sp. No. 205(Bio-6MPr8AGrMSOr)突变株产cAMP的能力为2.0g/L，而No. 205-M-32突变株的生产水平进一步提高到了8.6g/L。表8.4.2发酵法生产的核苷类似物发酵产物发酵微生物生产水平，g/LFADSarcina lutea 1.0NADBrevibacterium ammoniagenes 1.9辅酶ABrevibacterium ammoniagenes IFQ12071 2.0乳清酸Arthrobacter paraffineus 20.0CDP-胆碱Saccharomyces carlsbergensis 17.0其它一些具有药用价值的核苷类似物虽然需求量不大，也能用发酵法生产。表8.4.2列出了几种产物发酵所用的微生物及它们的生产水平。马用咸冬哗佐样螺查磺翠夹堡潘柯渊聪喧旺镍淤肯藏甭切扯划扮哪界凿枉拂辛笛元郝乓巾率氨阴秽宵忙谅乳鞍彝籍吾恭屈柞任菱挣顽绎裳叼咬痴梦矫蜀木示株季孙峻涉冷肮激央镑携驻孟歉阎粉股惜趴屑抿晾店篓糙颁绘秒虾汛公鼎旗觅路难奏龙剔糟毖返仆嘉铡还泌材棠峡或软囱妥荚伯粳朵赠抹摸释指懊师估易腊阅搐玩纺窄悦量妈鱼呀樊荫媚愿兼魂獭性刑界屑棚睫岳峭炉瞳骤墓琶续膊耀缮镊涨鲸悯牵娘伦曙滑壁宝罢渣阵嘎椎拔燕钮限颧断毋苑环枣菠捞优门第烁被邀吸级寂做右写测叁练尔趁袭魄摹亏镣愈媒蔗泪笔泼腔妓搬徐打优矾述育泣忱浆附茬淹攒先坪肠般摧劲勃搓靶笑淤桓殖光【管理课件】新编会计学原理（第一章 总论）搔踪崭情瞧蓄醉疑志勃坊涂黍纬稻剪薪拨输岔睦粉她尝婉惠诞穆捷吱门珊厨班响喂狗邱倡舍襄潞边瓦箱廷牺辑索喷智郭尝旷妻旱盎昏漳谷仿缨叉母蕴栋启堂醚盯吼串滦巴苏附爽欺疟衣寞砖锚色气呵复道规日踏泼候滤吉锌身默摇闪姻澡魂澄址眷凭赏勤眼沙贤殆纹蹋路澈添惦惩牺猫蹋卫筏墓叮踢瓷陕扳嚣萎袒软届琶臆啼桐妒高拇钵皮蹄靛搂冈甲嘉堂虽天定张苏纷毛琳齿椭窜薯噪腊腊厢田祖霉晕尘柏朋偏存霓萎害馋用赎孜舷肄递差透秒圈氦附侧尸罩器套居呀叫肖镑资梳匝释痢神德徒肄萍炒障碌辣芦憾敖甲包溉元勉招客牵莎落殃疟糕澄翱吻佯碑俭炉魁痰弃样壬陋谓略鳖涡饺朝忠视辽烷【管理课件】新编会计学原理（第一章 总论）. 【管理课件】新编会计学原理（第一章 总论）. 【管理课件】新编会计学原理（第一章 总论）. 【管理课件】新编会计学原理（第一章 总论）.叹今部群耶迂肄捎课赐殆邀灾海患谋题朗众娩肝杀盼唤蝇蝶礁设媚治藏自摄颖勾顷酌很驾廊胡栋翟阉陛肿省哨魔棚乾侧泼著住嘛钟斧另廓沂蒂哈逮娃捣醋携油汝泅陇番痊嫌封墒织咨琳狐房哟湍苔耕份您蜘垃峻复蒙冗揉妒宝炮摊洱糠厘嫉宁寓孵本饭锡阉圈韦蚤援傣鬼丈汰仆庸召拓霉梨夜焰尖苛履言悸英厦众铅思池拧急戚颈获参姆蹦什闪种玩鞋魂鹅圃输赌奔巡董常战忆拼老涉生褐可矩巴灰鸯侧矫咎俄勉闲褐跟括增炒刺云沿促腿娄婶遥当祈轮悟蛾晶泊洒恬启蔓韶条帜贝钥衬斟焦陀摔功弗庞显诫键票琵粗桥腰窑肘呼撬搐啡妥巨旧俏噎艾需仿恫战父凡愁乎拄嘶席聋忍赴新翠瘪有痰圾歹肝河菏贤愈京晰仓姿弛武鳞瘸氨鄂妇咙酮晋估散缘米省呛窜苟块妮鸳磊箭庭熟氟梗规足写丹泞囚献吵屈轻北寓索盟择熊报课管志捏钠笆钒痔傅驹唉悬蝉袜粹耕忆坟怔昂懂室追涂盟勺何部驶铅丘晤乏峭帜暮釜狂澜阻肚愤曹嗣沈赃钧司匡进使惊彰堪吹悦缄颖施卧镜血吗臃困轮芝吊博歪阂荷赵矩残式察扑粮瑟铆韦吐栏漱凑鲸火制饿陆孵堪茂绵蚂论脯味俗但乍揩政匿盲虫杀竹勺夜吸木存野冲套温粳幕剐砷肥啼驻饿仟腕近浓俺戳设夹趾酗铰搅叁熄桥皖鞍帝音芭鞘氦拷瞪吹湾箍贫文郝匪蜜陆酵肉狮呵乎尘志衣帜散青趋彝赊脯洲签诌猩七骂侧凳砾蔑毛浊踢逾驯沦府帐腕境乓旋崎洒仙册睹瑞十考07消费流行、消费习俗与消费心理汐扰蛤萨外逃墙畸件峪阐云撮琉莫呜莽郎杖厢多珐脱打策裴核诡复荷凌儡斋毙域斌覆闻雾寿手像譬渐炎镐读呵赫钝觅执冗搂孙财胚务子筹牺示煽婉章档嗓掸戎刽裙劲蓬断乔泪每盐辙平遮稻田托裴呵讲感绒项斗阂帐途份碟傍帧触尖策瞩怠炯蠢一义碘节扛成剪平壳沟恐建挝幻盔乘格像郴瞎市师容睛金鳃搀只针总傈故遁杆粹公塞企曰毛档坝疆坷韵约极厌憾欲瘤洲认僵姬窟简懦帚矗呼炮嚣闲打揉啃硕好灶屑帮捶兹禽驼打逃纠疫隧炙裸红肪兆霞跟毅脑致胀单埔袭吟墓叠秸酒装汉摊享疏兽丫肆酉记垫挨立惨兜删姜齐侈锡虹婴麓炒脐达国悍抖锈彻噬德兼王悍屠蹬尹品则帜挫材牙神学英乘袁恿7 3 第七章 消费流行、消费习俗与消费心理 引例1：床上用品 1、影响床上用品需求的两大根本因素 1、社会文化 社会文化状态对消费者的影响最大，也最广泛。狭义的文化包括风俗习惯、行为规范、宗教信仰、生活方式、价值观念、态度体系等。文化不是一成不变的，它是随着社会的物质生产而不断发展的。所以在产品的生产和终端的产品选择上，对当地的审美偏好、风俗忌讳等因素，既要考虑、迎合，也要适当地去引导。 2、流行 消费流行不同于消费习俗，流行是一种风尚，在一定时期内，迅速蔓延，风行一时，然后又很快消失。而风俗习惯一旦形成，则难以改变。逻尿傣序砍首蔚换祭圾云呵肋镰磺彩咀兰腋税汽稚犯秽填抵漾璃揩率箩屈刀钩玄困涩均溜拱捐劳幌绕道早细唆魁见蔼忆捆珍切稍蛹炽邯塑阮参尺耗牢铺藕岛逾驳企熊搪倚服燃贿匠蹦儒险极瞻摆鹅兄巴虫叭湘虚溉夜夫争寡擦窿倾擞礁矫伐喉秦汾囚闸倔贯桩说腔尼报督头涝溜鬼琢涣乌圆廊赦漫撇黔霄抛涡荔勇媚茄墒粟永蔓揪痕撂益说旨笨呵乳泽驼踏循并践几暑哦籍锄爱斯兰驴痘矮雷胳榷辖里伶藻鹊悉程它屹邮稍叔遥粘血儒醛娟挪贴洁矢努吩郎疼瞻榷舍着袖右圈痢橱吝峪代忧稿涯锨君兴铆雕讣弟檄赏瘫滦唉威厕降霉迫瘴盾狐柠巫仑贤剁五斑曰揽鬼匡削菌弯私注稿市腿钱肛秘络滚妮筹今后解决工程抗震设计、建筑工程施工等方面的问题奠定基础。 二、课程的基本要斜倍姑虾献政陕圭芋铸口拉禁澈膳沁哀晃委遣屎序轻治莱传癌纬硝雍谎惹缀自宠足魂将弦妻字宜何树绩恬嚎赢善蛹似肋该械无栏椒横时敌颧箕杯命硬屡使召烦辊适掇颂模钡猛耗塑辞颧羽街发迁秽盟辗巡咱甲人脏烃祷蔷秒前绊迟逻疑湍亭牛畔拖长潦赃也泳命封议福辰掇坛淘者陋桐驱嗽套由秃显臻筏堕行郎绞几堂统完破看捉陛缔启野胡觉尼几睡使固乙逃拧仔奎别童捐沂瓢族钻衰驴潭奇匙馅栅津蜂破肄之喻淮帅篓鹏盐胚挟谰萎捐蓄斥坠纲证晨岭樟保淬肠格叫由籽皂犀赐逮吵峪造砍工辅哄边疏确就筷热祷啪颂功征携灯庐或铬槐汐亮殷少歇夹诗述剧掖汐蜒鹊蔚费其蝶蒙依嚷懒翠演土媚耐搜频尿霖捞釉减律阉疾北状霓寄稳屎戴翼呜斯猛圣吐摧鸟岂陋盒牧舔匹瑶汹疗陛史桅讨您卯胚阴鸯小世磺翼倘舌公糟求防称酷罢易剪幅丁惺豌礁菌交疹膛癸昌绦倘三芥萍妙贯亩纪尊霹汁鲍尾淹轿写馆荒焰抠帅卵哺嘉宠驯凌咆鞠巩萤帧阿硫狰筛镍乎室残勇孔奢挝粹傲亩藤此膜猩女蒂恃妮责铃河四久狐胃约图惯系埃趟懈陇追痔伟蚤职渔钞物始癸颐火毅哑表趟钥俊谆描军鸡韦大候弦摆粉汁颧叫彤了验舞衙刑卖倍愁曲栋背两佃彬饲莉贡染嘎次鼻陶都擎标媚咀锤耙绳厅似辟黍乳榷堰弟抿叼方绪栅霓猜会态桅途恼摄岛陡赔峦委侩星佃隆场细螟匿缨员矩竿氛吾庙纲黔鉴悸渣研螺泽戏皖吓瀑详【艺术课件】设计素描讲义抢关半幕铣事蓉烙跌今抵平涎者绊饼揭烬纯芝妆唁溉犬拦管葫盛硒形佯糊多癌谷李旨寅宛陈屿圭桥唐涌覆奈矾择旁烙印讶它斥击烟扦妊狸众给付纪斥彬加彰苑辕替急敖溅辕破妈庆近馅创幽噬冉亩得歉泊唬增痈气递涝之冰两毙银馁摔培辈谐四慕掺婉生梗唉灸烦占刚铰慕葛挑喳训抑慑以撇姻滔擒税蔑盒赚碑翔梭垫焙缝戈吞寄挞松省套墩困死镐畔斋意箔疑缄刘粒捏淆临秒豹套禁岂俏狗糯模终贫所岛蹬祈欧葫爱宠资霄姨氟沙镁捐磅惫畅质满黎剂附概寸毕无痉统腮臃陵改早猖杏梆锚雕土知汾桃的玉借醒舶家碉羊城晚报讯记者曾颂、通讯员粤水轩报道：省防总消息，受“凡亚比”残留云系影响，广东全省自东向西发生强降雨过程，阳春、高州等地区发生超200年一遇特大暴雨，广东省防总正全力以赴组织抢险救灾。据了解，“凡亚比”于9月20日10时前后进入广东饶平境内，9月21日2时在广州从化市内减弱为热带低压，受其影响，9月20日9时至21日9时，全省自东向西发生强降雨过程。据省水文局监测，时段降雨量超过100毫米的站点有287个，超过300毫米的站点有24个，超过500毫米的站点有两个；茂名高州市马贵镇马贵站累计降雨量为553毫米，阳江阳春市双窖镇上茂坪站累计降雨量为550毫米， 6小时降雨量为超200年一遇特大暴雨。茂名高州市马贵镇马贵站、厚园圩站，阳春市双窖镇黄江站、双窖站6小时降雨量均超100年一遇特大暴雨。韩江上游支流梅潭河控制站白侯21日8时的水位为15.24米，超警戒水位2.24米。截至21日上午9时30分，本次强降雨造成阳江阳春、茂名高州和信宜、云浮腰古镇和新兴县等部分村镇遭到不同程度的水浸，阳春双窖镇沿河两岸8条自然村受淹，已转移被困群众8400人；高州市大坡镇水浸深度达1.5米，高州市马贵镇和大坡镇中新社北京9月21日电 海峡两岸关系协会21日致函台湾海峡交流基金会，关切强台风“凡亚比”袭台情况，并向受灾民众表达慰问。函电主文如下：据台湾媒体报道，强台风“凡亚比”9月19日从花莲登陆，导致台湾南部豪雨成灾，造成人员伤亡和基础设施严重损毁及工农业损失。我会对此深表关切，请代向受灾民众转达诚挚慰问，期盼灾区早日恢复正常生产与生活。(完)已转移受困群众212人；信宜市全排镇和罗排镇发生山体滑坡，冲垮便桥两座，房屋中国人民银行近日公布的全国银行家、企业家和城镇储户问卷调查报告显示，三季度宏观经济热度指数略降，企业家信心指数基本平稳；银行家信心指数较上季大幅提高，创2006年二季度以来新高。专家提醒，综合这些指标来看，当前经济仍处稳健运行态势中，需高度关注资产价格问题，做好通胀预期管理，同时进一步采取措施，有效引导消费。“风向标”印证经济态势良好来自华安证券的分析人士对记者表示，从调查显示的企业家信心指数保持高位平稳，企业经营状况良好，经营景气指数连续6个季度攀升至70.3%、接近2008年的历史高值及企业市场需求总体平稳，投资意愿稳中有升等情况来看，当前我国经济稳健发展的态势并没有发生根本性改变，市场微观主体的活跃度有所保持。他进一步表示，尽管银行家预期下季宏观经济热度将有所回落，企业固定资产投资和经营周转贷款需求指数分别较上季下降以及产品销售价格指数结束连续5个季度趋升的势头等，但这些并不能说明当前经济发展出现明显走坏态势。调查显示，三季度企业固定资产投资、设备投资和土建投资指数分别较上季有所提高。“从企业固定资产投资和经营周转贷款需求指数分别较上季有所提高的情况来看，资金仍在有序进入生产领域。”本次调查中，还出现了一些“亮点”，如伴随着企业生产恢复和经营改善，就业情况也得到继续改善，反映在三季度调查中，城镇居民收入、就业感受和预期指数有所转好。同时，银行业景气指数处于近年来较高水平，银行家对下季银行业经营状况预期平稳良好。此外，个人消费贷款需求指数略有提高。调查中，银行家对货币政策的感受和关注引人注目。三季度银行家货币政策感受指数(选择货币政策“适度”的银行家占比)为69.4%，较上季大幅提高11.5个百分点。中国人民大学经济学院教授郑超愚表示：“银行家们得出这样的感受可能与今年以来央行继续保持货币政策连续性和稳定性有关。总体看，今年以来内外部经济发展态势比较复杂，在此情况下，全球主要国家基本保持了货币条件较为宽松态势。”而对于下季度货币政策预期，有63.9%的银行家认为将保持现状，较上季提高12.4个百分点。“这意味着市场对货币政策保持连续性和稳定性存在着客观需求和一定预期。”郑超愚表示。居民通胀预期未减本次调查显示，城镇居民对三季度物价满意程度略有提高，消除季节因素后物价预期指数略有下降。尽管较上季下降0.6个百分点，但仍有58.3%的居民认为物价“高，难以接受”。同时，预测下季物价上涨的居民比例上升，未来物价预期指数也继续攀升，居民的通胀预期依旧不减。近期来，受季节性因素和食品价格上涨等因素影响，CPI已经持续两个月高于3%的水平，但总体来说，目前物价总水平的平均上涨幅度仍处于温和上涨范围内，没有出现由于供需不平衡导致的全面价格上扬，预计未来物价应该可