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文档简介

1 Western blot实验所需试剂配制方法制胶试剂：1. 30（W/V）丙烯酰胺溶液： 名称用量备注Acrylamide29gN-甲叉双丙烯酰胺(N，N-methylene-bisacylamide，BIS)1g充分搅拌溶解去离子水80ml定容至100ml，0.45m滤膜过滤除杂，置于棕色瓶中4保存，（注意：丙烯酰胺具有强烈的神经毒性，通过皮肤吸收并具有累积性，配制时应戴手套操作）2. 10（W/V）过硫酸铵： 名称用量备注过硫酸铵0.1g去离子水1ml现配现用（注意：10过硫酸铵溶液在4保存能使用两周左右，过期会失去催化效果）3. 1M Tris-HCL, pH=6.8 (36%的浓盐酸) ：名称用量备注Tris12.1去离子水80ml浓盐酸8.8-9ml预实验已确定去离子水加入去离子水定容至100ml后，室温保存4. 1.5M Tris-HCL, pH=8.8 (36%的浓盐酸) ：名称用量备注Tris18.17去离子水80ml浓盐酸2.8-3ml预实验已确定去离子水加入去离子水定容至100ml后，室温保存5. 10%SDS：名称用量备注SDS10g去离子水80ml加入去离子水定容至100ml后，室温保存缓冲液配置：6. 5Tris-Glycine Buffer(SDS-PAGE电泳缓冲液)名称用量备注 pH=8.3Tris15.1gGlycine94.0gSDS 5.0g去离子水800ml加入去离子水定容至1L后，室温保存7. 1膜转移缓冲液：名称用量备注Glycine2.9g2.9gTris5.8g5.8gSDS0g0.37g甲醇用前加200ml甲醇用前加200ml甲醇去离子水定容到1000ml定容到1000ml室温保存8. 1膜转移缓冲液：名称用量备注Glycine2.9g2.9gTris5.8g5.8gSDS0g0.37g甲醇用前加200ml甲醇用前加200ml甲醇去离子水定容到1000ml定容到1000ml室温保存9. 5SDS-PAGE Loading Buffer： 名称用量备注1MTris-HCL, pH=6.81.25ml2.5mlSDS0.5g1g甘油2.5ml5mlBPB（溴酚蓝）25mg50mg超纯水至5ml10ml分装200ul/管50充分溶解，30min，离心取上清，0.45uM过滤2ME10ul/200ul使用前添加，添加后可室温保存一个月10. 封闭缓冲液：名称用量备注脱脂奶粉5gTBST100ml充分溶解后， 4 保存其它：（备用）11. 考马斯亮蓝R-250染色液： 名称用量备注考马斯亮蓝R-2500.1g异丙醇25ml搅拌溶解冰醋酸10ml搅拌均匀去离子水65ml搅拌均匀，滤纸除去颗粒物，室温保存12. 考马斯亮蓝染色脱色液： 名称用量备注冰醋酸100ml甲醇100ml去离子水800ml充分混匀后使用13. 2%的丽春红贮备液(20mL)：名称用量备注丽春红5g三氯乙酸0.4
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