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文档简介
1 黄曲霉毒素的理化特性 黄曲霉毒素(aflatoxin,AF)是一类主要由黄曲霉产生的次级代谢产物,具有极强的毒性和“三致”作用,被世界卫生组织(WHO)的癌症研究机构划定为一类致癌物。其中,黄曲霉毒素B1(AFB1) 毒性最强,具有致癌、致畸和引起肝脏损伤的作用。AF广泛存在于各种食品原料及产品、动物饲料原料中,而且性质稳定。受污染的原料如花生粉、大豆粕、棉籽粕、玉米、高粱等,加工成饲料后仍有大量的AF存在,一旦受污染饲料被动物食用,不仅导致动物体重降低,诱发肿瘤和癌症,甚至死亡,而且还会通过食物链传给人体,诱发多种疾病1。 2 黄曲霉毒素物理去毒方法2.1 黄曲霉毒素主要物理去毒方法AF的物理去毒方法主要包括高温、辐照和吸附剂吸附等。2.2 黄曲霉毒素物理的去毒方法高温、辐照能破坏AF的结构,达到去毒目的,其分解温度需达到268以上,这种去毒方法能耗高且对食品和饲料中的营养成分破坏大,实际应用很少。阳光、微波、红外辐射及紫外线等也可有效破坏AF的化学结构。如用高压汞灯紫外线大剂量照射发霉的饲料能去除9799的霉菌毒素,但是强射线(紫外线等)的照射也会破坏食品和饲料中营养物质的结构 。所以在上面黄曲霉去毒方法中一般不会采用。而一般采用AF的吸附剂去毒1.2。AF的吸附剂去毒,常用吸附剂包括酵母细胞壁、硅铝酸盐、活性炭等。有研究表明,在畜禽饲料中添加0510的水合铝硅酸钠钙即能减轻或消除AF对畜禽的不良影响3。经报道了使用耦联有化学配基的硅藻土选择性吸附AF并进一步进行化学解毒的方法,效果良好。通过体外试验和动物饲养研究了3种不同吸附剂对AFB1去毒的效果,它们分别是吸附刺A(主成分为酵母培养物提取物)、吸附剂B(主成分为水合铝硅酸盐)、吸附剂C(主成分为酵母培养物及水合铝硅酸盐)。结果表明,在各种条件下吸附剂B的吸附能力最强,结合速率最快,去毒效果较好。目前饲料行业较多采用吸附剂吸附去毒,但是使用吸附剂吸附并不能真正彻底降解去除AF的毒性,被吸附的AF有可能在人体或动物胃肠道中重新释放,同时吸附剂可以吸附食品或饲料中的营养成而降低营养物质的利用率。因此,目前研究了许多新型的吸附剂,如生物吸附剂,但其应用效果还有待考察。经研究酵母菌细胞壁提炼而成的有机吸附剂对AF有很好的吸附作用,可以吸附90以上的AF,在各种物理吸附剂吸附毒素去毒方法中,酵母细胞壁可能成为控制饲料中AF的一个重要手段,一般常用酵母菌1026对AF进行去毒处理4。3 黄曲霉毒素化学去毒方法3.1 碱处理法碱处理法包括氧氧化钠法和氨化法。AF在NaOH溶液中能迅速水解生成邻位香豆素钠盐,这种钠盐溶于水,可以在碱炼后的水洗过程中去除。有研究表明,lNa0H水溶液处理含有AF的花生饼l d,可使毒素由849gkg降至276 gkg。另外,柳州市卫生防疫站和粮食局的试验结果表明:碱炼去毒法的效果可达75-98。氨处理法主要是利用塑料密封被霉菌污染的饲料,然后加氨密闭一定时间,氨与AFB1结合后发生脱羟作用,致使AFB1的内环发生裂解,达到去毒效果。研究表明,对于含毒量在0.2 mgkg以下的饲料采用0.2-04的氨剂量;含毒量在0.2-0.5mgkg的饲料采用0.5-0.7的氨剂量;含毒量0.6mgkg以上的饲料常用0.7%-1.0%的氨剂量。如果街闭时间延长,含毒量可相应降低5。碱处理法适合应用于含水量较高的青绿、青贮饲料以及液态粮油,去毒效率高,但不适合籽实、饼粕等大部分固体饲料原料,处理后原料残留有大量的氨。由于该方法使用的设备投资大,成本高,已逐渐被淘汰。3.2 氧化处理法AF遇氧化剂迅速分解,常通过氧化处理对AF进行去毒。常用的氧化剂有:次氯酸钠,臭氧,过氧化氢,氯气等。经研究表明,若同时使用过氧化氢和y-射线照射则可以更有效地降低AF的毒性,如4000 Gy的y-射线和5过氧化氢可使100 pg的AF完全灭活。此外,紫外光照射法也是利用紫外线的强氧化作用去毒。该方法主要问题在于处理效果不稳定,饲料中维生素等营养成分损失严重,处理成本较高3.5。3.3 其它方法经研究分析了不同质量浓度的二氧化氯、不同液料比和不同作用时间对花生中B族AF含量的影响6。结果表明:用10 gL的二氧化氯溶液,以液料比5:l对霉变污染的花生30 g浸泡30 min具有很好的脱毒效果,经处理后,花生中的AF含量低于20g /kg,低于我困限量标准。同时,他们还研究了柠檬酸对花牛中B族AF脱毒效果。结果表明:随着柠檬酸溶液质量浓度的增加,液料比的提高,作用时间的延长,花生中B族AF含量降低,脱毒效果好;用80 gL的柠檬酸溶液,液料比为5:l对花生浸泡30 min具有很好的脱毒效果。4 黄曲霉毒素生物去毒方法4.1 微生物菌体对AF的降解作用 自然界中许多微生物,如细菌、酵母菌、霉菌、放菌和藻类等,能去除或降解食品或饲料中的AF。经实验研究筛选出了鼠李糖乳杆菌LGG和鼠李糖乳杆菌LC705,2株菌能降解掉80AF。经研究了4株双枝杆菌和2株乳杆菌吸附AFB1的能力。结果表明:乳酸菌对AFB1的去除能力为20一50,用蒸馏水洗涤2次吸附AFB1的乳酸菌后,仍有10一40的AFB1吸附在乳酸菌上。通过液体培养60 h后,枯草杆菌、乳酸菌和醋酸菌能降解掉89、88、8lAFB1,且向培养基中添加钙或镁离子可以促进枯草杆菌对AF的去除作用。经研究了8株乳酸菌对AF的吸附作用,结果表明:乳酸菌结合AFB1的强度为4-50,其中干酪乳杆菌干酪亚CGMCCL.539吸附AFB1能力最强7。 微生物菌体去毒主要是通过菌体对AF的吸附作用完成的,菌体吸附AF后形成菌体AF复合体,微生物菌体自身的吸附能力下降,较易与AF一起排出体外,从而降低毒素的危害。这种吸附作用 是通过非共价方式结合的,疏水相互作用是维持该结构最主要的作用力,静电相互作用也有一定影响,而且这种结合主要与菌体细胞壁结构有关,同时受到菌体浓度和温度的影响,而微生物菌体无论是活菌体还是死菌体都有较强的吸附效果。也有研究表明,这种吸附作用是可逆的,毒素分子并没有消失,随着时间的延长,部分毒素会重新释放出来。所以,微生物吸附去毒并不是很理想的去毒方法。4.2 真菌代谢产物降解AF 早在1979年,Doyle等就发现了寄生曲霉能够产生降解AFB1的过氧化物酶,并报道过氧化物酶的量与AFB1被降解的量之间存在着直接的关系之后Huynh等报道,黑曲霉、寄生曲霉、绿色术霉、毛霉菌以及少数其他真菌对AFB1也有很好的降解能力,但其中的一些菌株在条件改变的情况下有可能产生AFB1。Motomuru等从白腐真菌和褐腐真菌的代谢产物中分离出了胞外解毒酶,研究了该酶解毒反应的最佳pH和温度,并将其纯化,发现其对AFB1有很好的降解作用。 经研究发现黑曲霉菌丝体提取物能够降解花生油中的AF8。这种活性物质的解毒作用效率高,降解过程是酶促反应。并通过谷壳培养法将解毒酶固定化,解决了酶制剂在含水量低的环境下难以作用的难题。利用一种酶将花生粉深度水解后,使微溶于水的AF从结合的疏水性氨基酸残基上充分游离,然后采用过滤法,逐步增加过滤精度,截留住大部分AF,从而使AF含量显著下降。4.3 微生物提取物降解AF 近年来,添加量少、效果显著的微生物菌体提取物降解AF研究取得了新进展。研究表明:通过酶解的方法从酵母的细胞壁提取出的醋化葡甘露聚糖(EGM),是一类新型抗原活性物质,能结合AF,EGM结合毒素的能力主要取决于它巨大的表面积,1kg的EGM具有离达220 m2的表面积,具有添加量少、作用显著及结合的霉菌毒素范围广等特点,因而受到日益广泛的关注。经前人研究了在pH 3、7、10和未调节pH的l0甲醇溶液中,加入l的EGM和5 mgmL的AFB1,结果表明,AFB1在所有的范围内都能被吸附掉。此外前人实验中得出在被AF污染的奶牛饲料中添加005(干物质基础)的EGM可降低牛奶中58的AFB1。这个结果与膨润土钠降低牛奶中AF的结果相似,但膨润土钠的添加量很高,为129。总结 AF可以通过物理、化学和生物学的方法去毒,降低其危害。物理、化学方法虽然能有效地除去大部分的AF,但对品质的破坏作用大,能耗高,已逐渐被淘汰。生物学方法去毒能使原料基质保持它原有的营养水平和风味,物理性状不被明显改变,去毒加工效率高、特异性强,原料基质和环境不会被污染,处理条件相对温和,而且有些还能增加原料基质的营养价值。参 考 文 献1 关舒,胡新旭,马秋刚,等黄曲霉毒素的传统去毒方法和生物降解研究进展J饲料工业,2008,29(24):5759.2 李娟娟,苏晓鸥不同吸附剂对黄曲霉毒素B1吸附效果的研究J中国畜牧兽医,2009,36(8):593 张国辉,何瑞闰,齐德乍饲料中黄曲霉毒素脱毒研究进展 J中日饲料,2004(16):36384 齐德乍,刘凡,于炎湖,等蒙脱石对黄曲霉毒素B1的脱毒研究J中国粮油学报,2004,19(6):7l755 范红印饲料中黄曲霉毒素的综合防治J河北畜牧兽医,2003,19(1):40416 李志刚,杨宝兰乳酸菌对黄曲霉毒素B1吸附作用的研究J中国食品卫生杂志,2003,15(3):2122157 朱新贵,林捷几种食品微生物降解黄曲霉毒素作用的研究J食品科学,200l,22(10):65688 刘大岭,姚冬生,梁生,等影响真菌E-2活性物对黄曲霉毒素降解效力的真菌培养条件的研究J广东药学院学报,1996,12(3):
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