脑力静胶囊质量标准(草案)070628.doc

脑力静胶囊质量标准（草案）一、药品质量标准（草案）脑力静胶囊 Naolijing Jiaonang【处方】 大枣 625g 小麦 2080g 甘草流浸膏 35g 维生素B1 500mg 甘油磷酸钠（50）50g 维生素B2 250mg 维生素B6 500mg【制法】 以上七味，取大枣加水煎煮二次，每次2.5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.20（4045），放冷，加2倍量乙醇，搅匀，静置24小时，取上清液滤过；取小麦加水煮沸10分钟后，于7080温浸二次，每次2小时，合并浸渍液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.02，放冷，加等量的乙醇，搅匀，静置24小时，取上清液滤过；合并上述滤液，回收乙醇，并浓缩至相对密度为1.35（5055）的清膏，加入甘草流浸膏等五味，混匀，加入微晶纤维素、羧甲淀粉钠适量，混匀，减压干燥，粉碎，制成颗粒，减压干燥，包薄膜衣，装入胶囊，制成1000粒，即得。【性状】本品为硬胶囊，内容物为棕黄色至棕褐色的颗粒；气微，味微甜。 【鉴别】（1）取本品内容物0.5g，研细，加水10ml使溶解，滤过，滤液加氢氧化钠试液2.5ml、铁氰化钾试液0.5ml与正丁醇5ml，强烈振摇2分钟，放置使分层，溶液置紫外光灯(365nm)下观察，正丁醇层显蓝色荧光。（2）取本品内容物0.1g，研细，加水20ml使溶解，滤过，滤液摇匀，溶液置紫外光灯(365nm)下观察，显黄绿色荧光。（3）取本品内容物1g，研细，加水20ml使溶解，滤过，滤液加稀硝酸10ml与钼酸铵试液5ml，置沸水浴中加热2分钟，即生成黄色沉淀。（4） 取本品2g，研细，加水20ml使溶解，滤过，滤液加石油醚（6090）20ml振摇提取，弃去石油醚液，加乙醚50ml振摇提取，分取乙醚液，蒸至约1ml，作为供试品溶液。另取大枣对照药材1g，加水100ml，煎煮2小时，滤过，滤液浓缩至20ml，同供试品溶液的制备方法制成对照药材溶液。照薄层色谱法（中国药典2005年版一部附录 B）试验，吸取供试品溶液10l，对照药材溶液5l，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯乙酸乙醋冰醋酸（14：4：0.5）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10硫酸乙醇溶液，105加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。 【检查】 应符合胶囊剂项下有关的各项规定（附录 L） 【含量测定】 维生素B1、B2、B6 照高效液相色谱法（中国药典2005年版一部附录VI D）测定。色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以三乙胺冰醋酸甲醇0.015mol/L庚烷磺酸钠（0.2：7.5：175：820）为流动相A，以甲醇为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；检测波长为 270nm。理论板数按维生素B2峰计算应不低于4000。时间（分钟）流动相A（）流动相B（）02010002030100600403040604040416010040041451000对照品溶液的制备 分别精密称取105干燥2小时的维生素B1、维生素B2、维生素B6对照品适量，加15%甲醇制成每1ml各约含25g、12.5g、25g的溶液，即得。供试品溶液的制备 取装量差异项下的本品内容物，研细，取约0.4g，精密称定，精密加入15%甲醇25ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用15%的甲醇补充减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20l， 注入液相色谱仪，测定，即得。本品每粒含维生素B1（C12H17ClN4OSHCl）应为标示量的70.0120.0%；含维生素B2（C17H20N4O6）应为标示量的80.0115.0；含维生素B6（C8H11NO3HCl）应为标示量的80.0115.0%。甘草流浸膏 照高效液相色谱法（中国药典2005年版一部附录VI D）测定。色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇0.2mol/L醋酸铵溶液冰醋酸（67：33：1）为流动相；检测波长为250nm。理论板数按甘草酸单铵盐峰计算应不低于2000。 对照品溶液的制备 取甘草酸单铵盐对照品适量，精密称定，加流动相制成每1ml约含30g的溶液 （每1ml含甘草酸单铵盐30g，折合甘草酸为29.385g），即得。供试品溶液的制备 取装量差异项下的本品内容物，研细，取约0.8g，精密称定，精密加入流动相25ml，称定重量，超声处理20分钟，放冷，再称定重量，用流动相补充减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。测定法 精密吸取对照品溶液与试品溶液各20l，注入液相色谱仪，测定，即得。本品每粒含甘草流浸膏以甘草酸(C42H62016)计，不得少于0.32mg。【功能与主治】 养心安神，和中缓急，补脾益气。用于心气不足引起的神经衰弱，头晕目眩，身体虚弱，失眠健忘，精神忧郁，烦躁。【用法与用量】 口服，一次4粒，一日3次。【规格】 每粒装0.4g。【贮藏】 密封。二、药品质量标准草案起草说明根据国药典中字（2006）补0145号“国家药典委员会新药转正补充通知”要求，脑力静胶囊的拟转正标准还需建立维生素B1、维生素B2和甘油磷酸钠的含量测定方法，建议增加大枣的薄层鉴别。本文据此对脑力静胶囊的质量标准进行了研究和修订。1. 维生素B1、B2、B6含量测定方法的研究1.1研究概况水溶性维生素的分析方法通常有分光光度法、分子荧光法、高效液相色谱法15 和微生物法等。 分光光度法的样品前处理一般较复杂,且干扰物质多,测定结果偏高;分子荧光法的样品预处理也很复杂,在对多维片和维生素强化食品进行多种维生素的检测时,会给定量带来一定的困难;而用高效液相色谱法测定水溶性维生素,样品前处理简单,样品用量少,分离速度快,并可一次性分析多种水溶性维生素。1.2仪器与试药高效液相色谱仪1（LC-20AT 日本岛津公司），SHIIMADZU VPODS 25m， 1504.6mm；高效液相色谱仪2（Agillent 1100，依利特 Hypersil ODS 25m， 2504.6mm ）；JL360DT超声仪。维生素B1、B2、B6对照品：由中国药品生物制品检定所提供，批号110704200420、110705200425、110745200415，供含量测定用。脑力静胶囊样品：由安徽福康药业有限责任公司提供，批号分别为07010101、07010102、07010103、07010104、07010105、07010106、07010107、07010109、07010110。实验所用试剂中乙腈、甲醇为色谱纯，其余均为分析纯；水为纯化水。1.3方法与结果1.3.1提取条件的选择1.3.1.1提取溶剂的选择方法：取样品（07010110）内容物，研细，取约0.3g，精密称定，分别精密加入15%甲醇、50%甲醇和甲醇20ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用相应的溶剂补充减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。分别测定维生素B1、B2、B6的含量，结果见表1。表1 不同提取溶剂的选择结果溶剂15%甲醇50%甲醇甲醇测得量（mg/g）B61.181.10/B20.670.52/B10.860.870.78由表1可知，维生素B1、B2、B6为水溶性维生素，以15甲醇提取量最高，选15甲醇为提取溶剂。1.3.1.3提取方法的选择方法：取样品（07010110）内容物，研细，取约0.3g，精密称定，精密加入15%甲醇20ml，称定重量，加热回流30分钟，放冷，再称定重量，用15%甲醇补充减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。分别测定维生素B1、B2、B6的含量，结果见表2。表2 不同提取方法的选择结果提取方法超声法回流法测得量（mg/g）B61.181.21B20.670.66B10.860.85试验结果显示：超声法和回流法对维生素的溶出，无显著影响。考虑到实验的简单和方便，选择超声法。1.3.1.2超声时间选择方法：取样品（07010110）内容物，研细，取约0.3g，精密称定，精密加入15%甲醇20ml，称定重量，分别超声15、30和45分钟，放冷，再称定重量，用15%甲醇补充减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。分别测定维生素B1、B2、B6的含量，结果见表3。表3 超声时间的选择结果超声时间（min）153045测得量（mg/粒）B61.161.181.17B20.660.670.57B10.870.860.86试验结果显示：超声时间的长短对维生素的溶出，无显著影响。考虑到超声仪型号及功率的差异，暂定超声处理30分钟。1.3.2供试品溶液的制备取本品内容物，研细，取约0.4g，精密称定，精密加入15%甲醇25ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用15%的甲醇补充减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。1.3.3阴性对照溶液的制备取分别缺维生素B1、B2、B6的样品，研细，取约0.4g，精密称定，精密加入15%甲醇25ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用15%的甲醇补充减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。1.3.4 对照品溶液的制备分别精密称取105干燥2小时的维生素B1、维生素B2、维生素B6对照品适量，加15%甲醇制成每1ml各含25g、12.5g、25g的溶液，即得。1.3.5色谱条件的选择1.3.5.1最大吸收波长的选择取维生素B1、B2、B6适量，分别用15甲醇稀释成一定浓度，按紫外可见分光光度法（中国药典2005年版二部附录 A），分别在320nm220nm波长范围内扫描测定，结果见图1。综合三种对照品的紫外扫描图谱及相关文献，选择270nm的波长为测定波长。图1-1 维生素B1紫外扫描图谱图1-2维生素B2紫外扫描图谱图1-3维生素B6紫外扫描图谱1.3.5.2流动相的选择采用HPLC法同时测定多种水溶性维生素。目前所用的流动相系统主要可分为缓冲盐系统和离子对系统。采用缓冲盐系统的报道有：如黄红霞6报道的一种方法，色谱条件为：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂； 流动相A：甲醇； 流动相B：水（0.1mol/L NaAc-Hac，0.02%三乙胺，pH4.18），进行梯度洗脱，检测波长254nm。王雪梅7报道色谱条件为：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；pH5.66磷酸盐缓冲液-甲醇（75：25）为流动相，检测波长254nm，9分钟内实现良好分离。李来生8等用甲酸铵-甲酸溶液(pH = 4. 5 ,含0. 4 %二乙胺) + 甲醇(75 + 25) 为流动相采用反相色谱法同时测定食品中水溶性维生素(Vitamin) C、B5 、B6、B1 、B2 和B12的含量，12 min 内实现了良好分离。采用离子对系统的报道有：陆帼荣9等用己烷磺酸钠冰醋酸液为流动相同时测定出复合维生素B片中维生素B1、B2、B6和烟酰胺的含量。李克10以Hypersil C18化学键合硅胶为固定相,以甲醇0.5 %(体积分数) 醋酸水溶液(含215 mmol/ L己磺酸钠,pH 2.8) (体积比为1882) 为流动相,等度洗脱,紫外检测器于280 nm 波长下检测复合维生素片中烟酰胺、维生素B1 、维生素B2 、维生素B6 等4 种水溶性维生素的含量。根据以上所述，选择考察了缓冲盐流动相系统和离子对流动相系统。1.3.5.2.1磷酸盐系统参考文献报道分别考察了以下几种流动相：流动相系统1:0.05mol/L KH2PO4（pH6.0）-甲醇（70：30），检测波长为 270nm；流动相系统2:0.05mol/L KH2PO4（pH6.0）-甲醇（90：10），检测波长为 270nm；流动相系统3：流动相A： 0.05mol/L KH2PO4（pH6.0），流动相B：甲醇，按下表进行梯度洗脱时间（分钟）流动相A（）流动相B（）02090501050202150905010结果表明：上述流动相系统对照溶液中维生素B1、B2、B6可完全分离，18min内维生素B1、B2、B6全部出完，但在前6min样品出峰较多，对含量测定有较大干扰。磷酸盐系统不适合本样品的分离。1.3.5.2.2离子对系统参考脑力静糖浆中维生素B1、B2、B6的色谱条件选择流动相如下：流动相A：三乙胺冰醋酸甲醇0.015mol/L庚烷磺酸钠（0.2：7.5：175：820），流动相B：甲醇，按下表进行梯度洗脱；时间（分钟）流动相A（）流动相B（）020100020301006004030406040404160100400检测波长为 270nm。结果表明，对照品和样品溶液中维生素B1、B2、B6可完全分离，但在连续进样时，由于40min后流动项平衡时间较短，对下一针的出峰时间影响很大，故改变流动相的比例如下：流动相A：三乙胺冰醋酸甲醇0.015mol/L庚烷磺酸钠（0.2：7.5：175：820），流动相B：甲醇，按下表进行梯度洗脱；时间（分钟）流动相A（）流动相B（）02010002030100600403040604040416010040041451000检测波长为 270nm。结果表明，对照品和样品溶液中维生素B1、B2、B6可完全分离，连续进样时，维生素B1、B2、B6的出峰时间较稳定。1.3.5.3系统适用性试验1.3.5.3.1精密度测定精密吸取维生素B1、B2、B6对照品溶液，进样5次，分别测定峰面积值，结果见表4。表4 精密度测定结果对照品名称维生素B6维生素B2维生素B1A20441710931804692212073801070132459839208011106645545110020996710761044664212093731076196461720207829.61076413.4461660.2RSD(%)1.01.01.51.3.5.3.2理论板数(n)的测定照高效液相色谱法（中国药典2005年版二部附录V D）系统适用性方法操作，量取供试品溶液，注入高效液相色谱仪，在两台仪器上测定，记录色谱图，结果见表5和图2。表5 理论板数(n)的测定结果高效液相色谱仪型号色谱柱维生素B2理论板数日本岛津公司LC-20ATSHIIMADZU VPODS 25m， 1504.6mm8876Agillent 1100依利特 Hypersil ODS 25m， 2504.6mm10481图21日本岛津公司LC-20AT测定色谱图图22 Agillent 1100测定色谱图考虑到一些实际因素，将理论板数定为：以维生素B2峰计算，应不低于4000。1.3.5.3.3分离度(R)的测定 照高效液相色谱法（中国药典2005年版二部附录V D）系统适用性方法操作，量取供试品溶液，注入高效液相色谱仪，在两台仪器上测定，记录色谱图，维生素B2与相邻峰维生素B1的分离度，结果见表6和图2。表6 理论板数(n)的测定结果高效液相色谱仪色谱柱维生素B2与B1的分离度日本岛津公司LC-20ATSHIIMADZU VPODS 25m， 1504.6mm3.340Agillent 1100依利特 Hypersil ODS 25m， 2504.6mm2.731.3.5.4优选的色谱条件和系统适用性综合上述实验结果，确定色谱条件和系统适用性如下：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相A：三乙胺冰醋酸甲醇0.015mol/L庚烷磺酸钠（0.2：7.5：175：820），流动相B：甲醇，按下表进行梯度洗脱；时间（分钟）流动相A（）流动相B（）02010002030100600403040604040416010040041451000检测波长为 270nm，理论板数按维生素B2峰计算应不低于4000，维生素B2与维生素B6的分离度大于1.5。1.3.6专属性考察取维生素B1、B2、B6对照品溶液10ul，脑力静胶囊供试品溶液及不含维生素B1、B2、B6的阴性对照溶液（安徽福康药业有限责任公司提供）各20ul，注入液相色谱仪，记录色谱图，试验结果表明：维生素B1、B2、B6与其他物质的分离符合规定，阴性样品在此条件下无干扰，高效液相色谱图见图3。 图3-1维生素B1、B2、B6对照品 图3-2 脑力静胶囊供试品 图3-3不含维生素B1的阴性对照 图3-4不含维生素B2的阴性对照图3-5不含维生素B6的阴性对照1.3.7标准曲线的制备及线性范围的考察精密称取维生素B112.51mg、维生素B210.56mg、维生素B613.95mg，分别置100ml量瓶中，加15%甲醇适量水浴加热并超声使溶解，放冷，用15%甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液，从中分别精密量取适量，等量混合，摇匀，作为对照品溶液。精密吸取对照品溶液2l、4l、6l、8l、12l、16l注入液相色谱仪，记录色谱图，分别以维生素的峰面积为纵坐标（Y），以维生素的量（g）为横坐标（X），进行线性回归，得回归方程。结果分别见表7-1、7-2、7-3及图4-1、4-2、4-3。表7-1：维生素B1线性范围考察表B1（g）峰面积（A）回归方程0.0834150.29Y=1471.8X+18.689r=0.99980.1668255.160.2502385.420.3336509.500.5004755.470.66721002.28表7-2：维生素B2线性范围考察表B2（g）峰面积（A）回归方程0.0704 346.89 Y=4893.6X 35.137r=0.99960.1408 652.55 0.2112 972.95 0.2816 1311.15 0.4224 2031.65 0.5632 2742.16 表7-3：维生素B6线性范围考察表B6（g）峰面积（A）回归方程0.0930 61.57 Y=649.28X 5.2812r=0.99980.1860 130.55 0.2790 186.89 0.3720 246.49 0.5580 367.92 0.7440 487.47 图4-1维生素B1线性范围考察图图4-2维生素B2线性范围考察图图4-3维生素B6线性范围考察图 1.3.8重复性试验 取同一批号（07010110）的样品5份，分别依法制成供试品溶液，测定维生素的含量，结果见表8。 表8 重复性试验结果编号12345平均值RSD（%）B1（mg/g）0.910.870.890.870.890.89 1.9 B2（mg/g）0.660.650.670.660.640.66 1.7 B6（mg/g）1.261.241.231.261.271.25 1.3 1.3.9稳定性试验取新制备的供试品溶液，每隔一段时间，测定一次含量，结果见表9，结果表明：供试品溶液在24小时内基本稳定。表9 溶液稳定性试验结果时间(h)012481224B1峰面积364.91 362.96 360.83 356.65 362.32 359.66 366.81 XSD： 362.023.37 RSD%：0.9%B2峰面积825.90 819.75 839.40 841.14 843.64 844.21 857.92 XSD： 838.8512.60 RSD%：1.5%B6峰面积206.37 207.95 205.47 200.84 206.23 211.64 206.73 XSD： 206.463.21 RSD%：1.6%1.3.10 加样回收试验精密称取维生素B1、维生素B2、维生素B6对照品8.26、5.78、11.50mg，置50ml量瓶中，加15%甲醇适量水浴加热并超声使溶解，放冷，用15%甲醇稀释至刻度，摇匀，从中分别精密量取1ml，置具塞三角烧瓶中，水浴蒸干，取已知维生素含量的供试品（07010110）内容物6份，每份0.2g，精密称定，加入已蒸干对照品的具塞三角烧瓶中，精密加入15%甲醇20ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用15%的甲醇补充减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，分别测定维生素B1、维生素B2、维生素B6的含量，计算回收率（见表10）。表10-1 维生素B1 加样回收率试验结果编号取样量（g）样品中维生素B1的含量（mg）添加维生素B1的量（mg）测得维生素B1的总量（mg）回收率（%）平均值（%）10.18740.16680.16520.319192.296.9RSD=3.4%20.19250.17130.16520.3402102.230.19330.17200.16520.328995.040.18720.16660.16520.328898.250.19900.17710.16520.337797.260.19800.17620.16520.336196.8回收率（%）测得维生素B1的总量样品中维生素B1的量/添加维生素B1的量100表10-2 维生素B2 加样回收率试验结果编号取样量（g）样品中维生素B2的含量（mg）添加维生素B2的量（mg）测得维生素B2的总量（mg）回收率（%）平均值（%）10.18740.12370.11560.236797.895.2RSD=2.3%20.19250.12710.11560.236794.830.19330.12760.11560.236794.440.18720.12360.11560.236697.850.19900.13130.11560.237892.160.19800.13070.11560.239794.3回收率（%）测得维生素B2的总量样品中维生素B2的量/添加维生素B2的量100表10-3维生素B6加样回收率试验结果编号取样量（g）样品中维生素B6的含量（mg）添加维生素B6的量（mg）测得维生素B6的总量（mg）回收率（%）平均值（%）10.18740.23430.23000.4651100.499.5RSD=1.0%20.19250.24060.23000.468899.230.19330.24160.23000.466897.940.18720.23400.23000.4643100.150.19900.24880.23000.4799100.560.19800.24750.23000.474798.8回收率（%）测得维生素B6的总量样品中维生素B6的量/添加维生素B6的量1001.3.11样品测定及含量限度的确定按正文含量测定项下的方法，测定了10批样品中三种维生素的含量，结果如下。表11 样品测定结果表样品批号维生素B1（）维生素B2（）维生素B6（）X1X2XX1X2XX1X2X0701010172.772.872.891.291.491.385.586.285.80701010277.775.576.693.190.992.089.987.088.40701010373.078.075.590.692.291.486.888.087.407010104114.3114.0114.291.892.292.080.781.180.907010105114.7115.7115.293.794.594.181.482.381.907010106115.8116.2116.093.893.693.781.781.081.407010107115.9118.0117.093.797.695.681.182.181.60701010874.072.673.390.785.988.389.584.486.90701010975.579.977.791.898.895.486.191.488.80701011074.070.772.4106.3105.8106.1102.4100.2101.3根据10批样品的测定结果，并考虑到大生产操作中的实际情况，暂定本品每粒含维生素B1（C12H17ClN4OSHCl）应为标示量的70.0120.0%；含维生素B2（C17H20N4O6）应为标示量的80.0115.0；含维生素B6（C8H11NO3HCl）应为标示量的80.0115.0%。2 甘油磷酸钠测定磷含量的主要方法有分光光度法、原子光谱法、X-射线荧光光谱法、色谱法和质谱法等11，其中分光光度法无需专门的仪器设备，目前应用较多12, 13，本文主要考察了分光光度法测定脑力静胶囊中磷的含量。2.1 仪器与试药岛津2410型紫外分光光度计；电阻炉 。 氧化锌、钼酸铵、对苯二酚、醋酸钠、磷酸二氢钾、硫酸、盐酸均为分析纯。脑力静胶囊由安徽福康药业有限责任公司提供。2.2 消化条件的考察参照中国药典2005年版二部“甘油磷酸钠注射液” 含量测定方法，对消化条件中加氧化锌的用量进行考察。方法：取本品（07010110）约0.1g，精密称定，置坩埚中，分别加氧化锌0、1、2g，灼烧至烟雾消失，将坩埚置600炽灼1小时，取出，放冷，加盐酸溶液（12）10ml，缓缓加热至沸，煮沸5分钟使内容物溶解，移至25ml量瓶中，容器用水适量洗涤，洗液并入量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得。精密称取105干燥2小时的磷酸二氢钾适量，加水溶解，制成0.1mg/ml的溶液，作为对照品溶液。精密量取对照品溶液5ml，供试品溶液5ml，分别置25ml量瓶中，加水10ml，钼酸铵硫酸溶液（取钼酸铵5g，加0.5mol/L的硫酸溶液100ml）1ml，对苯二酚硫酸溶液（取对苯二酚0.5g，加0.25mol/L硫酸溶液100ml，本液临用新配）1ml和50醋酸钠溶液3ml，加水稀释至刻度，摇匀放置5分钟，照分光光度法，在720nm的波长处测定吸收度。结果见表12。表12 样品消化中氧化锌的用量考察结果表氧化锌（g）012测得量（mg/g）4.504.555.63结果表明，氧化锌的用量以2g为最佳。试验中还考察了氧化锌的用量为3g时的情况，结果发现“加入3g氧化锌的坩埚置600炽灼1小时，取出，放冷，加盐酸溶液（12）10ml，缓缓加热至沸，煮沸5分钟时内容物不能全部溶解”，表明氧化锌的用量过多，因此没继续考察。2.3 供试品溶液的制备取本品约0.1g，精密称定，置坩埚中，加氧化锌2g，灼烧至烟雾消失，将坩埚置600炽灼1小时，取出，放冷，加盐酸溶液（12）10ml，缓缓加热至沸，煮沸5分钟使内容物溶解，移至25ml量瓶中，容器用水适量洗涤，洗液并入量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得。2.4 阴性对照溶液的制备取不含甘油磷酸钠的样品约0.1g，置坩埚中，加氧化锌2g，灼烧至烟雾消失，将坩埚置600炽灼1小时，取出，放冷，加盐酸溶液（12）10ml，缓缓加热至沸，煮沸5分钟使内容物溶解，移至25ml量瓶中，容器用水适量洗涤，洗液并入量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得。2.5 对照品溶液的制备精密称取105干燥2小时的磷酸二氢钾适量，加水溶解，制成0.1mg/ml的溶液，作为对照品溶液。2.6 测定条件选择2.6.1 测定波长的选择 取显色后的样品溶液，进行紫外扫描，结果发现在680nm800nm范围内是一条平坦的曲线，无最大吸收波长，参照中国药典2005年版二部“甘油磷酸钠注射液”含量测定方法，选择测定波长为720nm。样品的紫外扫描图谱见附图。2.6.2 显色时间和样品溶液稳定性的考察方法：取显色后的样品溶液，摇匀，立即测定吸收度，并每隔一段时间，继续测定吸收度，结果见表13和图5。表13 显色时间和样品溶液稳定性的考察结果表显色时间（min）34567891015202530A0.5740.5740.5760.5740.5720.5700.5690.5670.5620.5480.5080.492A降低（%）/0-0.35-0.69-1.04-1.22-1.56-2.43-4.86-11.81-14.58图5显色时间和样品溶液稳定性的考察图由表13和图5可知，样品显色后在5分钟有最大吸收，然后吸收度逐渐下降，10分钟时下降1.56%，20分钟时下降4.86%，因此样品应在显色后5分钟立即测定，测定时间不得超过5分钟。2.7 优选的含量测定方法综合上述实验结果，确定含量测定方法如下：对照品溶液的制备：取105干燥2小时的磷酸二氢钾对照品适量，精密称定，加水溶解，制成每1ml约含0.1mg的溶液，即得。供试品溶液的制备：取装量差异项下的本品内容物，研细，取约0.1g，置坩埚中，加氧化锌2g，灼烧至烟雾消失，将坩埚置600炽灼1小时，取出，放冷，加盐酸溶液（12）10ml，缓缓加热至沸，煮沸5分钟使内容物溶解，移至25ml量瓶中，容器用水适量洗涤，洗液并入量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得。测定法：精密量取对照品溶液5ml，供试品溶液5ml，分别置25ml量瓶中，加水10ml，钼酸铵硫酸溶液（取钼酸铵5g，加0.5mol/L的硫酸溶液100ml）1ml，对苯二酚硫酸溶液（取对苯二酚0.5g，加0.25mol/L硫酸溶液100ml，本液临用新配）1ml和50醋酸钠溶液3ml，加水稀释至刻度，摇匀放置5分钟，照分光光度法，在720nm的波长处测定吸收度。2.8 专属性考察取阴性对照溶液，照含量测定法测定，试验结果表明：不含甘油磷酸钠的样品溶液中含P为1.1618mg/g1.1346mg/g。根据所测样品含量，阴性的干扰为20%。试验结果表明该方法的专属性不强，该方法测定的是脑力静胶囊中总磷的含量，脑力静胶囊中不仅甘油磷酸钠中含磷，大枣、小麦中也含有有机磷，使得阴性的干扰达到20%，因此该方法通过测定总磷的含量不能精确的反映样品中甘油磷酸钠的含量。2.9 线性关系考察与标准曲线的制备 精密称取磷酸二氢钾对照品（105干燥2小时）41.18mg，置25ml量瓶中，加水适量，使溶解，并稀释至刻度，摇匀，从中精密量取3ml置25ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，从中分别精密量取1ml、2ml、4ml、6ml、8ml，置10ml量瓶中，分别加水稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。照含量测定法测定，记录吸收度，以吸收度为纵坐标（Y），测定时磷浓度（g/ml）为横坐标（X），进行线性回归，得回归方程。结果见表14及图6。表14 磷含量测定标准曲线磷酸二氢钾浓度（g/ml）磷浓度（g/ml）A回归方程3.95330.89960.111Y=0.1142X 0.0093r=1.00007.90661.79930.21415.81313.59860.42123.71975.39790.62931.62627.19720.828图6 磷含量测定标准曲线上述结果表明：磷在0.8996g/ml7.1972g/ml范围内呈良好的线性关系。2.10重复性试验取样品(07010110)，照含量测定法分别进行6次含量测定，结果见表15表15 重复性试验结果（n1）序号123456取样量（g）0.1024 0.1000 0.1022 0.1025 0.1040 0.1073 A0.570 0.504 0.576 0.518 0.589 0.586 磷浓度（g/ml）4.9121 4.3339 4.9647 4.4566 5.0786 5.0523 含量（mg/g）5.9962 5.4174 6.0723 5.4348 6.1040 5.8857 XSD5.81840.3131（RSD=5.38%） 2.11回收率试验精密称取磷酸二氢钾对照品（105干燥2小时）131.90mg，置100ml量瓶中，加水适量，使溶解，并稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液。取本品（07010110）约0.1g，精密称定，共6份，置坩埚中，分别精密加入对照品储备液1ml，加氧化锌2g，灼烧至烟雾消失，将坩埚放入600炽灼1小时，取出，放冷，加盐酸溶液（12）10ml，缓缓加热至沸，煮沸5分钟使内容物溶解，移至50ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，得供试品溶液。照含量测定法测定，计算回收率。结果见表16。表16 回收率试验试验结果(n6)序号123456取样量（g）0.05490.05240.05240.04930.05690.0503样品含磷量（mg）0.3194 0.3049 0.3049 0.2868 0.3311 0.2927 磷酸二氢钾加入量(mg)1.3191.3191.3191.3191.3191.319磷加入量(mg)0.3002 0.3002 0.3002 0.3002 0.3002 0.3002 A0.5420.5360.5110.5260.5560.512磷测定浓度（g/ml）4.7242 4.6719 4.4540 4.5847 4.8462 4.4627 磷测定量（mg）0.5905 0.5840 0.5567 0.5731 0.6058 0.5578 加样回收率（%）90.3 93.0 83.9 95.4 91.5 88.3 平均加样回收率（%）90.42.12样品测定对照品溶液的制备：取105干燥2小时的磷酸二氢钾对照品适量，精密称定，加水溶解，制成每1ml约含0.1mg的溶液，即得。供试品溶液的制备：取装量差异项下的本品内容物，研细，取约0.1g，置坩埚中，加氧化锌2g，灼烧至烟雾消失，将坩埚置600炽灼1小时，取出，放冷，加盐酸溶液（12）10ml，缓缓加热至沸，煮沸5分钟使内容物溶解，移至25ml量瓶中，容器用水适量洗涤，洗液并入量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得。测定法：精密量取对照品溶液5ml，供试品溶液5ml，分别置25ml量瓶中，加水10ml，钼酸铵硫酸溶液（取钼酸铵5g，加0.5mol/L的硫酸溶液100ml）1ml，对苯二酚硫酸溶液（取对苯二酚0.5g，加0.25mol/L硫酸溶液100ml，本液临用新配）1ml和50醋酸钠溶液3ml，加水稀释至刻度，摇匀放置5分钟，照分光光度法，在720nm的波长处测定吸收度。检查本品10批，结果见表17表17 含量测定结果（n2）样品批号磷含量（mg/粒）X1X2X070101012.392.732.56070101022.342.552.45070101032.932.652.79070101042.612.712.66070101052.282.542.41070101062.432.642.53070101072.652.502.58070101082.212.482.35070101092.452.362.40070101102.392.292.342.13 总结通过文献报道和试验研究可知，分光光度法测定脑力静胶囊中磷的含量步骤复杂，作为氧化还原反应，影响其测定结果的因素较多，导致测定结果的重复性不高（6次含量测定的RSD为5.38%）；样品显色后溶液较不稳定，在5分钟时有最大吸收度，然后吸收度逐渐下降， 5分钟下降1.56%，15分钟下降4.86%，25分钟下降14.58%，样品的最佳测定时间较短，不利于大量样品的测定；该方法的专属性不强，该方法测定的是脑力静胶囊中总磷的含量，脑力静胶囊中不仅甘油磷酸钠中含磷，大枣、小麦中也含有磷，使得阴性的干扰达到20%，因此该方法测定的磷的含量不能精确的反映样品中甘油磷酸钠的含量。综上所述，该方法暂不收入脑力静胶囊的质量标准。查阅文献报道，从甘油磷酸根的结构来看,它存在一个膦酸基团,是一个弱酸根的形式,pKa 5. 0 , 可以使用离子交换-抑制电导检测14-17 。施青红等采用离子色谱法对牙膏中的甘油磷酸钙含量进行测定，无需繁复的样品处理步骤，可快速、准确、灵敏的测定牙膏、补钙品等复杂基体中甘油磷酸钙，重现性好，选择性好。董晓莉使用IonPac AS18 色谱柱,配以淋洗液发生器,梯度淋洗可以很好地分离了牙膏中多种离子,并定性定量对甘油磷酸根进行了测定。毛细管电泳(capillaryelectrophoresis，CE)技术已被广泛用于离子的分析。Melanson等18在3.1min内分离了30种阴离子，这种分离速度和峰容量，是其他分析手段难以比拟的。林纲19等通过优选缓冲液体系，建立了阴离子的毛细管电泳(CE)检测法，测定天然有机氮源中可溶性无机磷的含量，并与分光光度法进行了比较。结果显示，CE法线性范围更广，结果准确，在自动化快速分析方面亦有较大优势。我们也在尝试用新的方法测定脑力静胶囊中甘油磷酸钠的含量，但上述两种方法需要专用的设备，如离子色谱仪和毛细管电泳仪等，因此该项工作目前还在开展中。3 大枣大枣主含有机酸、三萜甙类、生物碱类、黄酮类、糖类、维生素类以及谷甾醇。试验中我们曾用大枣对照药材的硫酸水解产物进行薄层鉴别，紫外光灯（365nm）下检视主斑点较清晰，但阴性对照有干扰，后参照2005版药典大枣鉴别项方法, 采用大枣对照药材作对照，供试品色谱中与对照药材色谱相应位置上显相同颜色的斑点，大枣的缺味阴性对照无干扰。3.1仪器与材料：市售普通G薄层板20cm10cm，(烟台大学生物科学与工程研究所；青岛海洋化工厂分厂；烟台大学生物科学与工程研究所)大枣对照药材：购于中国药品生物制品检定所（批号：121040-200304 ），供薄层鉴别用。3.2实验方法与结果：取脑力静胶囊2g，研细，加水20ml使溶解，滤过，滤液加石油醚（6090）20ml振摇提取，弃去石油醚液，加乙醚50ml振摇提取，分取乙醚液，蒸至约1ml，作为供试品溶液。根据处方组成，取除大枣外的其余药味，按工艺要求制成缺大枣的阴性制剂，同法制得大枣阴性对照溶液。另取大枣对照药材1g，加水100ml，煎煮2小时，滤过，滤液浓缩至20ml，同供试品溶液的制备方法制成对照药材溶液。照薄层色谱法（中国药典2005