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物流开题报告毕业论文 研究背景眼科最常见致盲眼病有白内障、青光眼、糖尿病视网膜病变和黄斑病等其中青光眼是继白内障后的第二致盲原因 物流开题报告毕业论文 我国青光眼的发病率为0.52%患病人数约为700万xx年资料显示世界青光眼发病人数到xx年将达到7000万双眼盲目人数达到840万(quigleyetal.xx)众多的青光眼患者和青光眼盲者不仅给患者带来极大的身心痛苦而且还造成社会和经济的巨大负担因此预防、控制及治疗青光眼十分重要且迫切青光眼是一种由于病理性眼压增高导致的具有特征性视神经结构损伤和视野缺损为表现的神经性退行性视神经病变其最终的结局是视网膜神经节细胞(rgcs)凋亡、视功能逐渐丧失(buckinghametal.xx)目前已有大量保护rgcs的研究结果主要包括：改善视乳头微循环、谷氨酸途径抑制剂、神经营养因子诱导热休克蛋白表达及抗氧化治疗等然而青光眼的发病机制至今尚未完全阐明信号转导、受体通道研究在rgcs损伤与保护中的作用近年来正得到关注最新的研究方向和靶点之一是关于能感受压力的受体通道可能参与传递病理刺激造成神经损伤(quigleyetal.xx)trpc6(transientreceptorpotentialc6)是一个新发现的、压力敏感、参与神经元存活与凋亡的钙离子通透膜通道蛋白本人曾参与课题trpc6通道在视网膜缺血再灌模型中对视网膜神经节的保护作用的研究并获得了有价值的前期研究结果：较为全面而精确的定位了trpc6通道基因和蛋白在sd大鼠视网膜、尤其是rgcs上的表达和分布trpc6在rgc层上有选择性的高表达;探讨了trpc6在大鼠视网膜缺血再灌(ischemiareperfusion,ir)损伤过程中的表达变化trpc6基因和蛋白在视网膜缺血损伤中的再灌注后24小时出现一过性的表达升高;在体的药理学实验结果显示其激动剂oag具有保护视网膜ir模型诱导的rgcs免受损伤而拮抗剂skf96365则促进了rgcs凋亡的发生本研究拟进一步探讨trpc6的作用机制研究发现脑源性神经营养因子(brainderivedneurotrophicfactor,bdnf)与trpc通道在信号转导、调控细胞存活的过程中有密切的联系xx年4月中国科学院上海神经科学研究所王以政研究员课题组在natureneuroscience上发表论文首次证实过表达trpc6/trpc3可保护小脑神经元对抗因血清剥夺而导致的细胞死亡且发现bdnf位于trpc3/6介导的细胞保护信号通路的上游(taietal.xxa;jiaetal.xx)本课题拟探讨bdnf介导trpc6通道蛋白保护视网膜跟模型诱导的rgcs免受损伤的作用机制对深入阐明青光眼的发病机制为临床干预治提供新的思路和药物干预靶点具有一定的现实意义本课题的研究主要分为以下二部分：第一部分视网膜ir模型中调控trpc通道时bdnf的表达变化一、研究目的在sd大鼠视网膜ir模型中检测bdnf基因不同再灌注时间点的表达变化同时检测抑制trpc通道时bdnf蛋白水平变化、探讨其表达类型对rgcs凋亡的影响二、研究方法1、在视网膜ir模型中检测bdnf基因的表达采用视神经血管钳夹法建立视网膜ir模型夹闭视网膜血供60分钟分别于再灌注后3小时、24小时、48小时、7天处死大鼠摘取眼球显微镜下剥离视网膜提取视网膜总rna利用反转录多聚酶链反应(rtpcr)及实时荧光定量pcr(realtimepcr)测定bdnf基因表达变化2、抑制trpc通道时检测bdnf蛋白的表达建立大鼠视网膜ir模型于视网膜缺血术前30分钟右眼通过玻璃体腔注射trpc拮抗剂skf96365为实验组左眼注射溶剂pbs为阴性对照组分别于再灌后3小时、6小时、12小时、24小时、48小时、72小时处死大鼠摘取眼球显微镜下剥离视网膜提取视网膜总蛋白蛋白质免疫印迹(westernblot)检测bdnf在视网膜组织中的蛋白表达水平 开题报告 物流开题报告毕业论文3、抑制trpc通道时检测bdnf基因的表达将sd大鼠分为4组分别进行如下处理：第一组对眼球进行假手术只行视神经分离术不行视网膜缺血手术;第二组建立视网膜ir模型;第三组于视网膜缺血术前30分钟通过玻璃体腔注射pbs溶液然后再建立视网膜ir模型;第四组于视网膜缺血术前30分钟通过玻璃体腔注射注射skf96365然后再建立视网膜ir模型所有大鼠于再灌注后24小时处死摘取眼球显微镜下剥离视网膜提取视网膜总rnarealtimepcr测定bdnf基因表达变化三、研究结果rtpcr及realtimepcr结果显示bdnfmrna在再灌注后3小时开始出现升高24小时出现表达高峰是对照组的1.4倍(p0.05n=6);westernblot结果显示应用skf96365抑制trpc通道后bdnf的前体蛋白(precursorforbdnfprobdnf)表达量升高并于再灌注后24小时达到高峰是对照组的1.4倍(p0.05n=6)而成熟型bdnf(maturebdnfmbdnf)在整个再灌注过程中未见明显变化缺血再灌注24小时ir+skf96365组bdnf的基因表达水平分别是假手术组、ir组、ir+pbs组的2.7、1.7、1.4倍与ir+pbs组有统计学差异(p0.05n=6)四、小结在ir模型中bdnf基因的时间表达谱早于trpc6(trpc6的mrna水平在再灌后是12小时开始升高)提示bdnf可能位于trpc6介导的细胞保护作用的上游当trpc通道受到抑制时bdnf的基因水平和probdnf蛋白水平都升高表明bdnf的转录和翻译水平都有提高但mbdnf没有变化提示trpc通道反馈性影响bdnf翻译后修饰的过程第二部分probdnfp75ntr信号通路在视网膜ir模型诱导的rgcs损伤中的作用一、研究目的探索p75ntr信号通路在视网膜ir诱导的rgcs损伤中的作用二、研究方法使用荧光金(fluorogoldfg)通过上丘注射对活体sd大鼠rgcs进行逆行标记在充分标记后(7天)建立视网膜ir损伤模型于视网膜缺血术前30分钟通过右眼玻璃体腔注射p75ntr信号通路拮抗剂tatpep5进行干预且同时左眼注射溶剂dmso为阴性对照分别于再灌后24小时、48小时、72小时、7天处死大鼠常规心脏灌流取视网膜平铺后荧光显微镜下行rgcs计数对结果进行统计分析三、研究结果统计分析结果显示在再灌注后48小时玻璃体腔注射p75ntr信号通路拮抗剂tatpep5组较之注射溶剂dmso对照组显著增加rgcs的数目(p0.05n=6)四、小结在ir模型中probdnfp75ntr信号通路可能参与抑制trpc通道诱导的促进rgcs死亡的过程结论本研究提示bdnf可能是trpc6通道蛋白保护视网膜ir模型诱导的rgcs免受损伤的上游通路当trpc通道受到抑制时能反馈性影响bdnf转录后翻译修饰的过程导致probdnf量的累积提高与p75ntr受体结合率从而诱导促进rgcs死亡这一发现有助于增进我们对青光眼发病机制的认识和研究并为临床上进行药物干预和治疗提供新的思路和途径关键词：青光眼;脑源性神经营养因子(bdnf);trpc6离子通道;视网膜缺血再灌注(ir)损伤;视网膜神经节细胞(rgcs);神经保护 上述段落为轻风论文网代写段落经允许公开文章均有研究生博士以上学历撰写各专业均有对应的写作老师 四、小结在ir模型中bdnf基因的时间表达谱早于trpc6(trpc6的mrna水平在再灌后是12小时开始升高)提示bdnf可能位于trpc6介导的细胞保护作用的上游当trpc通道受到抑制时bdnf的基因水平和probdnf蛋白水平都升高表明bdnf的转录和翻译水平都有提高但mbdnf没有变化提示trpc通道反馈性影响bdnf翻译后修饰的过程第二部分probdnfp75ntr信号通路在视网膜ir模型诱导的rgcs损伤中的作用： 一、研究目的探索p75ntr信号通路在视网膜ir诱导的rgcs损伤中的作用 二、研究方法使用荧光金(fluorogoldfg)通过上丘注射对活体sd大鼠rgcs进行逆行标记在充分标记后(7天)建立视网膜ir损伤模型于视网膜缺血术前30分钟通过右眼玻璃体腔注射p75ntr信号通路拮抗剂tatpep5进行干预且同时左眼注射溶剂dmso为阴性对照分别于再灌后24小时、48小时、72小时、7天处死大鼠常规心脏灌流取视网膜平铺后荧光显微镜下行rgcs计数对结果进行统计分析 三、研究结果统计分析结果显示在再灌注后48小时玻璃体腔注射p75ntr信号通路拮抗剂tatpep5组较之注射溶剂dmso对照组显著增加rgcs的数目(p0.05n=6) 四、小结在ir模型中probdnfp75ntr信号通路可能参