MMP9 在卵巢子宫内膜异位症及子宫腺肌症中的表达及其意义.doc

MMP9 在卵巢子宫内膜异位症及子宫腺肌症中的表达及其意义【摘要】目的探讨MMP9在卵巢子宫内膜异位症及子宫腺肌症中的表达及临床意义。方法应用免疫组化方法对研究组39例子宫腺肌症合并卵巢子宫内膜异位症患者的在位子宫内膜及异位子宫内膜及对照组27例正常子宫内膜进行MMP9检测。结果MMP9在卵巢子宫内膜异位症和腺肌症的异位内膜中表达差异无统计学意义(P0.05)；异位内膜与在位子宫内膜相比差异有统计学意义(P0.05)；异位内膜、在位内膜与正常内膜相比差异有统计学意义(P0.05)。结论MMP9表达增强可能与子宫内膜异位症及子宫腺肌症的发生、发展有关。 【关键词】 卵巢子宫内膜异位症子宫腺肌症基质金属蛋白酶子宫内膜异位症(endometriosis,EMS)与子宫腺肌症(adenomyosis，AM)的确切病因和发病机制不十分明确，近年研究发现，二者在免疫、遗传倾向方面有相似的异常改变。目前在位内膜决定论1的观点在EMS发病机理的研究中占主导地位。此观点认为，EMS患者与非EMS患者在位内膜之间存在差异，这种差异表现在70%90的妇女有经血倒流，而只有10%15%的妇女发生EMS。EMS具有类似恶性肿瘤的周围浸润及远处转移的特点，所以近年来从恶性肿瘤发生的角度探讨EMS的发病机理成为该疾病的研究热点。基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase，MMP)家族能促进恶性肿瘤细胞的异位黏附、降解细胞外基质、穿透基底膜而在恶性肿瘤的转移及浸润中发挥着重要的作用。MMP9是MMPs家族中相对分子质量最大的明胶酶。本文采用免疫组化的方法，研究MMP9在卵巢子宫内膜异位症(巧囊)及AM中的表达，探讨其相关性。1 材料与方法1.1 组织标本来源 实验组标本来自宁夏医学院附属医院2002年1月2006年4月间因巧囊合并AM切除子宫并行患侧卵巢切除或巧囊剥除患者39例，取巧囊和腺肌症异位内膜及在位内膜标本。年龄1948岁(该19岁患者系先天性无阴道患者)，平均39岁。对照组为同期在我院因不孕症(排除器质性疾患及EMS)行子宫内膜活检患者的子宫内膜27例。年龄2548岁，平均33岁。实验组与对照组患者年龄差异无统计学意义。所有患者术前均未经内分泌治疗及子宫内膜异位症药物治疗。1.2 实验材料 鼠抗人单克隆抗体MMP9免疫组化试剂盒及DAB试剂盒均购自福州迈新生物技术有限公司。1.3 实验方法 标本经常规福尔马林固定，石蜡包埋，连续组织切片成4μ厚。石蜡切片常规脱蜡至水化→PBS冲洗3min×3次→0.3% H2O2封闭内源性过氧化物酶10min→PBS冲洗3min×3次→滴加即用型鼠抗人MMP9单克隆抗体,室温下孵育2min→ PBS冲洗3min×3次→滴加即用型生物素标记的羊抗鼠IgG,室温下孵育20 min →PBS冲洗3min×3次→滴加即用型链霉素生物素蛋白30 min→ PBS冲洗3min×3次→切片滴加新配置的DAB显色液，显微镜下控制显色→苏木精复染核8min→梯度乙醇脱水→二甲苯透明→中性树胶封片。1.4 结果判定 采用双盲法，在高倍镜下观察，根据着色强度和面积进行综合评分：(1)着色强度:无着色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分；(2)着色面积：5为0分，525为1分，2650为2分，5175为3分，75为4分。以上两项结果相加，2分为(-)，23分为()，45分为()，67分为()。 阳性对照片由试剂公司提供。选用PBS代替一抗作阴性对照。每次实验重复3次。1.5 数据处理 采用SPSS 11.5统计软件进行χ2检验。以P0.05为差异有统计学意义。2 结果 MMP9蛋白的阳性表达部位主要位于腺上皮细胞的胞浆，少量表达于间质细胞浆，在高倍显微镜下呈棕黄色颗粒(见图1-4，封2)。2.1 MMP9在异位内膜中的表达 MMP9蛋白在巧囊和AM异位内膜的表达多为中度阳性至强阳性，二者相比差异无统计学意义。MMP9蛋白在在位子宫内膜的表达多为中度阳性表达，与异位内膜相比差异有统计学意义。见表1。表1 MMP9在异位内膜及在位内膜的表达（略）2.2 MMP9在正常内膜中的表达 MMP9在对照组正常子宫内膜多为阴性及弱阳性表达，与异位内膜及在位内膜相比差异有统计学意义(P0.05)。见表2。表2 MMP9在正常内膜中的表达（略）3 讨论3.1 MMP9与巧囊发病的关系 本实验结果显示，MMP9在异位症患者在位内膜的表达高于对照组内膜，提示异位症患者的在位内膜可能因MMP9的过度表达而表现出比正常内膜更强的蛋白水解能力，使自身一旦逆流入腹腔，能够穿透其周围的基底膜(basement membrane，BM)，降解局部的细胞外基质(ECM)，侵袭腹膜及周围的结缔组织，同时在MMP9促细胞间黏附和促血管形成的共同作用下，得以在异位种植生长并不断扩大。 本实验中，巧囊患者在位内膜MMP9表达强度高于对照组，但低于异位内膜，提示EMS患者在位内膜的蛋白水解能力强于对照组，但又较异位内膜差，而呈现出独特的分子生物学特征，与文献报道一致2。 EMS是具有生长功能的子宫内膜组织出现在子宫腔以外身体其他部位3。其发病细胞在病理上呈良性形态学表现，而临床上呈侵蚀性的恶性生物学行为。患者呈持续加重的盆腔黏连、疼痛、不孕，发病率及复发率逐年增加4，其确切病因和发病机制不十分明确。目前仍以子宫内膜细胞随经血逆流种植为主导理论。 异位子宫内膜具有对卵巢等盆腔器官和腹膜的黏连、侵袭和转移等类似恶性肿瘤的生物学行为。且有研究报道5,在建立的裸鼠EMS模型中将内膜碎片与MMP天然抑制剂共培养后，再种植于腹腔，其EMS发病率明显降低。以上提示MMP可能与EMS发病有关。MMPs是锌依赖性的蛋白酶家族，可以降解ECM和基底膜的所有成分。依其降解底物的不同可分为6型约19种。MMP9是MMPs家族中相对分子质量最大的明胶酶，能降解ECM中型、型胶原和明胶等主要成分，并能促进血管内皮细胞生长，导致新生血管的形成，同时可通过与整合素的相互活化而加强细胞间的黏附作用6，从而可能在子宫内膜细胞的异位黏附、种植、生长的过程发挥重要作用。异位内膜组织中MMP9的高表达可能使异位内膜具有很强的蛋白水解能力，能够穿透其周围的基底膜，降解局部的ECM,侵袭腹膜及周围的结缔组织,同时MMP9有促血管形成的作用，使异位内膜得以种植生长并不断扩大。3.2 MMP9与AM发病的关系 当子宫内膜腺体及间质侵入子宫肌层时，称为子宫腺肌症3。本实验结果显示，AM患者异位内膜中MMP9呈高表达，与在位内膜及正常内膜相比，差异有统计学意义，且AM患者在位内膜与正常内膜相比差异亦有统计学意义。提示MMP9高表达与AM的发生关系密切。3.3 MMP9表达与巧囊及AM发病的相关性分析 传统观点认为3，巧囊与AM发病机理不同。但本实验结果表明，MMP9在巧囊及AM中均呈中度阳性及强阳性表达，且二者相比差异无统计学意义。笔者认为，这一结果不但支持在位内膜决定论是EMS发病机理这一观点，同时也提示这一观点适用于AM，也为一元论解释这两种疾病提供了新思路。【参考文献】 1郎景和.子宫内膜异位症的研究与设想J.中华妇产科杂志，2003，38：478-480.2陈琼华，曲军英，许雅云,等.基质金属蛋白酶9及其抑制剂在异位和在位内膜组织中的表达J.中华妇产科杂志，2004,39(12):809-812.3乐杰.妇产科学M.第6版.北京:人民卫生出版社，2003.12.4潘凌亚.子宫内膜异位症流行病学/朗景和.子宫内膜异位症的基础与临床研究M.北京：中国协和医科大学出版社，2003.35-49.5钟刚.复发性子宫内膜异位症/曹泽毅.中华妇产科学M.北京：人民卫生出版社，2004.1515-1518.6Hofman UB，Westphal JR，Van Kraats AA，et al.Expression of integrin alpha(v)bate(3)correlates with activation of membrane-type matrix metalloprotein