不同产地黄芪中山柰素的含量分析及HPLC测定.doc

不同产地黄芪中山柰素的含量分析及HPLC测定【摘要】目的：建立测定黄芪中黄酮类成分山柰素的HPLC方法，并对不同产地黄芪中山柰素的含量进行分析。方法：YWG-C18色谱柱（4.6mm250mm，10m），甲醇与0.4%磷酸水溶液（70：30）溶剂洗脱，检测波长375nm，柱温30，流速1.0ml.min-1，进样量20l。结果：山柰素的回归方程：Y=1730.75838X1.3279795，r=0.9998。平均回收率99.6 %（n=5）。结论：不同产地黄芪中山柰素含量相差很大，本方法专属性强，重现性好，可对黄芪药材的质量控制提供依据。 【关键词】 黄芪；山柰素；HPLC HPLC Method to Measure the Kaempferol in Radix Astragali and the Analyzed of Content in Different Plazes BAI Xue-mei，TIAN Jia-ming， WANG De-bao，et al Hebei North University，Zhangjiakou，075000，China 【ABSTRACT】 Objective: To develop a HPLC method to measure the Kaempferol of flavonoids composition in Radix astragali and analyze the Kaemp ferol quantity contained in Radix astragali grown in different plazes.Methods: YWG-C18 column (4.6mm×250mm，10μm),use the solution of MeOH and 0.4% H3PO4 solvent(70：30) to separate,the measuring wavelength is 375nm,the temprature of column is 30, and the flowing speed is 1.0ml.min-1, injected is 2μl. Results: The regression equation of Kaempferol: Y=1730.75838X1.3279795，r=0.999 8.The average retrieving rates are 99.6%.Conclusion: There are different plazes of their Kaempferol quantity contained. This method is good at its specialization and good restoration. It can provide scientific reference to centrolling the quality of Radix astragali. 【KEY WORDS】 radix； astragali kaempferol； HPLC 黄芪（Radix Astragali）是多年生草本豆科植物蒙古黄芪Astragalus membranaceus(Fisch)Bge.var mongholicus(Bge.)Hsicao或膜荚黄芪Astragalus membranaceus(Fisch)Bge.的干燥根。黄芪中含皂甙类、黄酮类、多糖类等多种有效成分，黄芪总黄酮有抗心肌缺血作用1。 目前，文献报道对黄芪皂甙类成分的含量测定方法较多，如薄层法，HPLC法等，黄酮类的HPLC法只限于芒柄花黄素，毛蕊异黄酮2，对其他黄酮类成分如山柰素的含量测定未见报道。山柰素是黄芪中黄酮类有效成分中重要组分之一，本文建立了测定黄芪药材中山柰素含量的HPLC法，并对不同产地黄芪中山柰素的含量进行分析。 1 仪器和试剂 1.1 仪器 Agilent 1100高效液相色谱仪，包括四元泵，在线脱气机，柱温箱，VWD检测器，化学工作站（chimstation system）；索式提取器；紫外可见光分光光度计。 1.2 试剂 甲醇 （色谱级），山柰素标准品（中国药品生物制品检定所）。 2 方法与结果 2.1 色谱条件 色谱柱：YWG-C18 （4.6mm×250mm，10μm），流动相：甲醇与0.4%磷酸水溶液（70：30）, 检测波长：375nm, 流速：1.0ml.min-1,进样量：20μl。 2.2 供试液与标准液制备 2.2.1 供试液制备 精密称取张家口、内蒙、甘肃三产地已粉碎的黄芪细粉1.0g，分别置索式提取器中加入100 ml甲醇提取完全，提取液减压浓缩至干，以30ml甲醇溶解，加5ml25%盐酸水浴回流1h，水解液以甲醇定容至50ml，制得供试液。进样前过0.45μm滤膜。 2.2.2 山奈素标准液制备 精密称取山柰素标准品1mg置25ml容量瓶中，用甲醇溶解，定容至刻度即得。 2.3 方法学考察 2.3.1 标准曲线 将山奈素标准液用甲醇作5个不同浓度的稀释并分别进样20μl，按上述色谱条件测定峰面积，结果以浓度为横坐标（X），以峰面积为纵坐标（Y），进行线性回归分析，得回归方程Y=1730.75838X1.3279795，r=0.9998。标准液色谱图见图1。 2.3.2 精密度实验 精密吸取山奈素标准品溶液20μl，连续进样6次，测得峰面积，山柰素的RSD=1.3%。 2.3.3 重复性实验 取内蒙黄芪6份，按2.2.1项制备供试液，按上述色谱条件测定含量，结果内蒙黄芪中山柰素的平均含量为0.53%（n=6），RSD=2.2%。 2.3.4 加样回收率实验 取已测知含量的内蒙黄芪提取液分别加入10μl，20μl，30μl，40μl，50μl山奈素标准液，测得山柰素平均回收率为99.6%（n=5）。 2.3.5 样品测定 依照本文方法，对张家口、内蒙、甘肃三产地黄芪进行含量测定，每产地平行测定3次，结果见表1，样品色谱图见图2（只给出内蒙）。表1 不同产地黄芪中山奈素的含量 3 讨论 3.1 山柰素在黄芪中含量较低，为保证山柰素提取完全，比较了乙醇、甲醇两种溶剂采用超声和索式提取两种方法的提取率。结果表明，采用甲醇索式提取法山柰素的提取率最高。 3.2 通过紫外可见光分光光度计对黄芪提取液进行全波长扫描，发现其在274nm和375nm处均有吸收峰，实验表明在274nm的波长下干扰峰较多，分离度较差，而375nm波长下干扰峰最少，可得到分离度好，出峰时间适宜的组分色谱峰，这与文献报道相一致，故确定检测波长为375nm。 3.3 黄芪中黄酮类成分的药理作用为对失血性休克有保护作用，并能抗心肌缺血。本文只对其中一种黄酮类成分进行了分析，张家口产黄芪中山柰素含量明显低于内蒙、甘肃产黄芪，但要确定三产地黄芪的品质，还应从总黄酮含量及