非小细胞肺癌EGFR基因突变检测.ppt

非小细胞肺癌EGFR基因突变检测 主要内容 EGFR检测的背景及意义EGFR检测的标本类型EGFR检测的临床开展及成功关键 肺癌精准医学是精确诊断与靶向治疗的结合 精确诊断靶向治疗 LiTH etal JClinOncol2013 31 1039 1049 VariS etal ExpertOpinDrugDiscov2013 8 11 1381 1397 多部权威指南强调治疗前的EGFR突变检测 ASCO2015指南 考虑用EGFRTKI进行一线治疗的非小细胞肺癌患者应该进行肿瘤EGFR突变检测来确定适合一线使用EGFRTKI还是一线使用化疗药物治疗 EGFR基因突变和EGFR靶向治疗 中国肺腺癌驱动基因突变图谱 NSCLC中药物疗效相关的EGFR突变 八项随机研究奠定了TKI在EGFR基因突变阳性患者中一线治疗的地位 NCCNGuidelinesVersion3 2016Non SmallCellLungCancerMoketal 2008 Kimetal 2008 Hirschetal 2006 EGFR检测样本来源 组织活检 肿瘤蜡片 目前检测金标准 细胞学标本 恶性胸水 样本品质和肿瘤细胞含量可能比组织样本较低 血液标本 ctDNA 当无法获取组织或细胞学样本的晚期转移患者 作为有效补充 DNA片段化 假阴性较多 需要高敏感度技术 侵入性 每个病人都适用 动态检测 对于组织和胸水都取不到的患者 血液样本是一个很好的补充 PirkerRetal JThoracOncol2010 5 1706 1713 SavicSetal BrJCancer2008 98 154 160 RekhtmanNetal JThoracOncol2011 6 451 458 TanakaTetal CancerSci2007 98 246 252 质量控制 组织 细胞学检测是目前的金标准 FromAZ2015internaldata 组织检测基本流程 组织及细胞学标本的处理 需要临床科室的协助与配合 组织学标本固定要及时 离体后即时处理 15 30分钟内 固定液 10 中性缓冲福尔马林 终浓度4 固定液的量一般为组织体积的10 15倍 固定时间 活检标本直接放入固定液 支气管镜活检标本的固定时间为6 24h 手术切除标本的固定时间为12h 48h 细胞学标本采用95 乙醇固定液 时间不宜少于15min 或采用非妇科液基细胞学固定液 固定时间和方法可按说明书进行操作所有细胞学标本应尽量制作福尔马林固定石蜡包埋 formalin fixedandparrffin enbedded FFPE 细胞学蜡块 将细胞学标本离心沉淀置于包埋盒中 后续操作同组织学标本制作蜡块流程 中国原发性肺癌诊疗规范2016版 病理评估和质控对于基因检测至关重要 蜡块未染色切片H E染色切片 标记肿瘤细胞比例高的区域刮取标记以内的区域 为什么EGFR检测要在病理科开展 肿瘤细胞含量评估对于EGFR结果判读影响 病理肿瘤细胞含量评估对于EGFR突变结果影响较大 检测流程如果没有该步骤 会造成较多的假阴性 血液检测的价值与优势 已可以指导EGFR敏感性突变治疗用药 1 Molina VilaMetal JThoracOncol2008 3 1224 1235 2 SmouseJetal CancerCytopathol2009 117 67 72 3 VanEjikRetal PLoSOne2011 6 e177791 4 RekhtmanNetal JThoracOncol2011 6 451 458 吉非替尼获得血液ctDNA伴随诊断适应症 欧盟和中国相继批准阿斯利康易瑞沙血液ctDNA伴随诊断非小细胞肺癌患者用药前检测EGFR突变 循环血肿瘤细胞 circulatingtumourcell CTC 即释放到外周血中的肿瘤细胞 目前CTC的捕获比较困难循环肿瘤DNA circulatingtumorDNA ctDNA 即循环肿瘤DNA 指由肿瘤细胞释放到血液循环系统中的DNA 血液标本的检测对象 总量少 500DNA拷贝数 200uL血浆 ctDNA丰度低 血浆ctDNA的特点 片段小 集中在170bp左右 检测方法需要能够耐受 In housedata Newmanetal NatMed 2014 Taniguchietal ClinCancerRes 2011 信息丢失 能代表全基因组信息 TranslationalOncology 2013NatureVolume 2013 IPASS日本亚组血液 组织对比EGFR突变状态研究 灵敏性 43 特异性 100 一致性 66 86对血清和组织样本参与比较 GotoK etal JThoracOncol2012 7 1 115 121 亚太和俄罗斯晚期NSCLC组织 细胞学和配对的血浆样本 IGNITE ChunleiShi etal 2015ESMOAsia abstract422PD IFUM吉非替尼治疗EGFR突变的高加索NSCLC 652对血液和组织样本参与比较 JThoracOncol 2014Sep 9 9 1345 53 一致性 94 3 敏感性 65 7 特异性 99 8 MedianPFS ctDNA作为EGFR检测的有效补充 IFUM研究 血液检测阳性可以指导TKI用药 IFUM 易瑞沙后续评估 研究中 血液与配对组织不同EGFR突变状态患者ORR的一致 19外显子缺失患者PFS也一致 10 3月vs9 6月 ctDNA检测EGFR突变阳性可用于指导EGFR TKI治疗 Douillard J Y etal 2014 JournalofThoracicOncology9 9 1345 RocheARMS 敏感性 75 特异性 96 ADxARMS 敏感性67 5 特异性100 Liuetal2013 JclinpATHMoketal 2015 CCR QiagenARMS敏感性65 7 特异性 99 1 2 3 ARMS法特异性较好 灵敏度有限 但ADxARMS是目前唯一获得CFDA批准的血液检测方法 一代ARMS EGFR敏感突变 组织vs血液 血液检测的获益人群 Bettegowdaet al SciTranslMed 2014 非小细胞肺癌血液EGFR基因突变检测中国专家共识 2015年12月 中国国家食品药品监督管理总局 CFDA 在2015年2月已批准吉非替尼说明书更新 在推荐所有NSCLC患者的肿瘤组织都应进行EGFR基因突变检测基础上 如果肿瘤标本不可评估 则可使用从血液 血浆 标本中获得的ctDNA进行评估 EGFR基因突变检测流程 血液检测实验流程 肿瘤标本不可评估 2h内 采用EDTA抗凝管 采集10mL全血2小时内将全血充分低温离心两次 分离出不含细胞成分的血浆 放置于 70 冻存 慎重对待ARMS法的血液检测结果 EMQNExternalQualityAssessmentSchemeforLungCancer 2014 非小细胞肺癌EGFR检测 各标本处理方式 总结 重要讯息回顾 EGFR突变 样本 检测方法 在中国NSCLC患者中 约50 存在EGFR突变准确的驱动基因检测是实现