Galectin-3、MMP-2蛋白在子宫内膜样腺癌中的表达及临床意义.doc

Galectin-3、MMP-2蛋白在子宫内膜样腺癌中的表达及临床意义作者：吕敬媛，庄国丽，卢北燕单位：佳木斯大学第一附属医院妇产科，黑龙江 佳木斯 154003【关键词】 子宫内膜腺癌； Galectin-3； MMP-2； 免疫组化Galectin-3对β-半乳糖苷具有高度亲和性，可选择性识别糖结构并与之非共价结合，具有识别、调节细胞增殖、调节细胞粘附、调节细胞凋亡等功能。目前研究表明它在多种肿瘤中表达异常1，包括甲状腺癌、胃癌、大肠癌、乳腺癌等，与肿瘤的发生、演进密切相关，且与肿瘤的转移相关，但鲜见子宫内膜样腺癌方面的相关报道。本研究应用免疫组织化学方法，探讨子宫内膜腺癌组织中此蛋白的表达情况与临床病理参数及MMP-2蛋白在子宫内膜样腺癌中表达的关系。 1 材料和方法 1.1 实验材料 收集佳木斯大学第一附属医院20062008年间子宫内膜样腺癌所有存档蜡块，应用随即数字法随机抽取60例，所有患者术前均未作过任何化疗、放疗或性激素类药物等治疗，其中所有标本的临床和病理资料均完整。患者平均年龄52岁；35例已绝经，25例未绝经；按照1971年国际妇产科联盟（FIGO）手术病理分期标准：期34例，期26例；组织学分级：高分化（G1）17例，中分化（G2）20例，低分化（G3）23例；侵及子宫壁浅肌层（1/2肌层）者31例，侵及深肌层（≥1/2肌层）者29发生淋巴结转移者7例，无淋巴结转移者53例。另取正常子宫内膜组织18例、非典型增生性子宫内膜组织23例作为对照。 1.2 主要试剂 鼠抗人Galectin-3浓缩型单克隆抗体，购自上海长岛生物技术有限公司；鼠抗人MMP-2即用型单克隆抗体购自福州迈新生物技术有限公司。 1.3 实验方法 Galectin-3采用免疫组织化学二步法，以乳腺癌作为阳性对照，PBS代替一抗作阴性空白对照。石蜡包埋组织作4μm厚的切片，石蜡切片经二甲苯脱蜡，酒精梯度水化后在10mM，pH6.0的柠檬酸缓冲液中煮1020min，室温下冷却20min；3%过氧化氢处理切片5min（在水中）后水洗；PBS洗三次，每次2min；加1：10 Galectin-3一抗一滴，室温放置60min；再用PBS洗三次，每次2min；DAB显色510min后苏木素复染，脱水，封片。MMP-2采用常规S-P法，按照试剂盒说明书进行操作。 1.4 结果评定 参考师建国2的评估标准：每例切片选取细胞密集的区域，连续观察高倍视野，对肿瘤细胞进行细胞计数，每个视野计数50个细胞，共1000个细胞，通过计算着色细胞所占比例及评定着色强度而分级。无着色细胞、背景同阴性对照或者阳性细胞比例不超过5者为阴性()；阳性细胞呈淡棕黄色和/或阳性细胞率<50者为弱阳性()；阳性细胞呈深棕黄色和/或阳性细胞率≥50者为强阳性()；阳性细胞的判断标准：免疫组化的阳性表达均为各自染色条件下结构完整、定位明确、染色对比清晰的棕黄色细胞。为便于统计，将()和()统归为阳性。Galectin-3和MMP-2均以胞质内出现棕黄色或棕褐色颗粒为阳性染色细胞。 1.5 统计学处理 采用SPSS 13.0统计软件中的χ2检验、Fisher′s确切概率法进行统计学处理，相关性分析采用Spearman等级相关分析，统计学意义水平界定为P0.05。 2 结果 2.1 Galectin-3与MMP-2蛋白的表达情况 Galectin-3主要在癌细胞的胞浆表达,部分癌细出现核表达。Galectin-3蛋白在三组组织之间比较有显著统计学差异（χ2=30.1019，P0.01），Galectin-3在子宫内膜样腺癌中的表达明显高于正常子宫内膜组和不典型增生组（P0.05）， MMP-2蛋白的表达主要定位于子宫内膜腺上皮细胞的胞浆，呈棕黄色颗粒，弥漫性或局灶性分布。MMP-2蛋白的表达阳性率从正常子宫内膜、非典型增生性子宫内膜到子宫内膜样腺癌组织逐渐升，有统计学意义（χ2=26.2994，P0.01），在正常子宫内膜中表达最低而在子宫内膜样腺癌中表达最高。见表1。表1 Galectin-3与MMP-2在不同子宫内膜组织中的表达（略）2.2 子宫内膜样腺癌中Galectin-3与MMP-2的表达与临床病理学参数的关系 Galectin-3蛋白、MMP-2蛋白的表达与患者年龄、绝经与否及有无淋巴结转移之间无关（P0.05），与患者的临床分期、病理分级、肌层浸润深度有关（P0.05）。见表2。2.3 Galectin-3与 MMP-2蛋白在子宫内膜样腺癌中表达的相关性 Galectin-3与 MMP-2蛋白在子宫内膜样腺癌组织中的表达呈正相关（rs0.5699，P<0.01）。 表3 Galectin-3与 MMP-2之间的关系（略）表2 Galectin-3与MMP-2蛋白的表达与子宫内膜样腺癌临床病理特征的关系（略）3 讨论 在人类基因组中Galectin-3由单个基因编码，位于染色体14q21-22，总长约17kb，分子量约31kDa3。它包括三个独特的结构区：一个含100150个氨基酸的长2末端，2末端是磷酸化的主要部位（如6或12位丝氨酸）；一个富有甘氨酸、酪氨酸、脯氨酸、谷氨酰胺等九种氨基酸重复、连续的结构区，作为基质金属蛋白酶的底物，此结构对于Galectin-3与糖复合物的细胞表面结合能发挥多种功能所必需；COOH-末端区一个环绕着碳水化合物结合位点的球形结构。Galectin-3在良性组织内常低表达或不表达，而在恶性肿瘤细胞内常呈过表达状态，主要定位于细胞质和细胞核；其可以与细胞内糖蛋白、细胞表面分子和细胞外基质蛋白相互作用，在许多生理或病理过程中起重要作用。在人类肿瘤中，已经证实Galectin-3的表达水平与结肠癌、胃癌、甲状腺癌、乳腺癌以及宫颈癌有着密切的关系，但是Galectin-3与子宫内膜腺癌的相关报道很少。本研究应用免疫组化的方法，检测Galectin-3蛋白在正常子宫内膜、不典型增生子宫内膜及子宫内膜样腺癌中的表达，来探讨其与子宫内膜癌发生发展的关系。结果显示Galectin-3蛋白在三组组织中的表达逐渐增高，差异有统计学意义，与Brustmann H等5研究结论相似。在子宫内膜腺癌的不同临床病理参数中进行比较，发现60例子宫内膜样腺癌中Galectin-3蛋白的表达与年龄、是否绝经和淋巴结转移无关；低分化组与高分化组表达有明显差异；+组和+组两者比较有统计学差异，早期子宫内膜腺癌中Galectin-3的表达明显低于子宫内膜腺癌晚期，可见Galectin-3的高表达提示肿瘤的不良预后；不同肌层浸润深度中Galectin-3蛋白的阳性表达率有显著统计学差异，与很多研究报道相一致，说明Galectin-3在肿瘤浸润过程中充当一定的角色。由于淋巴结转移的病例较少，本试验中Galectin-3阳性表达与有无淋巴结转移无关，与很多研究报道不一致，因此对于在子宫内膜样腺癌中Galectin -3与淋巴结转移的相关性有待进一步研究。Galectin-3为MMP-2的底物，MMP-2将Galectin-3分解后产生一个分子质量为22 kU的糖识别域和一个分子质量为9 kU的氨基酸残基组成Galectin-3末端片段6。已经明确MMP-2的表达增高与肿瘤的演进相关，这样裂解的Galectin-3可能在肿瘤转移、侵袭这一步具有一定的作用。因此本实验共同检测了Galectin-3 与MMP-2蛋白在子宫内膜腺癌患者中的表达，呈正相关，可认为Galectin-3 与MMP-2在肿瘤的发生、浸润和转移过程中相互促进、相互协助的、共同作用。Galectin-3是涉及细胞生长、黏附、分化、血管形成及细胞凋亡等功能，在肿瘤侵袭、转移方面具有高表达的特性。基于这些特性Galectin-3有可能作为一种可靠的肿瘤转移的诊断标记物。很多研究也表明了MMP-2与多种肿瘤的浸润、转移有关系，而Galectin-3为MMP-2的底物，故共同研究Galectin-3 与MMP-2在恶性肿瘤中表达，可以为我们提供一定的证据和预测预后。 【参考文献】 1Iurisci I,Tinari N,Natoli C,et al.Concentrations of Galectin-3 in the sera of normal controls and cancer patientsJ.Clin Cancer Res,2000,6(4):13892师建国，林雨冬，闫庆国，等.利用组织芯片探讨凋亡相关基因在乳腺癌发生中的意义J中国临床康复，2004，8(11)：207420753曹鸿艳Galectin-3在乳腺癌中的研究进展J实用肿瘤学杂志，2008，22（1）：12144Yu LG, Andrews N, Zhao Q,et al.Galectin-3 interaction with Thomsen-Friedenreich disaccharide on cancer-associated MUC1 causes increased cancer cell endothelial adhesionJ.Biol Chem, 2007, 282 ( 1 ):7737815Brustmann H,Riss D,Naude S.Galectin-3 expression in normal,hyperplastic,and neoplastic endometrial tissues J.Pathol ReS Pract,2003,199(3):1511586Yu LG,Andrews N,Zhao Q,et al.Galect