微柱凝胶法在检测孕妇IgG抗体中的应用研究.doc

微柱凝胶法在检测孕妇IgG抗体中的应用研究作者：李光梅单位：广东省吴川市妇幼保健院检验科， 广东 吴川 524500【摘要】 目的：探讨微柱凝胶法检测对孕妇产前IgG抗体效价的应用价值。方法：对我院120例门诊和住院O型待产孕妇采取微柱凝胶法检测血型抗体IgG。结果：当抗体效价≥64时，才使新生儿发生HDN；当抗体效价达到1024时，发病率达到100%。结论：微柱凝胶法检测灵敏度高，对检验孕妇产前IgG抗体效价具有较高的临床应用价值，可在基层进行推广和应用。 【关键词】 孕 妇； IgG抗体； 微柱凝胶法； 检 测The Application of Micro-gel Method in the Detection of Pregnant Women IgG AntibodiesLI Guang-mei(The Woman and Children Health Care Hospital of Wuchuan, Guangdong Wuchuan 524500, China)Abstract:Objective： Discuss Micro-gel method in the detection of pregnant women IgG antibodies application value. Method： Use Micro-gel method to detect 120 cases O type expectant pregnant women’s IgG antibodies. Result： When the antibody titer ≥ 64, it occurred to neonatal HDN; When the antibody titer to 1024, the incidence rate reached 100%. Conclusion： Micro-gel method has high detection sensitivity and high clinical value of test pregnant women on prenatal IgG antibody titer. Which can be used widely at the grass-roots level. Key words： Pregnant women; IgG antibody; Micro-gel method; Detection新生儿自限性同种免疫性溶血即新生儿溶血病(HDN)是由母体内存在的与其胎儿红细胞不合的IgG血型抗体而引起的同种被动免疫疾病1，最常见的是ABO血型系统，其次为Rh血型系统。所以产前检查孕妇血型抗体IgG，对预防和为HDN提供早期辅助诊断和产前治疗有积极作用。临床上常用的是抗人球蛋白法（经典试管法），该法存在操作烦琐、时间长、大批量标本检测困难、灵敏性欠佳和结果准确性较差等特点。微柱凝胶技术是一种新的血型血清技术2，我们于2004年12月至2007年1月采用微柱凝胶法检测120例孕妇IgG抗体，现将结果报道如下。1 资料与方法1.1 一般资料：本组120例均来自我院门诊和住院O型待产孕妇，其中夫妻血型A-O组合59例，B-O组合61例；年龄2037岁，平均27.3岁；孕期1638周；上述所有对象均无输血史，不规则抗体均为阴性。1.2 仪器与方法1.2.1 仪器：瑞士达亚美微柱凝胶检测系统(包括定速离心机、判读仪、恒温孵育器、Coombs卡等)，37水浴箱等。1.2.2 试剂：0.2 mol/L 2-巯基乙醇(2-me)、5%标准A、B型红细胞悬液、抗人球蛋白试剂、β-汗琉基乙醇。1.2.3 方法：取孕妇3ml外周静脉血EDTA抗凝，分离血清后取受检者血清0.2ml，与2-me 0.2ml混合于试管中，加盖，于37孵育1.5h，以破坏血清中的IgM。取十只小试管（10mm×60mm），依次编号。然后倍比稀释，在第一只管中加入PBS缓冲液，加孵育后振荡摇匀取出600μL加入第二只管，依次类推至第十只管，使其浓度依次为1：2，1：4，1：8，1：16，1：32，1：64，1：128，1：256，1：512，1：1024。在每个试管中加入1%A（B）型红细胞悬液0.05ml，37 条件下孵育15min后离心10min，最后用读卡仪判读结果。结果以自动判读"1+"的最高稀释度为抗体效价。1.3 统计学方法：资料用均数±标准差，用X2检验，计量资料用t检验，P0.05为差异有显著性。2 结果 结果见表1、表2。表1 孕妇IgG抗A (B)效价分布（略）表2 孕妇IgG抗A (B)效价与新生儿ABO HDN的发病率（略）3 讨论ABO系统引起的HDN是由于母亲体内存在着与胎儿不相配合的IgG性质血型抗体引起的同种被动免疫性疾病。该抗体能通过胎盘进入胎儿体内后，导致胎儿红细胞破坏产生溶血。同时可能干扰器官发生而导致胚胎停止发育、流产或畸形，对新生儿最大危害是引起胆红素脑病(核黄疸)，可造成婴儿早期死亡或使存活者留下不可逆的神经系统后遗症3。所以对有免疫史的孕妇应加强免疫抗体效价的动态监测。本文结果显示新生儿ABO HDN发病率随着抗体效价的升高而呈上升趋势，当抗体效价≥64时，才使新生儿发生HDN；当抗体效价达到1024时，发病率达到100%。因此，选择一种灵敏、准确、相对稳定且重复性好的IgG抗体效价测定方法很有必要。微柱凝胶法在国外已成为常规的红细胞血型血清学检测方法4，其原理是孕妇IgG类抗体致敏的红细胞和微柱内的抗人球蛋白结合而发生凝聚，不能通过凝胶微粒间隙，离心后红细胞不与抗人球蛋白结合而从凝胶颗粒间通过，最后被离心沉到柱底5。微柱凝胶法较其它方法有明显的优势，检测大批量标本既快速又准确，我们总结其具有以下特点：整个过程由电脑控制，试剂和样本是定量的，温育温度、温育时间较恒定，特别是结果由电脑进行，操作过程标准化可减少人为主管误差；标本用量少，约是其他方法用量的1/31/2，标记方便，结果可拍照存档；试剂中加入了促凝剂和大分子蛋白质，省去了试管Coombs 试验的细胞洗涤，温育用的红细胞不需三洗，且温育时间只需15min，大大简化了操作步骤和缩短了温育时间；重复性好、误差小。但是它也存在着缺陷，我们总结如高白细胞、冷凝集、药物、异常蛋白等均有可能干扰结果(造成假阳性)；温育、离心时间较长；成本较高。 综上所述，新生儿发生了较严重的ABO系统HDN，只要产前积极预防治疗，完全可以降低其发病率。微柱凝胶法检测灵敏度高，且方法自动化，实验操作简便，避免了不同操作者带来的误差，结果可在一定时间内长期保存等优点，既保持了传统的试管法的优点，又克服了其实验程序和对照复杂的缺点。对检验孕妇产前IgG抗体效价具有较高的临床应用价值，可在基层进行推广和应用。【参考文献】 1 张钦辉,主编. 临床输血学M.上海科学技术出版社, 200097-100.2 徐长根,贺春金,张远鹏,等.微柱凝胶技术检测血小板抗体J.临床检验学杂志,2002,20(5):272.3 徐丹,李江,蒋莉.微柱凝胶法检测孕妇IgG抗体效价的意义J.中国实验诊断学，2006，10（6）：681-682.4 李勇,杨贵贞.人类