细胞生物学实验心得.ppt

细胞生物学实验心得 一 关于动植物细胞染色体标本的制备 一 取材 有丝分裂 植物根尖 茎尖 动物骨髓细胞 羽髓细胞 培养的血细胞等减数分裂 植物花粉 动物精巢等 二 材料固定 目的 1 迅速杀死细胞 防治细胞自溶 腐败 2 使细胞中的蛋白质 脂肪 糖 酶等成分转变为不溶性物质 以保持生前的形态 3 利于染色 常用固定液 卡诺氏固定液 用于固定染色体标本的配方为Carnoy 甲醇 冰醋酸 1 1 使用方法 15 20倍于固定材料的固定液固定数小时至过夜 三 材料保存 固定好的组织可长期保存于70 酒精中 四 染色 组织压片染色体制备常用染液 醋酸洋红染液 改良苯酚 石碳酸 品红染液 龙胆紫染液细胞悬液滴片常用染液 吉姆萨 Giemsa 染液组织整染技巧 切碎染 染液配制注意 1 注意配方 龙胆紫用2 的醋酸配制和用水配制使用效果不同 前者较好2 注意染液成熟 醋酸洋红染液 改良苯酚 石碳酸 品红染液 吉姆萨 Giemsa 染液配好后均需成熟一段时间 当时染色效果不好 染液使用注意 龙胆紫染染色体时染色时间要短 不超过1分钟 并且最好加水分色吉姆萨染液只能用于干燥的滴片标本 染色时加液要多或扣染 染色结束冲洗时要带染液一起冲洗 五 压片技巧 三步曲 切 敲 压 二 关于细胞膜选择通透性的实验 常做实验 植物细胞质壁分离实验 死活细胞染色鉴定实验常用材料 紫皮洋葱 水绵其它可用材料 带叶肉细胞的叶下表皮 0 03 中性红水溶液中泡过的洋葱内表皮常用试剂 30 蔗糖 0 4 台盼蓝染液 水绵 一种藻类 涉及问题 1 选择性透性是活细胞的特性2 造成质壁分离的机制 3 质壁分离实验可用葡萄糖或氯化钠做吗 4 与质壁分离程度有关的主要因素 不透膜的溶质分子数 三 关于细胞计数 一 细胞计数板的结构第一种 5大方格 中间大方格组成为16 25 16个中方格 每个中方格内25个小方格 400第二种 5大方格 中间大方格组成为25 16 25个中方格 每个中方格内16个小方格 400 二 计数板上标识数目含义 1 400mm2 中间大方格共有400个小方格 每小格面积为1 400mm20 1mm 计数板底部到盖玻片的高度 三 计数板使用方法 清洁 盖片 加样 计数清洁 先用水 再用药棉蘸取75 酒精加样 液滴接触盖玻片的边缘 使悬液通过毛细作用渗入计数室计数范围压线细胞计数原则 四 细胞悬液密度计算 计两大格的计算方式 细胞密度 个 ml 2大格细胞总数 2 104 稀释倍数16格 25格的血球计数板计算公式 细胞数 ml 4中格内细胞个数和 4 16 104 稀释倍数25格x16格的血球计数板计算公式 细胞数 ml 5中格内细胞个数和 5 25 104 稀释倍数 四 关于细胞涂片制备 材料 单细胞悬液涂片易出现问题 太厚或太薄不便观察 动物细胞带水太多缓慢干燥引起失水解决方法 用样减少 用固定液 用抗凝剂后离心 血涂片染色用的瑞氏 Wright 染液染色方法 先用蜡笔对选定的区域划线 用作堤防 阻止染液扩散 然后滴加适量染液覆盖选定区域 染1分钟 液面应浮现一层金黄色金属物质 表示染液起了染色作用 再滴加等量蒸馏水或pH6 4的磷酸盐缓冲液稀释染液 轻摇混匀 染色5min 不要倒掉染液 流水或滴加蒸馏水直接洗去浮液 五 关于淀粉染色 染液 碘 碘化钾染液 配法 取碘化钾3克 溶于100毫升蒸馏水 加热使之溶解 然后加入1克