中性粒细胞碱性磷酸酶在血液病诊断中的应用.doc

中性粒细胞碱性磷酸酶在血液病诊断中的应用廖亚仙 浙江衢化医院检验科 324004摘要:目的探讨中性粒细胞碱性磷酸酶(NAP) 染色在血液系统疾病患者诊断与鉴别诊断中的应用意义。方法抽取219例临床确诊的血液病患者和60 名正常健康人(男38例,女22例) 静脉血,制备血涂片。所有血涂片依改良Gomori 氏法进行ALP 细胞免疫组织化学染色,显微镜油镜观察100个中性粒细胞,以阳性率和积分记录结果。结果急性淋巴细胞白血病(ALL) 、再生障碍性贫血(AA) 、多发性骨髓瘤(MM) 、骨髓增殖性疾病MPD患者的NAP 阳性率和积分则明显高于正常对照组(P 0.05) ,急性髓细胞白血病(AML) 、慢性粒细胞白血病(CML)患者的NAP 阳性率和积分均明显低于正常对照组(P 0.05)。结论根据NAP 活性的特性在很多血液疾病中都可以把其作为诊断及鉴别诊断的判断指标。关键词:碱性磷酸酶;中性粒细胞碱性磷酸酶染色;血液病;诊断中性粒细胞碱性磷酸酶( neutrophilic alkalinephosphatase,N A P) 是中性粒细胞的标志酶, 因检测方法简便、快速, 在血液系统疾病诊断尤其在类白血病反应与恶性血液病鉴别中有重要的临床应用价值。为研究N A P 活性对各血液病的诊断、鉴别诊断及疗效观察中的价值, 我们总结了219例血液系统疾病患者NAP 活性观察,进行对比分析,以探讨其在血液系统疾病诊断和鉴别诊断中的应用意义。1 对象和方法1.1临床资料本组219例血液病均来源于我院血液科20022008年经骨髓涂片细胞学分析、病理检查及有关实验室检查并结合临床参照文献1确诊病例, 其中男114 例,女105例。病种: 急性髓细胞白血病(AML) 61 例,急性淋巴细胞白血病(ALL)37 例, 再生障碍性贫血(AA) 32 例, 多发性骨髓瘤(MM) 32 例。慢性粒细胞白血病(CML) 23 例,骨髓增殖性疾病(MPD) 19 例, 骨髓增生异常综合症(MDS) 15 例,健康人群60例为对照组,其中男38 例,女22 例。患者和健康人群均采集静脉血制备血涂片2 张。1.2 试剂及仪器1.2.1 试剂NAP 阳性率及积分采用Kaplow 偶氮耦联法检测。Kaplow 偶氮偶联法: 固定液: 25 %甲醛乙醇溶液; 丙二醇缓冲液:0. 05 mmol/ L 2 - 氨基- 2 - 甲基- 1 ,3 -丙二醇溶液(pH9. 75)；基质孵育液(pH9. 4 - 9. 6 新鲜配制) :- 磷酸萘酚钠20mg 溶于缓冲液20ml , 再加入坚牢蓝RR20mg；苏木素复染液。1.2.2 实验方法及结果判断抽取患者及健康体检者静脉抗凝血2 m l, 制成血片。将新鲜血片固定5 s, 水冲待干后, 用底物液37 下作用15 m in, 水冲待干后用苏木精复染及0.5 % 氨水返蓝后即可。N A P 阳性颗粒为红色。用油镜观察100 个中性粒细胞, 根据其胞质内N A P 颗粒的多少从(-) ,(+) ,(+) ,(+) ,(+) 进行分类计数,并记录阳性率及积分。1.3 细胞染色采用改良Gomori氏法: 将血涂片用新鲜配制的95%乙醇固定10min ,蒸馏水轻洗,待干;基质液按上述方法配好后(以精密PH 试纸测pH 9. 49. 6) 放37 恒温水浴箱30min ,再将固定好的血片置基质中温浴5h 以上;取出后在蒸馏水中轻洗,自然干燥后放入20g/ L 硝酸钴中5min ;蒸馏水轻洗,自然干燥后放入20g/ L 硫化铵5min ;流水冲洗,干燥后置5g/ L 伊红复染5min ,自来水冲洗,待干燥后镜检。1.4 统计学处理采用EpiData3.0软件建立数据库，并运用SPSS10.0 统计软件数据分析。计量资料以x s 表示,组间的两两比较采用Wilcoxon秩和检验分析。2 结果2.1 正常健康人群NAP 阳性率和积分的测定本组正常健康人群中男性NAP 阳性率为28.6% ,积分为39.5 ;女性NAP 阳性率为28.0 % ,积分为38.9。经统计分析正常健康人群中中性粒细胞碱性磷酸酶染色阳性率和积分的值呈偏态分布,对正常健康人群中男性和女性NAP 阳性率和积分结果进行比较,经Wilcoxon秩和检验发现，两组阳性率(P 0.05) 和积分差异均无统计学意义(P0.05) 。2.2 各型血液系统疾病的NAP 阳性率和积分与正常对照组之间的比较用Wilcoxon秩和检验，其中，急性淋巴细胞白血病(ALL) 、再生障碍性贫血(AA) 、多发性骨髓瘤(MM) 、骨髓增殖性疾病MPD患者的NAP 阳性率和积分则明显高于正常对照组(P 0.05)，其中以AA的NAP积分均值高于其他各组疾病 ；急性髓细胞白血病(AML) 、慢性粒细胞白血病(CML)患者的NAP 阳性率和积分均明显低于正常对照组(P0.05) 。各型血液疾病的NAP阳性率和积分见表1。表1 各型血液系统疾病的NAP 阳性率和积分与对照组的比较病种例数NAP 阳性率( %) NAP 积分AML*6119 1126.3 15.8ALL*3743 2791.3 41.2AA* 32 45 3794.849.9MM* 32 452393.4 48.9CML* 236.9126.318.0MPD(除外CML)* 19 4429115.179.1MDS 1529 2943.129.8正常对照组6028 1339.0 20.1与正常对照组比较,*表示P0. 05 。3 讨论血细胞减少可由造血系统疾病或非造血系统疾病引起, 造血系统引起的血细胞减少常见于AA、AL、MDS、MH、MA、PNH、脾亢等。这类疾病在临床表现和血液学改变上有许多相似之处, 容易混淆, 疾病初期不易诊断, 极易误诊。本组资料显示, 在219例血液病患者中, 急性淋巴细胞白血病(ALL) 、再生障碍性贫血(AA) 、多发性骨髓瘤(MM) 、骨髓增殖性疾病MPD患者的NAP 阳性率和积分则明显高于正常对照组；急性髓细胞白血病(AML) 、慢性粒细胞白血病(CML)患者的NAP 阳性率和积分均明显低于正常对照组。NAP 是中性粒细胞的标志酶,主要存在于成熟中性粒细胞内,是其胞质特殊颗粒释放的一种在碱性条件(pH9.39.6) 能催化各种醇和酚的单磷酸酯水解的非特异性水解酶。NAP 活力可反映成熟粒细胞的成熟程度和功能,当中性粒细胞活化后,NAP 阳性率及积分升高2 。在本组219例血液病患者中,再生障碍性贫血(AA) 32 例，AA 的NA P积分均值高于其他各组疾病与对照组。AA可因中性粒细胞颗粒增加, 细胞返祖, 常伴有感染及激素治疗等因素的影响, 使NA P 活性持续增高。经过观察,AA 在缓时NA P 积分有下降趋势, 但很难恢复正常。不论是早期AA 和局灶性非典型AA ,NA P活性都呈显著增加, 因此NAP积分值持续增高, 可视为AA 的重要早期诊断标准。有研究表明， AA 患者不管早期、晚期、典型、不典型以及治疗前后，其NAP 酶活性均处于极高峰点状态的特异性和敏感性表现，这是其他任何贫血都无法相比的。因此，NAP 可作AA 重要的特异的敏感的诊断指标3,4。综上所述,NAP 活性观察对血液系统疾病的诊断与鉴别诊断有非常重要的意义。参考文献:1 张之南, 沈悌.血液病诊断及疗效标准M .第2 版.北京: 科学出版社, 19