微生物常见生化培养基.doc

硝酸盐培养基硝酸钾 0.2g蛋白 5g蒸馏水 1000mlPH 7.4制法：溶解，校正PH，分装试管，每管约5ml,121高压灭菌15min。硝酸盐还原试剂甲液：将对氨基苯磺酸0.8g溶解于2.5mol/L乙酸溶液100mL中。乙液：将甲萘胺0.5g溶解于2.5mol/L乙酸溶液100mL中。试验方法接种后在361培养14d， 加入甲液和乙液各一滴，观察结果。硝酸盐还原为亚硝酸盐时于立刻或数分钟内显红色。注：本试验阴性的原因有三：细菌不能还原硝酸盐；亚硝酸盐继续分解，生成氨和氮；培养基不适于细菌的生长。如欲检查培养基中硝酸盐是否未被分解，可再加入锌粉少许，可使硝酸盐还原为亚硝酸盐而呈现红色。氧化酶1%盐酸二甲基对苯二胺溶液：少量新鲜配制，干燥冰箱内避光保存。1%萘酚乙醇溶液。试验方法取白色洁净滤纸沾取菌落。加盐酸二甲基对苯二胺溶液一滴，阳性者呈现粉红色，并逐渐加深；再加-萘酚溶液一滴，阳性者于半分钟内呈现鲜蓝色。阴性于两分钟内不变色。 以毛细吸管吸取试剂，直接滴加于菌落上，其显色反应与以上相同。淀粉水解（生化试验培养基，用于产乳酸的链球箘的鉴定）蛋白胨 10gNaCl 5g牛肉膏 5g可溶性淀粉 2g蒸馏水 1000mL琼脂 1520g121灭菌20min(PH7.6肉浸汤琼脂 90mL羊血清5mL3%淀粉溶液 10mL普通肉汤 100mL葡萄糖 0.2gPH值7.57.7用法：将肉汤液琼脂121高压灭菌15分钟，冷至50时，以无菌操作加入灭菌的淀粉溶液及无菌羊血清混合后，倾注灭菌平板备用。）明胶培养基（蛋白胨和牛肉膏提供氮源、维生素、矿物质；某些含明胶的细菌水解明胶，使其液化而降低明胶的胶凝作用）蛋白胨 5g牛肉膏 3g明胶 120g蒸馏水 1000mL制法：将上述成分混合，置流动蒸汽灭菌器内，加热溶解，校正PH至7.27.4，用绒布过滤。分装试管，121灭菌15min，备用）用法：1.用接种针穿刺接种2.将试管置于3537培养24h。 3将接种物放于28约1030min，待降温后取出观察，如仍呈溶解状时即为明胶液化试验阳性，如凝固不溶者为阴性。尿素琼脂（蛋白胨提供氮源，满足细菌生长需要，氯化钠维持稳定的渗透压，葡萄糖为可发酵糖，磷酸二氢钾作为缓冲剂，酚红是指示剂，琼脂为凝固剂。用于细菌脲酶检测）蛋白胨 1g氯化钠 5g葡萄糖 1g磷酸二氢钾 2g0.4%酚红溶液 3mL（酚红 0.012g）琼脂 20g蒸馏水 1000mL20%尿素溶液 100mL（尿素 20g）pH6.67.0制法: 在蒸馏水或去离子水100mL中，加入上述所有成分（琼脂除外），混合均匀，过滤灭菌。将琼脂加入900mL蒸馏水或去离子水中，121灭菌15min，冷却至50，加入灭菌好的基本培养基，混匀后，分装于灭菌试管内,放成斜面备用.试验方法:挑取琼脂培养物接种,在361培养24h,观察结果.尿素酶阳性者由于产碱而使培养基变为红色。三糖铁琼脂(TSI)（适合于肠杆菌科的鉴定。）原理：用于观察细菌对糖的利用和硫化氢（变黑）的产生。该培养基含有乳糖、蔗糖和葡萄糖的比例为10:10:1，只能利用葡萄糖的细菌，葡萄糖被分解产酸可使斜面先变黄，但因量少，生成的少量酸，因接触空气而氧化，加之细菌利用培养基中含氮物质，生成碱性产物，故使斜面后来又变红，底部由于是在厌氧状态下，酸类不被氧化，所以仍保持黄色。而发酵乳糖的细菌(e.coli)，则产生大量的酸，使整个培养基呈现黄色。如培养基接种后产生黑色沉淀，是因为某些细菌能分解含硫氨基酸，生成硫化氢，硫化氢和培养基中的铁盐反应，生成黑色的硫化亚铁沉淀。蛋白胨 20g牛肉膏 5g乳糖 10g蔗糖 10g葡萄糖 1g氯化钠 5g硫酸亚铁铵Fe(NH4)2(SO4)26H2O 0.2g硫代硫酸钠 0.2g琼脂 12g酚红 0.025g蒸馏水 1000mLpH7.4制法:将除琼脂和酚红以外的各成分溶解于蒸馏水中,校正pH.加入琼脂,加热煮沸,以溶化琼脂.加入0.2%酚红水溶液12.5mL,摇匀.分装试管,装量宜多些,以便得到较高的底层.121高压灭菌15min.放置高层斜面备用.。触媒(又称过氧化氢酶，具有过氧化氢酶的细菌，能催化过氧化氢成为水和原子态氧，继而形成氧气分子，出现气泡。用于链球菌即革兰氏阳性球菌初步分群)用法：（1）玻片法：取1824h培养物，置于清洁玻片上，家一滴3%过氧化氢溶液，如产生大量气泡为阳性。（2）试管法：取琼脂斜面（不含血液的）1824h培养物，接种于试管内，加入3%过氧化氢溶液1mL,如产生大量气泡为阳性。注意事项：3%过氧化氢溶液要新鲜配制。 不宜用血琼脂平板上生长的菌落，因红细胞含有触媒，可致假阳性反应。 取对数生长期的细菌。Hugh-Leifson培养基(O/F试验用)蛋白胨 2g氯化钠 5g磷酸氢二钾 0.3g琼脂 4g葡萄糖 10g0.2%溴麝香草酚蓝溶液 12mL蒸馏水 1000mLpH7.2制法:将蛋白胨和盐类加水溶解后,校正pH至7.2.加入葡萄糖,琼脂煮沸,溶化琼脂,然后加入指示剂.混匀后,分装试管,121高压灭菌15min,直立凝固备用.试验方法:从斜面上挑取小量培养物作穿刺接种,同时接种两支培养基,其中一支于接种后滴加溶化的1%琼脂液于表面,高度约1cm,于361培养.蛋白胨水(靛基质试验用)蛋白胨(或胰蛋白胨) 20g氯化钠 5g蒸馏水 1000mLpH7.4制法:按上述成分配制,分装小试管,121高压灭菌15min.靛基质试剂柯凡克试剂:将5g对二甲氨基苯甲醛溶解于75mL戊醇中.然后缓慢加入浓盐酸25mL.欧-波试剂:将1g对二甲氨基苯甲醛溶解于95mL95%乙醇内.然后缓慢加入浓盐酸20mL.试验方法:挑取小量培养物接种,在361培养12d,必要时可培养45d.加入柯凡克试剂约0.5mL,轻摇试管,阳性者于试剂层呈深红色;或加入欧-波试剂约0.5mL,沿管壁流下,覆盖于培养液表面,阳性者于液面接触处呈玫瑰红色.注:蛋白胨中应含有丰富的色氨酸.每批蛋白胨买来后,应先用已知菌种鉴定后方可使用.半乳糖苷酶试验（ONPG）（用于迟缓发酵乳糖的细菌的快速鉴定）原理：有半乳糖苷酶的细菌，可以分解邻硝基酚半乳糖苷（ONPG），而释放黄色的邻硝基酚。方法：取新鲜细菌一环，加入到0.25mL的无菌生理盐水中，加甲苯一滴充分振动，37，5min，再加入无色ONPG溶液0.25mL置于37水浴，悬液变黄则为阳性。七叶苷水解试验（主要用于D群链球菌与其他链球菌的鉴别）原理：七叶苷可以被细菌分解为葡萄糖和七叶素，七叶素与培养基中的二价铁反应，形成黑色化合物，使培养基变黑。方法：将待检测菌接种于七叶苷培养基上，培养后观察结果。鼠李糖培养基蛋白胨 2.7g氯化钠 5.0g磷酸氢二钾 0.3g1%溴麝香草酚蓝水溶液 3.0mL琼脂 5.0g蒸馏水 1000mL制法：（1）除指示剂外将上述成分混于蒸馏水，并加热融