日本血吸虫论文：日本血吸虫 抱雌沟蛋白 酵母双杂交 UDP-葡萄糖表异构酶 Sj34.9基因 基因芯片.doc

日本血吸虫论文：日本血吸虫抱雌沟蛋白相互作用分子的鉴定及两个相关蛋白的研究【中文摘要】血吸虫病是一种分布广泛、危害严重的人畜共患病。目前可以通过药物对感染血吸虫病的个体进行治疗,但是药物治疗不能很好地解决重复感染的问题,也不能有效的预防血吸虫病的发生,所以血吸虫病疫苗的研发显得尤为重要。在血吸虫生长发育过程中雌雄虫合抱尤为关键,血吸虫抱雌沟蛋白是一种可在雌雄虫合抱过程中进行传递并影响雌雄虫合抱的物质。因此,血吸虫抱雌沟蛋白及与其相互作用蛋白的研究对血吸虫生长发育机制的探索及新疫苗的开发具有重要意义。本论文研究工作首先分析了日本血吸虫抱雌沟蛋白功能,然后在本实验室前期利用酵母双杂交技术筛选出多个与日本血吸虫抱雌沟蛋白相互作用阳性克隆的基础上,通过回复杂交实验验证了部分克隆与抱雌沟蛋白间的相互作用,并从中挑选两个基因进行了进一步的研究。论文具体研究工作如下:一、抱雌沟蛋白功能分析及其相互作用蛋白的鉴定利用RNAi和表达谱芯片技术对抱雌沟蛋白功能进行分析,结果显示抱雌沟蛋白可能是一种细胞粘附蛋白,对血吸虫的生长发育及代谢等生物学进程产生重要影响。另外,本实验室前期研究成功构建了18日龄日本血吸虫酵母双杂交cDNA预杂交文库,并利用该技术筛选到与日本血吸虫抱雌沟蛋白相互作用的3.【英文摘要】Schistosomiasis is an important global public health problem; millions of people are still at risk of acquiring this infection. An ideal method for sustainable control of schistosomiasis is using vaccine alone or in combination with drugs. Gynecophoral canal protein (GCP) is especially expressed in the adult male worm and its protein shows wide distribution in the adult female worm after paring. It is proved that the protein could impact on the process of paring and play important roles in the development o.【关键词】日本血吸虫 抱雌沟蛋白 酵母双杂交 UDP-葡萄糖表异构酶 Sj34.9基因 基因芯片【英文关键词】Schistosoma japonicum Gynecophoral canal protein (GCP) Yeast two hybrid SjGALE Sj34.9 Gene microarray【索购全文】联系Q1：138113721 Q2：139938848【目录】日本血吸虫抱雌沟蛋白相互作用分子的鉴定及两个相关蛋白的研究摘要6-8Abstract8-9第一章 前言14-211.1 血吸虫概述14-181.1.1 血吸虫生活史14-151.1.2 血吸虫疫苗研究进展15-171.1.3 日本血吸虫抱雌沟蛋白17-181.2 分子生物学技术在寄生虫研究工作中的应用18-211.2.1 酵母双杂交技术181.2.2 RNA 干扰技术18-191.2.3 基因表达谱芯片技术19-21第二章 日本血吸虫抱雌沟蛋白功能分析及其相互作用分子的鉴定21-332.1 引言212.2 材料与方法21-262.2.1 实验试剂212.2.2 实验仪器21-222.2.3 实验方法22-262.3 实验结果26-312.4 讨论31-33第三章 日本血吸虫UDP-葡萄糖表异构酶功能研究33-533.1 引言333.2 实验材料33-343.2.1 实验动物333.2.2 实验仪器33-343.2.3 实验试剂343.3 实验方法34-403.3.1 实验材料准备34-353.3.2 重组质粒的构建35-363.3.3 生物信息学分析36-373.3.4 重组蛋白表达37-383.3.5 重组蛋白的抗原性分析383.3.6 SjGALE 基因在血吸虫不同时期的转录情况38-393.3.7 SjGALE 蛋白在血吸虫不同时期的表达情况393.3.8 SjGALE 在血吸虫虫体的定位393.3.9 小鼠的免疫保护性实验39-403.3.10 细胞因子分析403.4 实验结果40-503.4.1 SjGALE 基因克隆和生物信息学分析40-423.4.2 SjGALE 重组蛋白表达及抗原性分析42-453.4.3 小鼠抗rSjGALE 多抗特异性检测453.4.4 SjGALE 在血吸虫不同时期表达差异分析45-473.4.5 SjGALE 在日本血吸虫体内的分布47-483.4.6 rSjGALE 免疫小鼠后特异性抗体水平的消长48-493.4.7 rSjGALE 免疫小鼠后细胞因子变化49-503.4.8 rSjGALE 对小鼠的免疫保护效果分析503.5 讨论50-53第四章 日本血吸虫Sj34.9 基因的功能预测及研究53-714.1 引言534.2 实验材料53-544.2.1 实验动物534.2.2 实验仪器534.2.3 实验试剂53-544.3 实验方法54-584.3.1 基因的cDNA 全长克隆54-554.3.2 重组蛋白的表达纯化554.3.3 Real-time PCR 检测基因的转录情况55-564.3.4 小鼠免疫保护实验564.3.5 RNAi 和基因表达谱预测基因功能56-584.4 实验结果58-694.4.1 Sj34.9 全长cDNA 的获得及序列的生物信息学分析58-604.4.2 rSj34.9 的表达及表达产物的抗原性分析60-614.4.3 Sj34.9 基因在日本血吸虫不同时期的转录水平分析