猪传染性胸膜肺炎菌影疫苗的的研制ppt课件

猪传染性胸膜肺炎菌影疫苗的研制 猪病论坛 1 概述 病原菌 胸膜肺炎放线杆菌 APP 疾病特征 肺脏出血 坏死以及与胸膜发生纤维素性粘连危害 世界范围内的多发病 常见病规模化猪场猪呼吸系统综合征 PRDC 的主要病原之一 2 3 急性爆发 致死率可高达100 慢性感染 高发病率 患猪表现为生长迟滞 饲料利用率低 日增重明显下降等 可谓损失巨大 APP包括15个血清型 各个血清型间毒力差异较大 但引起的疾病症状相同 4 主要毒力因子 Apx毒素 Apx Apx Apx 和Apx 荚膜多糖 CP 脂多糖内毒素 LPS 外膜蛋白 OMP 转铁蛋白结合蛋白 Tbp 粘附素 Adhesin 蛋白酶 Protease 铁摄取调控因子 Fur 5 我国APP疫苗研究进展 灭活苗 全菌体通过加热或用甲醛灭活后制备的一种疫苗 血清1 2 7型三价苗 武汉科前 血清1 3 7型三价苗 中农威特 血清1 7二价苗 山东华宏 亚单位疫苗 APP主要毒力因子及保护性抗原为主要组分的疫苗 保猪利 爱普克 PorcilisAPPR Intervet Apx Apx Apx OMP 哈尔滨兽医研究所 目前处于临床前研究阶段 弱毒活疫苗 人工缺失或灭活某一种或几种毒力因子致弱的活疫苗 华中农业大学 APP1 apxIC apxIIC ORF1 注册新兽药证书 哈尔滨兽医研究所 APP7 clpP apxIIC fur 申报转基因安全评价 Ghost 菌影 疫苗 细菌裂解后剩下的空壳制备的一种疫苗 哈尔滨兽医研究所目前处于临床前研究阶段 6 7 猪传染性胸膜肺炎菌影ghost疫苗的研制 8 Ghost 菌影 简介 近年来出现的一种新概念 新技术一种没有细胞浆和核酸的空细菌体利用噬菌体 X174裂解基因E在革兰氏阴性细菌中表达后 该基因编码蛋白在细菌细胞膜和胞壁上可形成穿膜孔道 在渗透压的作用下使菌体破裂 细菌内细胞浆和核酸等成分通过此孔道被排出 形成的一种空的细菌外壳 即为 菌影 也称 菌蜕 9 Ebensenetal JImmunol 2004 Witteetal JBacteriol 1990 扫描电镜 透射电镜 10 Ghost制作流程示意图 2842 11 目前 国外已经成功制备成菌影的细菌包括大肠杆菌 鼠伤寒沙门氏菌 肠炎沙门氏菌 肺炎克雷伯氏杆菌 支气管败血博特氏杆菌 幽门螺旋杆菌 霍乱弧菌 胸膜肺炎放线杆菌 流感嗜血杆菌 溶血巴氏杆菌 多杀巴氏杆菌 绿脓杆菌 恶臭假单胞菌等 说明只要具备合适的遗传操作系统 基于噬菌体裂解基因 的裂解系统几乎适用于所有的革兰氏阴性细菌 目前我们实验室已成功制备了胸膜肺炎放线杆菌和副猪嗜血杆菌的菌影 12 Ghost疫苗的优点 是一种基因工程死苗 不含任何核酸成分 安全 由于ghost疫苗利用的是基因工程方法使菌体裂解灭活 没有经过物理或化学的变性过程 如甲醛灭活处理 所以菌体表面构象与活菌相似 提呈的是天然抗原决定簇 免疫原性好 可以激发特异的体液免疫和细胞免疫应答 交叉保护能力优于灭活苗 优良的佐剂效应 菌影细胞表面含有脂多糖和肽聚糖 具有佐剂作用 诱导的免疫反应水平达到或超过福氏完全佐剂 生产工艺简单 不需添加佐剂 可冻干保存 不需冷链条件运输和保存 13 App及菌影透射电镜照片 正常APP细菌 APP菌影 重组菌株 APP1 pGZRS E 14 正常APP细菌 APP菌影 App及菌影扫描电镜照片 15 正常剂量及大剂量免疫情况 Appghost对断奶仔猪的安全性试验 16 Appghost不同剂量免疫对仔猪体温的影响 17 Appghost不同剂量免疫对仔猪体重的影响 18 Appghost对怀孕母猪的安全性试验 正常剂量及大剂量免疫情况 19 Appghost不同剂量免疫对怀孕母猪体温的影响 20 Appghost免疫效力试验 21 与对照比相比差异显著 P 0 05 与对照比相比差异极显著 P 0 01 与对照比相比差异极显著 P 0 001 与灭活苗组相比差异显著 P 0 05 与灭活苗组相比差异极显著 P 0 01 IgG 免疫后抗体动态变化 攻毒 22 细胞因子产生情况 IFN 与对照比相比差异显著 P 0 05 与对照比相比差异极显著 P 0 01 与对照比相比差异极显著 P 0 001 与灭活苗组相比差异显著 P 0 05 与灭活苗组相比差异极显著 P 0 01 IL 4 攻毒 攻毒 23 与对照比相比差异显著 P 0 05 与对照比相比差异极显著 P 0 01 与灭活苗组相比差异显著 P 0 05 T淋巴细胞亚类 攻毒 攻毒 24 攻毒保护情况 APP1攻毒 1 25 肺损伤 26 50 肺损伤 51 75 肺损伤 76 100 损伤 25 攻毒保护情况 APP5攻毒 1 25 肺损伤 26 50 肺损伤 51 75 肺损伤 76 100 损伤 26 攻毒保护情况 APP7攻毒 1 25 肺损伤 26 50 肺损伤 51 75 肺损伤 76 100 损伤 27 临床病理变化 Appghost免疫组 灭活苗免疫组 对照组 28 肺脏组织病理变化 Appghost免疫组 灭活苗免疫组 对照组 29 肺脏免疫荧光检测 对照组 灭活苗免疫组 Appghost免疫组 30 hilarlymphnode Lung Spleen 与对照比相比差异显著 P 0 05 与对照比相比差异极显著 P 0 01 与灭活苗组相比差异显著 P 0 05 31 小结 猪传染性胸膜肺炎菌影ghost疫苗安全性好 接种后无任何不良反应 猪传染性胸膜肺炎菌影ghost疫苗通过肌肉注射免疫猪后 可刺激机体产生较强的体液免疫和细胞免疫 对App强毒菌的攻击可产生良好保护 明显优于灭活苗免疫组和对照组 猪传染性胸膜肺炎菌影ghost疫苗已与动物用生物制品国家工程研究中心 哈尔滨 达成了合作开发的意向很多生物制品企业对猪传染性胸膜肺炎菌影ghost疫苗感兴趣 并初步达成了成果转化的意向 32 副猪嗜血杆菌病ghost疫苗的研制 33 正常Hps Hpsghost Hps及菌影透射电镜照片 34 试验进展 基本完成了实验室研究工作 正在进行转基因安全评价 已完成中间试验 结果表明 Hpsghost疫苗对靶动物猪是安全的 已申报环境释放并获得批文 初步动物免疫试验结果表明 Hpsghost疫苗具有良好的免疫效力 能够保护猪抵抗Hps强毒菌的攻击 保护效力要优于灭活疫苗 35 申请和获得的专利 重排噬菌体溶菌基因及其打孔载体和在制备疫苗中的应用 ZL200910018379 5 增强噬菌体溶菌基因打孔效率的DNA序列及其应用 ZL200910018380 8 突变的噬菌体裂解基因E 含有该裂解基因的裂解质粒载体和在制备菌影疫苗中的应用 申请号 201310409238 5 一种制备副猪嗜血杆菌病菌影疫苗的方法及其产品和应用 申请号 201310409237 0 36 37 获得的转基因安全证书及安全评价 表达溶解基因E和温敏调控基因cIts857的重组放线杆菌Shope4074 pGZRS E 基因工程菌影疫苗的安全证书 农基安证字 2011 第014号 表达溶菌基因E和温敏调