植物细胞期末复习.doc

2植物的脱毒有哪些技术？（1）茎尖（微茎尖）培养脱毒：病毒在植物体内的分布并不均匀，越靠近茎端的病毒的感染深度越低，生长点则几乎不含或含病毒很少（2）愈伤组织脱毒法：通过植物的器官和组织的培养，脱分化诱导产生愈伤组织，然后从愈伤组织再分化产生芽，长成小植株，可以得到无病毒苗（3）珠心组织培养脱毒：病毒一般不通过种子传播，由珠心细胞发育成的胚再生的植株是无毒的，并具有与母本相同的遗传特性。（4）微体嫁接离体培养脱毒法：将实生苗砧木在人工培养基上种植培育，再从成年无病树枝上切取0.41.0mm茎尖，在砧木上进行试管微体嫁接，以获得无病毒幼苗。（5）热处理脱毒：一些病毒对热不稳定，在高于常温的温度下（35-40），即钝化失活3、培养基一般包含哪些成分？一、无机营养物质（C.H.0;大量元素（N,P,K,Ca,Mg,S）;微量元素（Fe,Cu,B,Mo,Mn,Cl）等） 二、有机物质 1.含氮物质：最常用维生素B1 2.碳源：最常用蔗糖，浓%三、植物生长调节物质度为2%-5植物生长调节剂是外源的调节植物生长发育的物质植物激素（生长素类，细胞分裂素类，赤霉素类，琼脂）是在植物体内合成的，对植物生长发育有显著调节 作用的微量有机物无机元素和有机营养构成的培养基仅保证培养物的生存与最低生理活动，只有加入植物生长调节物质，才能诱导细胞分裂、脱分化和再分化4、外植体怎样选择1、选择优良的基因型 2、取材：从生长旺盛、健壮、无病虫害的植株上取材，其代谢旺盛、再生能力强、离体培养容易成功 3、外植体大小选择：因外植体不同而不同，如茎尖越小，脱毒效果越好。 4、选择外植体的时期:最好在植物生长的最适宜时期取材培养。如番木瓜茎尖培养冬季取材难于成活，夏季取材，成活率高。5愈伤组织形态建成的方式 （1）通过产生单极性的不定芽，再在不定芽下方长出不定根，并在二者之间形成微管束组织，进而形成完整植株，多数属此（2）通过产生单极性的不定根，再在不定根下方长出不定芽，并在二者之间形成微管束组织，进而形成完整植株，双子叶中常见，单子叶少有（3）愈伤组织仅分化出不定芽或不定根，而形成无根苗或无苗根（4）愈伤组织临近部位分化出不定根和不定芽，然后两者在结合起来，在形成完整植株，此时根和芽的微管束一定要相连，否则不能成活（5）通过体细胞胚胎途径再生植株，也是一种较为常见类型6、简述外植体消毒的一般步骤。（1）茎尖、茎、叶片的消毒：消毒前先用清水漂洗干净或用软毛刷将尘埃刷除，茸毛较多的用皂液洗涤，然后再用清水洗去皂液，洗后用吸水纸吸干表面水分，用70酒精浸数秒钟，取出后及时用10次氯酸钙饱和上清液浸泡1020分钟。或用210次氯酸钠溶液浸泡615分钟。消毒后用无菌水冲洗3次，用无菌纱布或无菌纸吸干接种。（2）根、块茎、鳞茎的消毒：这类材料大都生长在土中，常带有泥土，挖取时易遭损伤。消毒前必须先用净水清洗干净，在凹凸不平处以及鳞片缝隙处，均用毛笔或软刷将污物清除干净，用吸水纸吸干后，在70酒精中浸一下，然后用610次氯酸钠溶液浸515分钟，或用0102氯化汞消毒510分钟，最后用无菌水清洗34次，用无菌纱布或无菌纸吸干后接种。（3）果实、种子的消毒：这类材料有的表皮上具有茸毛或蜡质，消毒前先用70酒精浸泡几秒钟或210分钟，然后用饱和漂白粉上清液消毒1030分钟或2次氯酸钠溶液浸1020分钟，消毒后去除果皮，取出内部组织或种子接种。直接用种子或果实消毒，经消毒后的材料均须用无菌水多次冲洗后接种。（4）花药、花粉的消毒：植物的花药外面常被花瓣、花萼包裹着，一般处于无菌状态，只需采用表面消毒即可接种。通常先用70酒精棉球擦拭花蕾或叶鞘，然后将花蕾剥出，在饱和漂白粉上清液中浸泡1015分钟，用无菌水冲洗23次，吸干后即可接种。8在植物组织培养的中，你采取何预防措施以减少污染？（1） 防止外植体带菌：选择好外植体采集时期和采集部位；室内或无菌条件下进行预培养； 外植体严格灭菌、灭菌效果实验、多次灭菌和交替灭菌（2） 保证培养基及接种器具彻底灭菌：分装时，注射器勿接触瓶口，培养基勿粘瓶口； 检查封口膜是否破损；扎瓶口要位置适当，松紧适宜；保证灭菌时间和温度（3）操作人员严格遵守无菌操作规程（4）保证接种与培养环境清洁9 植物细胞工程的应用有哪几方面 （1）脱毒和快速繁殖 （2）细胞工程育种：利用培养变异，筛选优良突变体、利用细胞融合技术；克服远缘杂交不亲和性；利用远缘杂交幼胚培养，获得杂种植物 （3）离体种质保存（4）细胞培养生产有用物质10、生长素在植物组织培养中起什么作用，常见的生长素有哪几种？（1）促进细胞生长和细胞分裂（2）诱导受伤组织表面细胞恢复分裂能力（3）形成愈伤组织，促进生根 （4）与一定量的细胞分裂素配合共同诱导不定芽的分化，侧芽的萌发与生长，胚状体的诱导常见生长素：IAA(吲哚乙酸)、IBA（吲哚三丁酸）、NAA（萘乙酸）、NOA（萘氧乙酸）、p-CPA（对氯苯氧乙酸）、2，4-D（二氯苯氧乙酸）、2，4，5-T（三氯苯氧乙酸）11、细胞分裂素在植物组织培养中起什么作用，常见的细胞分裂素有哪几种？（1）促进细胞的分裂和分化（2）诱导愈伤组织或器官上分化不定芽（3）促进侧芽的萌发和生长常见分裂素：BAP（12、花粉培养的优点（与花药培养比）：（1）花粉培养容易受药壁、花丝、花隔等体细胞组织的影响，再生植株会出现不同倍性的个体，而分离的花粉培养可以克服这一不足（2）能更好调节控制核发育的各种因子，而且可以直接从单细胞开始观察整个雄核发育的过程。为研究雄核的生理生化等问题提供方便。（3）原则上，将从花粉培养能得到更多的花粉植株。13、理想的人工种皮应该具备的条件（1）人工种皮需要一定透气性，不能影响胚状体的呼吸（2）人工种皮需要一定硬度，经得起种子储存和运输中的挤压和机械播种过程中的磨损（3）体细胞胚的包裹材料，要求播种后易于降解（4）含有其他有利于胚状体存活、生长的成分（5）.配制简单易行，成本低6.无毒无害，能保证繁殖顺利穿透发芽14、茎尖培养脱毒的原理？（1）能量竞争：病毒核酸和植物细胞分裂时DNA合成均需要消耗大量的能量，而分生组织细胞本身很活跃，其DNA合成是自我提供能量自我复制，而病毒核酸的合成要靠植物提供能量来自我复制，因而就得不到足够的能量，从而就抑制了病毒核酸的复制（2）传导抑制：病毒在植物体内的传播主要是通过维管束实现的，但在分生组织中维管组织还不健全，从而抑制了病毒向分生组织的传导（3）激素抑制：在分生组织中，生长素和细胞分裂素水平均很高，因而阻滞了病毒的侵入或者抑制病毒的合成（4）酶缺乏：可能病毒的合成需要的酶系统在分生组织中缺乏或还没建立，因而病毒无法在分生组织中复制（5）抑制因子：在分生组织中存在有某种抑制因子15、在超低温保存中，采用哪些措施以尽量避免植物材料的伤害？（1）悬浮培养或继代培养（2）预培养（3）低温锻炼（4）冷冻防护剂16、花药培养的意义？花药培养的主要目的是获得纯系育种材料和进行单倍体育种，缩短育种年限和提高育种效率。（1）在基础科学领域，花药培养不仅已成为研究生理，生化和遗传常用的重要方法，而且对于实验胚胎学、生理学及分子生物学中基因调控、表达机理的阐明有重要意义；同时，花药培养建立的双单倍体群体-DH群体，具有遗传学上的纯合基因组，是AFLP，RAPD，SSR等分子标记和基因图谱的理想材料，可避免二倍体中由于不完全自交，使染色体上DNA碱基的细微差别造成的干扰，大大提高基因定位、标图的准确性。（2）在育种领域，花培育种已与常规杂交育种、远缘杂交育种、诱变育种以及转基因技术相结合，是生物技术在农作物育种中应用最广泛、最有成效的方法之一。（3）诱导形成单倍体，快速获得纯系，缩短育种周期（4）有利于筛选隐性突变体，提高选择效率（5）获得无病毒个体17、简述原生质体的融合过程包括三个主要阶段：（1）凝聚作用阶段，其间两个或两个以上的原生质体的质膜彼此靠近（2）在很小的局部区域质膜紧密粘连，彼此融合，在两个原生质体之间细胞质呈现连续状态或是出现桥（3）由于细胞质桥的扩展，融合完成，形成球形的异核体或同核体。18、试比较花药培养与花粉培养的异同。相同点：（1）利用小孢子染色体数目的单倍性，培育出单倍体植株。（2）成苗途径相同，即有 胚状体成苗 和 愈伤组织再分化成苗两条途径。不同点：（1）花粉培养是需进行 花粉的分离 和 胚珠的特殊培养 。（2）花药培养需对花蕾进行理化方法的预培养19、人工种子的制备程序外植体的选择和消毒愈伤组织的诱导体细胞胚的诱导体细胞胚的同步化体细胞胚的分选体细胞胚的包裹（人工胚乳）包裹外膜发芽成苗试验体细胞胚变异程度与农艺研究20、电融合的基本过程：一般分为两步进行。首先，将原生质体置于低导电解质的溶液中，在电极间施加高频交变电流（0.4-1.5MHz，2-4V/mm），这样就产生了电泳效应，使原生质体偶极化并沿电场线方向游动，原生质体的迁移会使沿着电场的方向排成串珠状。接着，再给予瞬间高强度的电脉冲（脉冲强度500-1000V/CM,脉冲期宽为20-50us）一次或数次（脉冲间隔约1-2S），引起膜的可逆性破裂而导致融合发生。21影响原生质体数量和活力的因子有哪些？1.材料的来源：无菌试管苗叶片、上胚轴和子叶2.前处理：黑暗处理就、低温处理和不同光质照射；消毒；保证酶解充分进行3.酶处理：纤维素酶、果胶酶 酶浓度 酶解时间 温度 酶液的PH（PH高，酶活性低，原生质体分离慢，完事的原生质体数目多；PH低，酶活性强，原生质体分离快，原生质体损坏多）4.渗透压：大致和原生质体内的相同，或者比细胞内渗透压略大些5.常用的两种系统为：a、糖溶液系统：促进分离的原生质体再生细胞壁并继续分裂b、盐溶液系统：获得的原生质体不受生理状态的影响6.细胞质膜稳定剂：防止质膜破坏，提高原生质体的稳定性和活性，促进原生质体胞壁形成及细胞分裂等。22、植物种质资源的保存方法按保存的地理位置分为原地保存和异地保存按保存的具体方法，可分为种植保存、贮藏保存、试管保存、基因文库保存25、用酶法分离原生质体时需用哪些酶？各有何作