小檗碱 方案.doc

6动物实验方案（小檗碱）1、概要本实验采用灌胃方式给药，分别于小檗碱在大鼠体内的分布相后期、平衡相和消除相前期固定三个时间点摘眼球采血，解剖取大鼠的心、肝、脾、肺、肾、脑，冷藏待用。按给药浓度（高、低），小檗碱组（单）和小檗碱+甘草次酸组（合），小檗碱的分布相（F）、平衡相（P）和消除相（X），将实验分为13组如下表：分布相（F）平衡相（P）消除相（X）高浓度组（G）单（D）合（H）低浓度组（D）单（D）合（H）空白组每组6只大鼠，雌雄各半，共需SD大鼠78只。2、材料与试剂2.1、实验动物：SD大鼠（每只200-300克）78只，雌雄各半。2.2、试剂：小檗碱（Curcumin） 甘草次酸（GE） 羧甲基纤维素钠(CMC-Na) 草酸铵 草酸钾 蒸馏水 品红2.3、仪器设备： 解剖剪 镊子 容量瓶 烧杯 玻棒 滴管 灌胃针 离心机 电子天平 解剖板 移液枪 离心管 冻存管 康宁管 手套 口罩 标签纸 培养皿 3、实验方法与步骤3.1、实验前期准备3.1.1、清洗实验器具：自来水冲洗 蒸馏水洗 适量有机溶剂清洗 烘干3.1.2、贴标签：离心管：用来采血和离心，一鼠一管，需78支。标签标为：高浓度（单）分布（1）Eg.冻存管：用来装离心后的血液，一鼠一管，需78支。标签为：小檗碱（高）XB-GF-D(1)Eg.康宁管：用来装大鼠器官，一管装同组两鼠的同一器官，需234支。标签为：小檗碱（高）XB-GF-D(1+2)心Eg. 3.1.3、挖埋鼠坑3.1.4、称量大鼠、作标记、分组、计算给药量随机选6只大鼠，雌雄各半，用品红溶液分别标记6只大鼠的左前肢、右前肢、左后肢、右后肢、头部、尾部，分别记为序号1、2、3、4、5、6.将大鼠装入大的塑料杯中用电子天平称量鼠重记录于下表。将称得的大鼠放置同一鼠笼中，禁食12h，自由饮水。其余各组操作同上。 项目序号体重（g）给药量（ml）给药时间采血时间1234563.1.5、配制药品配制250ml 0.5%CMC-Na：精密称取1.25gCMC-Na于适量蒸馏水中超声溶解，移入250ml容量瓶中，加蒸馏水定溶至250ml，混匀，放入冰箱中冷藏待用。配制100ml抗凝剂：精密称取1.2g草酸铵和0.8g草酸钾，加入适量蒸馏水溶解，再移入100ml容量瓶中加蒸馏水定容至100ml，混匀，放入冰箱中冷藏待用。配制小檗碱药液:a、 高浓度组：配50ml,浓度40mg/ml,精密称取2g小檗碱粉末溶于适量0.5%CMC-Na中，移至50ml容量瓶中，加0.5%CMC-Na定容至50ml，混匀，放入冰箱冷藏待用。b、 低浓度组：配50ml,浓度20mg/ml.精密称取1g小檗碱粉末溶于适量0.5%CMC-Na中，移至50ml容量瓶中，加0.5%CMC-Na定容至50ml，混匀，放入冰箱冷藏待用。配制小檗碱-甘草次酸药液：a、 高浓度组：配50ml,小檗碱浓度40mg/ml.甘草次酸浓度5mg/ml。精密称量2g小檗碱粉末和0.25g甘草次酸粉末溶于适量0.5%CMC-Na中，移至50ml容量瓶中，加0.5%CMC-Na定容至50ml，混匀，放入冰箱冷藏待用。b、 低浓度组：配50ml,浓度20mg/ml.甘草次酸浓度5mg/ml。精密称量1g小檗碱粉末和0.25g甘草次酸粉末溶于适量0.5%CMC-Na中，移至50ml容量瓶中，加0.5%CMC-Na定容至50ml，混匀，放入冰箱冷藏待用。配制0.9%生理盐水：3.2、给药与采血及组织样本的制备3.2.1、高浓度组：取禁食12h后的SD大鼠36只（6组），每组6只，雌雄各半，以小檗碱计,每只大鼠按400mg/kg灌胃给药，其中3组灌胃小檗碱，另外3组灌胃小檗碱+甘草次酸，在鼠笼上贴上标签。灌胃后,按分布相、平衡相和消除相分别于1h、2h、4h后摘眼球取血。取血用的离心管中预先加入0.4ml抗凝剂，取好血后，将其放入离心机进行离心，以 3000r/min 离心10min。离心完后取上清液至冻存管中，放入冰箱中-20下保存。取血后的大鼠颈椎脱臼处死，迅速取出肝、肾、心、肺、脾、脑等组织，用0.9%生理盐水洗净表面浮血，滤纸吸干，置-20 冷冻保存。 注意，取器官时不要将大鼠消化道剪破。3.2.2、低浓度组：以小檗碱计,每只大鼠按200mg/kg灌胃给药，其余与高浓度组相同。 3.2.3、空白组:SD大鼠6只, 雌雄各半。给药前禁食12 h，自由饮水。以10ml/kg灌胃0.5%CMC-Na.灌胃1h后摘眼球取血。其余操作同高浓度组。4、清洗实验器材和实验室用自来水洗净各种实验器材，打扫实验室。对解剖剪、镊子、解剖台和实验室进行消毒处理，掩埋大鼠尸体。清点实验器材，凉干，存放好。5、注意事项a、本实验所用管具较多，取用前要看清