总蛋白标准.doc

总蛋白标准（新旧）准确度验证实验一 实验目的：通过加样回收率计算，分别以旧标准和新标准为参照，拟定标准曲线，再分别以新标准1mg/ml和旧标准1mg/ml稀释成未知浓度两个低浓度，一个中浓度，一个高浓度样品，（稀释时我们其实是按照标准操作稀释的，两个低浓度分别为2.5ug/ml、5ug/ml,中浓度为7.5ug/ml,15ug/ml,在这次实验中我们当做未知浓度样品来检测），通过加入准确浓度的蛋白标准，进行回收率实验，相互验证新旧标准拟定标准曲线，检测蛋白浓度测定结果与真实值接近的程度。二 实验步骤：1 旧标准为参照，拟定标准曲线如下：标准加入量OD1OD2均值2.50.0300.0250.028 50.0670.0660.067 7.50.1000.1080.104 100.1350.1320.134 12.50.1700.1680.169 150.1900.1890.190 2样品的制备：取含量为1mg/ml新标准，分别取25ul，50ul，75ul，150ul，稀释至1ml，分别标记为未知浓度待测样品1、2、3、4，按照考马斯亮蓝测定方法，每个标号样品平行测定两次，结果如下：（计算过程略）名称浓度（ug/ml）0.5ml含ug数OD值均值1OD值小于标准低限25.252 2.6260.069 38.1914.0950.108413.2676.6340.174 3加样回收率实验：分别取新标准蛋白样品1、2、3、4各0.5ml，并标号为ABCD,分别加入准确浓度的旧蛋白标准溶液5ug/ml,7.5ug/ml,10ug/ml,12.5ug/ml各0.5ml按照考马斯亮蓝测定方法，每个标号样品平行测定三次，结果如下：（计算过程略）名称测的总量ug/ml样品含量（0.5ml含ug数）加入量ug/ml回收率OD值均值AOD值小于曲线标准低限B6.2472.6413.75096.1%0.084C8.1834.1105.00081.5%0.107D11.8986.6496.25083.9%0.156备注：回收率计算公式为(测得总量-样品含量)/加入量*100%，通常要求95%-105%.4新标准为参照，拟定标准曲线如下:标准加入量OD1OD2均值2.50.031 0.032 0.029 50.068 0.072 0.064 7.50.098 0.102 0.093 100.129 0.127 0.132 12.50.171 0.167 0.168 150.199 0.190 0.204 5样品的制备：取含量为1mg/ml旧标准，分别取25ul，50ul，75ul，150ul，稀释至1ml，分别标记为待测样品abcd，按照考马斯亮蓝测定方法，每个标号样品平行测定两次，结果如下：（计算过程略）名称浓度（ug/ml）0.5ml含ug数OD值均值aOD值小于标准低限b6.2123.1060.081c7.1243.5620.094d 13.4386.7190.1806加样回收率实验：分别取新标准蛋白样品a、b、c、d各0.5ml，并标号为,分别加入准确浓度的溶液5ug/ml,7.5ug/ml,10ug/ml,12.5ug/ml各0.5ml按照考马斯亮蓝测定方法，每个标号样品平行测定三次，结果如下：（计算过程略）名称测的总量ug/ml样品含量（0.5ml含ug数）加入量ug/ml回收率OD值均值OD值小于曲线标准低限7.5493.1063.750118%0.099 7.9633.5625.00088%0.10512.00246.7196.25084%0.160 备注：回收率计算公式为(测得总量-样品含量)/加入量*100%，通常要求范围为95%-105%。三 实验结论：1、以旧蛋白标准拟定标准曲线，OD值位于相当于作标准曲线平行测定的第二个点和第三个点之间（0.067第二管-0.104第三管），测量结果的准确度为96%，符合药品质量标准要求范围之内；该考马斯亮蓝蛋白浓度测定方法对所检测的蛋白浓度小于5ug/ml样品检测不灵敏，OD值低于标准曲线低限。2、以新蛋白标准拟定标准曲线，OD值位于相当于作标准曲线平行测定的第三个点和第四个点之间（0.093第三管-0.132第四管），测量结果的准确度为88%，接近药品质量标准要求范围，但不符合，该考马斯亮蓝蛋白浓度测定方法对所检测的蛋白浓度小于5ug/ml样品检测不灵敏，OD值低于标准曲线低限。3、无论是旧蛋白标准拟定标准曲线，还是新蛋白标准拟定曲线，对于蛋白浓度大于12.5ug/ml,测量的准确度降低。4、以上结论较为符合在总蛋白测