薄层色谱法 中山大学 色谱及分离技术.pdf

薄层色谱法薄层色谱法 Thin Layer Chromatograghy 薄层色谱概论薄层色谱概论 制备薄层色谱制备薄层色谱 离心薄层色谱离心薄层色谱 PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 薄层色谱概论薄层色谱概论 薄层色谱薄层色谱 Thin Layer Chromatography TLC 是快速分离 定性和定量分析的一种非常重要是快速分离 定性和定量分析的一种非常重要 的色谱技术 的色谱技术 将固定相涂布于玻璃 铝铂 塑料片等载板上将固定相涂布于玻璃 铝铂 塑料片等载板上 形成均一薄层 将被分离的物质形成均一薄层 将被分离的物质 溶液 点加溶液 点加 在薄层的一端 置展开室中 选用适当的展开在薄层的一端 置展开室中 选用适当的展开 剂 借毛细作用从薄层点样的一端展开到另一剂 借毛细作用从薄层点样的一端展开到另一 端 使性质不同的物质得以分离 端 使性质不同的物质得以分离 PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 一 一 TLC的分离原理的分离原理 分离原理随所用固定相不同而不同 可分为分离原理随所用固定相不同而不同 可分为 l 吸附薄层色谱吸附薄层色谱 2 分配薄层色谱分配薄层色谱 3 离子交换薄层色谱离子交换薄层色谱 4 分子排阻薄层色谱分子排阻薄层色谱 5 亲和薄层色谱亲和薄层色谱 PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 二 二 TLC 的技术参数的技术参数 1 比移值比移值Rf 薄层色谱的基薄层色谱的基 本定性参数 本定性参数 2 2 相对比移值 相对比移值相对比移值相对比移值 R R i i s s 可大于或小于可大于或小于 l 但 但 其重复性及可比性均其重复性及可比性均 优于优于Rf值值 R R i si s R R f f i i R R f s f s PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 三 三 TLC的应用特点的应用特点 TLC不仅适合于小量样品的制备 也可用于较大量样不仅适合于小量样品的制备 也可用于较大量样 品的纯化 如果将薄层加宽加厚 把样品点成一条线 品的纯化 如果将薄层加宽加厚 把样品点成一条线 能分离几百毫克样品 尤其是对于能分离几百毫克样品 尤其是对于Rf值相近的物质的值相近的物质的 分离 分离 TLC除了用于分离外 更主要的是通过与已知结构化除了用于分离外 更主要的是通过与已知结构化 合物相比较 来鉴定少量有机混合物的组成 此外合物相比较 来鉴定少量有机混合物的组成 此外 经常利用经常利用 TLC寻找柱色谱的最佳分离条件 寻找柱色谱的最佳分离条件 常用的常用的两种两种制备制备型型薄层色谱薄层色谱包括 包括 传统的制备薄层法 传统的制备薄层法 PTLC 即流动相借毛细作用 即流动相借毛细作用 流经固定相 流经固定相 借外力强制性的使流动相流经固定相 如离心薄层和借外力强制性的使流动相流经固定相 如离心薄层和 加压薄层 加压薄层 PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 制备薄层色谱制备薄层色谱 Preparative Thin Layer Chromatography PTLC 一 固定相及载体一 固定相及载体 二 粘合剂与添加剂二 粘合剂与添加剂 三 薄层板的制备三 薄层板的制备 四 上样四 上样 五 展开剂选择五 展开剂选择 六 薄层展开六 薄层展开 七 检测方法七 检测方法 八 被分离物质的收集八 被分离物质的收集 九 九 PTLC分离化合物的纯化分离化合物的纯化 PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 经典的制备型薄层色谱 设备简单 经典的制备型薄层色谱 设备简单 操作方便 操作方便 薄层色谱薄层色谱与常压柱与常压柱分离配分离配 合合使使用用 仍然在实验室中有较多的应 仍然在实验室中有较多的应 用 尤其是在一些没有现代分离手段用 尤其是在一些没有现代分离手段 的实验室中广为使用 的实验室中广为使用 PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 一 固定相及载体一 固定相及载体 1 固定相 薄层色谱必须将被分离物质点于固定 固定相 薄层色谱必须将被分离物质点于固定 相上进行分离 固定相要根据被分离化合物的性相上进行分离 固定相要根据被分离化合物的性 质来选择 质来选择 分离亲脂性化合物分离亲脂性化合物常常选用硅胶 氧化铝 乙酰常常选用硅胶 氧化铝 乙酰 纤维素及聚酰胺 纤维素及聚酰胺 分离亲水性化合物分离亲水性化合物常常选用纤维素 硅藻土及聚常常选用纤维素 硅藻土及聚 酰胺 但也有例外 脂溶性叶绿素在氧化铝及酰胺 但也有例外 脂溶性叶绿素在氧化铝及 纤维素上均能得到较好的分离 纤维素上均能得到较好的分离 2 载体 玻璃板 铝箔 塑料片等 吸附薄层 载体 玻璃板 铝箔 塑料片等 吸附薄层 纤维素 硅藻土 分配薄层 纤维素 硅藻土 分配薄层 PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 4 硅胶硅胶薄层薄层板板的厚的厚度度 普通薄层厚度为普通薄层厚度为250 m 高效薄层板为高效薄层板为200 m 制备薄层板厚度制备薄层板厚度0 5 2mm PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 5 市售硅胶市售硅胶及及预预制制板板规格规格 符号及含义 符号及含义 硅胶硅胶G 是含有是含有13 煅石膏 煅石膏 gypsum 黏合黏合 剂的硅胶剂的硅胶 硅胶硅胶H 不含黏合剂的硅胶 不含黏合剂的硅胶 硅胶硅胶HF254 不含黏合剂 含有一种无机荧光 不含黏合剂 含有一种无机荧光 剂 如锰激活的硅酸锌 在剂 如锰激活的硅酸锌 在254nm波长紫外波长紫外 光下呈强烈黄绿色荧光光下呈强烈黄绿色荧光 硅胶硅胶GF254 含有煅石膏黏合剂 含荧光剂 含有煅石膏黏合剂 含荧光剂 在在254nm波长紫外光下呈强烈黄绿色荧光波长紫外光下呈强烈黄绿色荧光 硅 胶硅 胶 HF254 366 不含粘 合剂 在 不含粘 合剂 在 254与与 366nm波长有荧光波长有荧光 硅胶硅胶PF254 制备型的 在 制备型的 在254nm有荧光 有有荧光 有 荧光剂 适用于不发光不易显色物质的制备与荧光剂 适用于不发光不易显色物质的制备与 分离 分离 PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 2 氧氧化化铝铝 在薄层中其应用仅次于硅胶 由 在薄层中其应用仅次于硅胶 由 氢氧化铝氢氧化铝400 500 煅烧而成 广泛的用 煅烧而成 广泛的用 于萜类 生物碱 脂肪类 芳香类化合物于萜类 生物碱 脂肪类 芳香类化合物 的分离 因制法和处理方法不同可分为碱的分离 因制法和处理方法不同可分为碱 性 酸性 中性三类性 酸性 中性三类 碱性氧化铝 碱性氧化铝 PH 9 10适于中性 碱性适于中性 碱性 化合物的分离化合物的分离 酸性氧化铝 酸性氧化铝 PH 4 5适于酸性化合物的适于酸性化合物的 分离分离 中性氧化铝 中性氧化铝 PH 7 7 5适于酸性或对碱适于酸性或对碱 不稳定的化合物的分离不稳定的化合物的分离 氧化铝因其含水量活性可分为五级 制备氧化铝因其含水量活性可分为五级 制备 型薄层用氧化铝选用型薄层用氧化铝选用2 3级级 PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 市售氧市售氧化化铝铝 含 含10 G PH 7 5 8 不带粘合剂的氧化铝 不带粘合剂的氧化铝 PH 9 也可加入波长也可加入波长 254nm的荧光指示剂 的荧光指示剂 PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 3 纤维素纤维素 与纸层析相似 按分配的原理 纤维素分子与纸层析相似 按分配的原理 纤维素分子 是由大量纤维二糖通过糖苷键连接的 由于有是由大量纤维二糖通过糖苷键连接的 由于有 许多的许多的OH基 所以具有亲水性 一分子水与与基 所以具有亲水性 一分子水与与 纤维素的两个羟基结合 形成 纤维素 纤维素的两个羟基结合 形成 纤维素 H2O 络合物 这种固定相可以视为一种络合物 这种固定相可以视为一种多多糖浓糖浓溶溶液液 即使使用与水相混溶的溶剂时 仍然形成类似即使使用与水相混溶的溶剂时 仍然形成类似 不相混溶的两相 不相混溶的两相 PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 4 聚酰胺聚酰胺 聚酰胺是由酰胺聚合而成的高分子聚合物 聚酰胺是由酰胺聚合而成的高分子聚合物 薄层色谱中常用的是聚己内酰胺 聚酰胺分薄层色谱中常用的是聚己内酰胺 聚酰胺分 子内有许多酰胺基 酰胺基中的碳基与酚类 子内有许多酰胺基 酰胺基中的碳基与酚类 黄酮类 酸类中的羟基或羧基形成氢键 酰黄酮类 酸类中的羟基或羧基形成氢键 酰 胺基中的氨基与酮类或硝基化合物形成氢键 胺基中的氨基与酮类或硝基化合物形成氢键 同时由于所分离混合物结构不同 含羟基等同时由于所分离混合物结构不同 含羟基等 活性基团的数目和位置不同 因而形成氢键活性基团的数目和位置不同 因而形成氢键 的能力不同 所以对这些化合物的吸附能力的能力不同 所以对这些化合物的吸附能力 不同而得到分离 不同而得到分离 PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 5 葡葡聚聚糖凝糖凝胶胶 分子筛的原理分子筛的原理 1 亲亲水水性性葡葡聚聚糖凝糖凝胶胶 葡聚糖凝胶是由一定分子量的葡聚糖葡聚糖凝胶是由一定分子量的葡聚糖 右旋糖右旋糖 苷 苷 dextran 悬浮于有机相中 加入交联剂使悬浮于有机相中 加入交联剂使 葡聚糖交联聚合而成 其商品名为葡聚糖交联聚合而成 其商品名为Sephadex 加入交联剂量不同可制成不同交联度的凝胶 加入交联剂量不同可制成不同交联度的凝胶 交联度越大 网状结构越紧密 吸水时膨胀体交联度越大 网状结构越紧密 吸水时膨胀体 积越小 积越小 用于薄层色谱的凝胶粒度要细 小于用于薄层色谱的凝胶粒度要细 小于40um 交交 联度要低 联度要低 G 50以下 以下 PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 2 亲亲酯酯性性萄萄聚聚糖凝糖凝胶胶 萄聚糖凝胶只能用于水溶性物质的分离鉴定 萄聚糖凝胶只能用于水溶性物质的分离鉴定 但在葡聚糖分子上引入有机基团 则可使之但在葡聚糖分子上引入有机基团 则可使之 成为成为亲亲脂脂性性葡葡聚聚糖凝糖凝胶胶 如在 如在G 25凝胶上凝胶上 引入羟丙基基团 与糖分子以醚键相连 使引入羟丙基基团 与糖分子以醚键相连 使 之成为既有亲水性又有亲脂性的之成为既有亲水性又有亲脂性的LH 20葡聚葡聚 糖凝胶 适用于有机物如黄酮 蒽醌 色素糖凝胶 适用于有机物如黄酮 蒽醌 色素 等成分的分离 等成分的分离 PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 6 离子交换离子交换剂剂 葡聚糖凝胶离子交换剂葡聚糖凝胶离子交换剂 在在 G 25或或G 50葡聚糖凝胶上引入葡聚糖凝胶上引入 羧甲基 磺乙基 磺丙基 二乙基氨羧甲基 磺乙基 磺丙基 二乙基氨 乙基及季铵乙基等而制成的既具凝胶乙基及季铵乙基等而制成的既具凝胶 的优点又具离子交换性质的载体 在的优点又具离子交换性质的载体 在 生化及天然化合物方面得到广泛应用 生化及天然化合物方面得到广泛应用 PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 7 硅藻土硅藻土 硅藻土商品名硅藻土商品名 celite 是高度多孔的 是高度多孔的 比表面积大的固体 本身具极弱的吸附比表面积大的固体 本身具极弱的吸附 力 常作为力 常作为分配色谱用的分配色谱用的载体载体 或以一 或以一 定比例加入硅胶等吸附剂中可以降低硅定比例加入硅胶等吸附剂中可以降低硅 胶的吸附力 而有利于某些化合物的分胶的吸附力 而有利于某些化合物的分 离 离 PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 二 二 粘粘合合剂与添剂与添加加剂剂 使薄层牢固地附着于支持体上需加合适的使薄层牢固地附着于支持体上需加合适的 粘合剂粘合剂 为特殊的分离与检出 有时要在固定相中为特殊的分离与检出 有时要在固定相中 加入某些添加剂加入某些添加剂 理想的粘合剂要求亲水性好 粘结力强 理想的粘合剂要求亲水性好 粘结力强 且具有化学惰性 且具有化学惰性 PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 1 煅石膏煅石膏 将石膏 将石膏 CaSO4 2H2O 在 在120 140 烤烤2 4小时 过小时 过200目筛 备用 目筛 备用 用煅石膏作粘合剂的用煅石膏作粘合剂的 优点优点 是能使用腐蚀性的显色剂 是能使用腐蚀性的显色剂 缺缺点点 薄层的硬度不够 且不利于无机物 薄层的硬度不够 且不利于无机物 的分离 的分离 PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 2 羧甲羧甲基基纤维素纤维素钠钠 CMC Na 先将羧甲基纤维素钠调成糊状 再加足先将羧甲基纤维素钠调成糊状 再加足 量水搅拌均匀 并加热煮沸使尽可能溶量水搅拌均匀 并加热煮沸使尽可能溶 解 放置澄清后 取上清液代替水与吸解 放置澄清后 取上清液代替水与吸 附剂搅匀涂布薄层 附剂搅匀涂布薄层 常用的浓度为常用的浓度为0 2 1 0 浓度越高浓度越高 薄层硬度越大 是常用的粘合剂 薄层硬度越大 是常用的粘合剂 缺点为 不能耐受有腐蚀性的显色剂 缺点为 不能耐受有腐蚀性的显色剂 PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 3 淀粉淀粉 将淀粉配成将淀粉配成5 的溶液的溶液 在在85 加热至有 加热至有 粘性粘性 加入适量吸附剂制成薄层加入适量吸附剂制成薄层 缺点为 不能耐受有腐蚀性的显色剂 4 预预制制板粘板粘合合剂剂 上述三种粘合剂均于实验室自制上述三种粘合剂均于实验室自制TLC时时 使用 使用 商品市售预制板粘合剂有 聚乙烯醇 商品市售预制板粘合剂有 聚乙烯醇 聚丙烯醇 聚丙烯酰胺 聚丙烯醇 聚丙烯酰胺 5 添添加加剂剂 荧光剂荧光剂 酸 碱或酸 碱或PH缓冲液等 缓冲液等 PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 三 薄层三 薄层板板的制备的制备 当前国外商品化的各种预制板均有市售 可满足当前国外商品化的各种预制板均有市售 可满足 各种需要 除个别特殊需要人工制板外 各种需要 除个别特殊需要人工制板外 预制板使用方便预制板使用方便 涂布均匀涂布均匀 薄层光滑及有很好的薄层光滑及有很好的 牢度牢度 预制板有玻璃板 塑料板或铝箔板 后两种预制板有玻璃板 塑料板或铝箔板 后两种 还有剪裁方便之优点 还有剪裁方便之优点 国国外外市售预制板较多 包括市售预制板较多 包括普普通通薄层薄层预预制制板板 硅 硅 胶 氧化铝 纤维素 硅藻土 聚酰胺 离子交胶 氧化铝 纤维素 硅藻土 聚酰胺 离子交 换纤维素 键合硅胶反相板 高效薄层预制板换纤维素 键合硅胶反相板 高效薄层预制板 键合硅胶预制板 手性预制板 等 规格众多 键合硅胶预制板 手性预制板 等 规格众多 尺寸不同 分离效果及重现性均较手工制板好 尺寸不同 分离效果及重现性均较手工制板好 国国内内预制板规格类型较少 进口又贵 所以主要预制板规格类型较少 进口又贵 所以主要 靠自己手工制作 靠自己手工制作 PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 1 载板载板的制备的制备 常用载板主要为 玻璃板 塑料板 金属铝箔常用载板主要为 玻璃板 塑料板 金属铝箔 载板必须是表面光滑 平整清洁载板必须是表面光滑 平整清洁 玻板大小视实验所需而定 玻板大小视实验所需而定 一般分析用 一般分析用 3 5cm 4 20cm 10 10cm 制备用 制备用 20 20cm 20 40cm PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 2 薄 薄板板涂铺涂铺方法方法 1 干法铺板 干法铺板 将吸附剂直接倒在板上一端 取一适当玻棒将吸附剂直接倒在板上一端 取一适当玻棒 两端包裹上适当厚度的橡皮膏或塑料管 视薄两端包裹上适当厚度的橡皮膏或塑料管 视薄 层厚度要求而定 层厚度要求而定 用力移动玻璃管 用力不可过猛或太快 也用力移动玻璃管 用力不可过猛或太快 也 不能中途停止 以免薄层厚薄不均 如此制成不能中途停止 以免薄层厚薄不均 如此制成 的薄板称为软板 的薄板称为软板 由于该板易吹散 现已比较少用 多用硬板 由于该板易吹散 现已比较少用 多用硬板 PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 2 湿法铺板 湿法铺板 一般都要加黏合剂 故称粘合薄层板 硬板 一般都要加黏合剂 故称粘合薄层板 硬板 常用两种硬板为 硅胶常用两种硬板为 硅胶G 硅胶 硅胶 CMC Na 硅胶硅胶G板铺制 板铺制 G的含量为的含量为10 13 制板时每 制板时每 份硅胶份硅胶G 水水2 3份 研成糊状 倒在板上份 研成糊状 倒在板上 铺布 铺布 硅胶硅胶CMC Na板铺制板铺制 硅胶硅胶H或硅胶或硅胶G CMC Na水溶液 水溶液 0 5 1 3 研成糊状 倒入 研成糊状 倒入 板上铺布 板上铺布 PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 0 5 CMC Na配制 取适量取适量CMC Na 蒸馏水加热煮沸 完全蒸馏水加热煮沸 完全 融解 放冷静置 铺板时取其上清液使用 融解 放冷静置 铺板时取其上清液使用 铺板时为了防止由于搅拌而带入气泡 常铺板时为了防止由于搅拌而带入气泡 常 常加入少量乙醇或丙酮或将吸附剂糊首先置常加入少量乙醇或丙酮或将吸附剂糊首先置 于真空干燥器中减压脱气 以免薄层表面出于真空干燥器中减压脱气 以免薄层表面出 现气泡 影响分离效果 现气泡 影响分离效果 其他一些加黏合剂铺层的处理方法见有关参其他一些加黏合剂铺层的处理方法见有关参 考书 考书 PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 湿湿法法铺铺板方法操作板方法操作 倾注法 取适量调好的吸附剂糊 倒在干净 倾注法 取适量调好的吸附剂糊 倒在干净 的薄板上用玻棒涂成一均匀薄层 再稍加震动 的薄板上用玻棒涂成一均匀薄层 再稍加震动 使薄层平整均匀 置水平台上晾干 严防灰尘使薄层平整均匀 置水平台上晾干 严防灰尘 沾污 再置烘箱中沾污 再置烘箱中110 活化一小时 置干燥 活化一小时 置干燥 器中备用 器中备用 本法均匀度较差 一致性差 适于小板的制备本法均匀度较差 一致性差 适于小板的制备 平铺法 在水平的较大玻璃上放上要铺的薄 平铺法 在水平的较大玻璃上放上要铺的薄 板 薄板两边加上做好的框边 倒上吸附剂糊 板 薄板两边加上做好的框边 倒上吸附剂糊 用一玻璃板或玻棒向一个方向均匀的将吸附剂用一玻璃板或玻棒向一个方向均匀的将吸附剂 刮平 然后轻轻震动均匀 置于平台上晾干 刮平 然后轻轻震动均匀 置于平台上晾干 活化备用 活化备用 适于大板的制备 适于大板的制备 PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 注意 注意 吸附剂在手工调制时 研磨的方向顺一个方 吸附剂在手工调制时 研磨的方向顺一个方 向 否则凝固不均匀 向 否则凝固不均匀 涂布速度要快 避免固定相过度凝固 使涂 涂布速度要快 避免固定相过度凝固 使涂 布困难布困难 涂布时速度保持一致 涂布时速度保持一致 涂布后的薄层应水平放置 室温晾干备用 涂布后的薄层应水平放置 室温晾干备用 避免因通风导致产生裂纹 避免灰尘沾污 避免因通风导致产生裂纹 避免灰尘沾污 活化时一般硅胶板 活化时一般硅胶板105 110 0 5 1小时 小时 有些薄层板不必活化 晾干即可用 如聚酰有些薄层板不必活化 晾干即可用 如聚酰 胺板 胺板 PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 四四 上上样样 上样是制备薄层分离的最关键步骤之一 上样是制备薄层分离的最关键步骤之一 1 溶解 上样前 先将样品溶于少量溶剂中 低溶解 上样前 先将样品溶于少量溶剂中 低 挥发性的溶剂可引起点样带扩散变宽 因此最挥发性的溶剂可引起点样带扩散变宽 因此最 好选择挥发性溶剂 二氯甲烷 乙酸乙酯 丙好选择挥发性溶剂 二氯甲烷 乙酸乙酯 丙 酮 醇 避免用水 酮 醇 避免用水 DMF DMSO等不易挥等不易挥 发易扩散的溶剂 发易扩散的溶剂 样品浓度应在样品浓度应在5 10 左右 定性 左右 定性0 01 1 范 范 围 浓度过高易造成超载 出现拖尾或重叠 围 浓度过高易造成超载 出现拖尾或重叠 影响分辨率和分离度 影响分辨率和分离度 PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 2 方法方法 手手工工点样点样 毛细管 分析 滴管或注射器 毛细管 分析 滴管或注射器 制备 制备 定性点样定性点样 一般点状点样 要求圆而小 一般点状点样 要求圆而小 点样时点样时 点样斑点直径最大不得超过点样斑点直径最大不得超过5mm 一 一 般以般以2 3mm较为合适 高效板斑点直径约为较为合适 高效板斑点直径约为 1 2mm 若需重复点样若需重复点样 应待上次点样的应待上次点样的溶溶剂剂 挥挥发发后后再重复点样 以防点样点过大再重复点样 以防点样点过大 造成拖尾 造成拖尾 扩散等现象 影响分离效果 扩散等现象 影响分离效果 PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 制备点样制备点样 一般带状 线状 点样 要一般带状 线状 点样 要 求窄又细求窄又细 以获得较好的分离效果 点样以获得较好的分离效果 点样 后必须将溶剂吹干再进行展开 但要避后必须将溶剂吹干再进行展开 但要避 免高温加热 使成分分解 免高温加热 使成分分解 对于制备薄层 对于制备薄层 若若点样点样带带较宽 可较宽 可先先用用 较大较大极极性性溶溶剂剂 将薄层 将薄层板展开板展开到到点样点样带带 上上端端2cm处处 以以起起到到浓浓集作集作用 用 然然后后将将 薄薄板板干干燥燥后后 再再用用展开剂展开展开剂展开 PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 3 位置位置 经典薄层起始线距底边约经典薄层起始线距底边约1 1 5cm 高效板高效板1 cm 展距 前者为 展距 前者为10 15 cm 后者为后者为5 7 cm 点间距经典薄层 点间距经典薄层1 2 cm 高效板 高效板0 5 cm PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 4 上上样量样量 1 0mm厚的硅胶板或氧化铝板最多可上厚的硅胶板或氧化铝板最多可上 样样5mg cm 对对20 20cm板可最高分离板可最高分离 10 100mg样品 样品 如果吸附剂的厚度加倍 可多上样 切如果吸附剂的厚度加倍 可多上样 切 勿超载 出现拖尾或重叠 影响分辨率勿超载 出现拖尾或重叠 影响分辨率 和分离度 和分离度 PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 五五 展开剂选择展开剂选择 PTLC所用展开剂的条件由分析型所用展开剂的条件由分析型TLC预试来确定 由预试来确定 由 于两者所用吸附剂的颗粒大小相同 所以分析型于两者所用吸附剂的颗粒大小相同 所以分析型TLC 展开剂可直接用于展开剂可直接用于PTLC 薄层色谱条件是依据薄层色谱条件是依据被被分离分离组组分的性分的性质 质 溶溶解解度度 酸酸 碱碱性 性 极极性性 吸附吸附剂 剂 活活性性 以以及及展开剂展开剂极极性性三个因三个因 素决定的 素决定的 在上述三个因素中 被分离物质是固定的 吸附剂常在上述三个因素中 被分离物质是固定的 吸附剂常 用的种类也不多 而展开剂种类则是千变万化 不仅用的种类也不多 而展开剂种类则是千变万化 不仅 可以应用不同极性的单一溶剂作为展开剂 更多的是可以应用不同极性的单一溶剂作为展开剂 更多的是 应用不同极性的混合溶剂 所以对于特定物质的分离 应用不同极性的混合溶剂 所以对于特定物质的分离 展开剂对分离起决定作用 展开剂对分离起决定作用 PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 1 溶溶剂强剂强度度 是指单一溶剂或混和溶剂洗脱某 种溶质的能力 在正相色谱中 它随极性增大 而增大 极性小的溶剂 对极性小的组分溶解强 在 TLC中能较快的向前迁移 与极性大的组分分 离 极性小组分的Rf比极性大组分的大 极性大的溶剂 对极性大的组分溶解强 较 快向前迁移 而与极性小的组分分离 极性大 组分的Rf比极性小组分的大 PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 在实际操作中 一般按极性顺序选单一溶剂展在实际操作中 一般按极性顺序选单一溶剂展 开 看其开 看其Rf及分离效果 另加入第二种 第三及分离效果 另加入第二种 第三 种溶剂来调节之 种溶剂来调节之 Rf最佳最佳范围范围为为0 3 0 5 可可使使用用范围范围为为0 2 0 8 PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 对极性化合物 如果对极性化合物 如果Rf太小 可加极性较大溶剂 太小 可加极性较大溶剂 如果太大 可加非极性溶剂 如果太大 可加非极性溶剂 改善改善拖尾拖尾现现象象措施措施 当样品中含有羰基时 在非极性溶剂中加入少量丙酮 当样品中含有羰基时 在非极性溶剂中加入少量丙酮 当样品中含有羟基时 于非极性溶剂中加入少量甲醇 当样品中含有羟基时 于非极性溶剂中加入少量甲醇 乙醇等 乙醇等 当含有羧基酸性样品时 可加入少量的甲酸 乙酸 当含有羧基酸性样品时 可加入少量的甲酸 乙酸 当含有氨基的碱性样品时 可加入少量六氢吡啶 二乙当含有氨基的碱性样品时 可加入少量六氢吡啶 二乙 胺 氨水等 胺 氨水等 可改善拖尾的出现 提高碱性或酸性化合物的分离效果 可改善拖尾的出现 提高碱性或酸性化合物的分离效果 总总之之 加 加入入的的溶溶剂剂应应与被测与被测物的物的官官能能团团相相似似 PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 下列是几种常用的两相溶剂系统 不同比例 下列是几种常用的两相溶剂系统 不同比例 正己烷 乙酸乙酯环己烷 乙酸乙酯正己烷 乙酸乙酯环己烷 乙酸乙酯 正己烷 丙酮正己烷 丙酮石油醚 乙酸乙酯石油醚 乙酸乙酯 氯仿 甲醇氯仿 甲醇丙酮 甲醇丙酮 甲醇 石油醚 苯 甲苯 石油醚 苯 甲苯 正己烷 苯 甲苯 正己烷 苯 甲苯 PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 聚酰胺聚酰胺薄层薄层溶溶剂剂洗洗脱顺脱顺序序 聚酰胺聚酰胺薄层薄层单单一一溶溶剂剂洗洗脱脱能能力力的的顺顺序序 在聚酰胺薄层上的分离是由于氢键的形成能在聚酰胺薄层上的分离是由于氢键的形成能 力 这决定于化合物本身及展开剂的极性 力 这决定于化合物本身及展开剂的极性 在水中形成氢键的能力最强 在有机溶剂中在水中形成氢键的能力最强 在有机溶剂中 形成氢键能力较弱 在碱性溶液中形成氢键形成氢键能力较弱 在碱性溶液中形成氢键 能力最弱 因此在聚酸胺薄层上单一溶剂洗能力最弱 因此在聚酸胺薄层上单一溶剂洗 脱能力的顺序是 脱能力的顺序是 水水 乙乙醇醇 甲甲醇醇 丙酮丙酮 稀 稀氢氧氢氧化化铵铵 钠钠 溶溶液液 甲甲酸胺酸胺 二二甲甲基基甲甲酸胺酸胺 PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 常常用的用的多多元元展开剂有展开剂有 水水一一乙乙醇醇 50 50 水水一一甲甲醇醇 50 50 水水一一丁丁酮酮一一甲甲醇醇 40 30 20 水水一一乙乙醇醇一一丁丁酮酮一一乙酰乙酰丙酮丙酮 15 15 15 5 水水一一乙乙醇醇一一乙酸乙酸一二一二甲甲基基甲甲酰胺酰胺 30 20 10 5 苯苯一一甲甲醇醇一一丁丁酮酮 60 20 20 等等 PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 2 选择展开剂选择展开剂的的方法方法 三三角角形形法法 点点滴滴实验法实验法 Camag Vario Ks展开室法展开室法 PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 三三角角形形法法 按照展开剂 固定相及被分离物按照展开剂 固定相及被分离物 质三者间相互影响质三者间相互影响 设计了三因素综合帮助选择设计了三因素综合帮助选择 展开剂的极性和固定相的活度 展开剂的极性和固定相的活度 图 图 a 适于吸附薄层 适于吸附薄层 图图 b 适于分配薄层适于分配薄层 PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 点点滴滴实验法实验法 将要被分离的化合物溶液间隔的点于薄层板上将要被分离的化合物溶液间隔的点于薄层板上 待溶剂挥发干后待溶剂挥发干后 用不同的展开剂通过毛细管点用不同的展开剂通过毛细管点 到各样品点上到各样品点上 借毛细管作用借毛细管作用 展开剂从圆心向展开剂从圆心向 外扩展外扩展 这样就出现了不同圆心的色谱这样就出现了不同圆心的色谱 经过比经过比 较就可以发现最合适的展开剂及吸附剂较就可以发现最合适的展开剂及吸附剂 PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 下图是证明苯是最合适的展开剂 PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 Camag Vario Ks展开室法展开室法 Camag Vario Ks展开室至少有展开室至少有5个溶剂个溶剂 室室 可以在同一薄层板上同时筛选至少可以在同一薄层板上同时筛选至少5 种展开剂种展开剂 用此装置可以很快找到最合适的展开剂用此装置可以很快找到最合适的展开剂 及最佳展开条件 及最佳展开条件 PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 六六 薄层 薄层展开展开 薄层展开要在密闭的器皿中进行 如广口薄层展开要在密闭的器皿中进行 如广口 瓶或其它带有盖子的玻璃瓶都可作为展开瓶或其它带有盖子的玻璃瓶都可作为展开 器 器 加入展开剂的高度为加入展开剂的高度为0 5 1 0cm PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 1 预预饱饱和和 可在展开器中放一张滤纸 以使器皿内的蒸气可在展开器中放一张滤纸 以使器皿内的蒸气 很快地达到气液平衡 待滤纸被展开剂饱和以很快地达到气液平衡 待滤纸被展开剂饱和以 后 把点有样点的板后 把点有样点的板 样点一端向下样点一端向下 放入展开放入展开 器内 器内 也可使用薄层也可使用薄层双槽双槽展开室展开室 加入展开剂于其中 加入展开剂于其中 一槽 把点有样品的板放入无展开剂的另一槽一槽 把点有样品的板放入无展开剂的另一槽 内 内 若使用平底展开室 可将展开室一端垫高 将若使用平底展开室 可将展开室一端垫高 将 薄板置于展开室垫高一端 盖好盖子 使薄板薄板置于展开室垫高一端 盖好盖子 使薄板 饱和之 时间自行掌握 半小时左右 饱和之 时间自行掌握 半小时左右 PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 2 展开展开 视薄层形状而定 视薄层形状而定 硬板常用上行展开 环形展开 双向张常用上行展开 环形展开 双向张 开 下行展开 多次展开开 下行展开 多次展开 软软板板常用近水平展开常用近水平展开 PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 采采用用多多次次展开展开的方法可以提高TLC的分离效果 在一次展开结束后 先将薄板干燥 再放入在一次展开结束后 先将薄板干燥 再放入 容器中展开 容器中展开 多次展开可分为 多次展开可分为 单单向向多多次次展开展开 同一种展开剂 以增加展开距离 同一种展开剂 以增加展开距离 梯梯度度展开展开 不同种展开剂 以增加分离度 不同种展开剂 以增加分离度 PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 上上行行展开实验室中展开实验室中应用较应用较多多 展开时薄层板并与器皿成一定的角度 展开时薄层板并与器皿成一定的角度 同时使展开剂的水平线应在样点以下 同时使展开剂的水平线应在样点以下 盖上盖子 盖上盖子 当展开剂上升到离板的顶部约当展开剂上升到离板的顶部约 lcm处处 时取出 并立即用铅笔标出展开剂的时取出 并立即用铅笔标出展开剂的 前沿位置 待展开剂干燥后 观察斑前沿位置 待展开剂干燥后 观察斑 点的位置 点的位置 PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 七七 检测方法检测方法 1 光学检测 光学检测 2 蒸汽检出蒸汽检出 3 显色法显色法 4 加入参照物法 加入参照物法 PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 1 光光学学检测检测 可见光 一些化合物如染料 蒽醌等对可见光一些化合物如染料 蒽醌等对可见光 有吸收 因此在自然光下呈现不同颜色的斑点 有吸收 因此在自然光下呈现不同颜色的斑点 UV法法 多数化合物在可见光下不能显色 但可 多数化合物在可见光下不能显色 但可 吸收吸收 UV光 在紫外灯下显示出不同颜色的斑点 光 在紫外灯下显示出不同颜色的斑点 荧光荧光法法 些化合物吸收些化合物吸收 UV光后 激发出荧光 光后 激发出荧光 在色谱上呈现不同颜色的荧光斑点 在色谱上呈现不同颜色的荧光斑点 荧光荧光萃灭萃灭法法 无 无UV 可见光和荧光者 可将样 可见光和荧光者 可将样 品点于含有无机荧光剂的薄层板上 展开后挥品点于含有无机荧光剂的薄层板上 展开后挥 去溶剂 置去溶剂 置UV灯下观察 被分离的化合物在有灯下观察 被分离的化合物在有 色的荧光的背景下 呈现暗的斑点 色的荧光的背景下 呈现暗的斑点 PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 如如GF254与与HF254板在黄绿荧光背景下板在黄绿荧光背景下 出现黑斑 这是由于这些化合物减弱了出现黑斑 这是由于这些化合物减弱了 吸附剂中荧光物质的吸附剂中荧光物质的UV吸收 引起了吸收 引起了荧荧 光光萃灭萃灭 也可以将荧光素喷于无荧光剂的薄层板也可以将荧光素喷于无荧光剂的薄层板 上 获得与荧光板相同的效果 上 获得与荧光板相同的效果 PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 2 蒸蒸汽汽检检出出 利用一些物质的蒸气与样品作用 利用一些物质的蒸气与样品作用 产生不同颜色或产生荧光 产生不同颜色或产生荧光 I2熏熏色色是实验室常用方法 展开后的薄层板挥是实验室常用方法 展开后的薄层板挥 去溶剂 放在盛有去溶剂 放在盛有I2结晶的密闭容器中 大多结晶的密闭容器中 大多 数化合物吸附数化合物吸附I2蒸气后 呈现不同程度的黄褐蒸气后 呈现不同程度的黄褐 色色斑 标出斑点位置 借此检出所分离的化色色斑 标出斑点位置 借此检出所分离的化 合物位置 合物位置 当薄层离开当薄层离开I2蒸气后 黄褐色色斑逐渐消退 蒸气后 黄褐色色斑逐渐消退 这是可逆反应 不影响产物性质 这是可逆反应 不影响产物性质 若若不不退退色 为不可色 为不可逆逆反反应 应 只只可用于定性 对可用于定性 对 化合物制备不可化合物制备不可取取 PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 3 显显色色法法 若化合物对若化合物对UV 可见和荧光均不能 可见和荧光均不能 显示斑点 可加入显色剂显色 显示斑点 可加入显色剂显色 常用喷撒法 浸渍法 展层显色法等 常用喷撒法 浸渍法 展层显色法等 显色法主要用于定性分析定位 制备型较少显色法主要用于定性分析定位 制备型较少 应用 应用 显色剂分两大类 一类为检查一般有机化合显色剂分两大类 一类为检查一般有机化合 物的通用试剂 另一类为根据化合物或特殊物的通用试剂 另一类为根据化合物或特殊 官能团设计的专属性显色剂 种类繁多 官能团设计的专属性显色剂 种类繁多 PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 实验室经常实验室经常备用备用两种两种显显色色剂剂 氧氧化性化性试试剂剂 高锰酸钾溶液 高锰酸钾9克 氢氧化钠0 75克 碳酸氢钠60克 水900毫升 还还原性原性试试剂剂 茴香醛溶液 674毫升乙醇 18 5毫升茴香醛 25毫升浓硫酸 PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 各种显色剂及其配制方法各种显色剂及其配制方法 碘 不饱和或者芳香族化合物碘 不饱和或者芳香族化合物 配制方法 在配制方法 在100ml广口瓶中 放入一张滤纸 少许碘粒 或广口瓶中 放入一张滤纸 少许碘粒 或 者在瓶中 加入者在瓶中 加入10g碘粒 碘粒 30g硅胶硅胶 茚三酮 氨基酸茚三酮 氨基酸 配制方法 配制方法 1 5g 茚三酮茚三酮 100mL of 正丁醇正丁醇 3 0mL 醋酸醋酸 磷钼酸磷钼酸 PMA 广谱 广谱 配制方法 配制方法 10 g of 磷钼酸磷钼酸 100 mL 乙醇乙醇 PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 4 加 加入入参参照照物物法法 对于对于PTLC法 若对法 若对UV 可见和荧光均 可见和荧光均 不能显示斑点 因不能碘薰色 不能加不能显示斑点 因不能碘薰色 不能加 显色剂等 可利用参照物的显色剂等 可利用参照物的Rf值 确定值 确定 被分离化合物的位置 被分离化合物的位置 PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 化合物的检出除用于鉴定 分离外 可用于化合物的检出除用于鉴定 分离外 可用于 监测有机反应进行的的情况 以寻找化学反应监测有机反应进行的的情况 以寻找化学反应 的最佳反应时间和达到最高反应的收率的最佳反应时间和达到最高反应的收率 PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 八八 被被分离物分离物质质的的收集收集 在确定色带位置后 可用刮刀或用与真在确定色带位置后 可用刮刀或用与真 空收集器相连的管状刮离器 将色带吸空收集器相连的管状刮离器 将色带吸 附剂从板上刮下 附剂从板上刮下 后一种方法对易氧化的物质持续与空气后一种方法对易氧化的物质持续与空气 接触 慎用 接触 慎用 PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 将回收的吸附剂以极性较低的溶剂 使化合物将回收的吸附剂以极性较低的溶剂 使化合物 从中提取出来 从中提取出来 1克吸附剂约用克吸附剂约用5毫升溶剂 毫升溶剂 注意注意 化合物与吸附剂接触时间越长 被破坏可能性化合物与吸附剂接触时间越长 被破坏可能性 也越大 可先用也越大 可先用4型沙芯漏斗过滤洗脱液 然型沙芯漏斗过滤洗脱液 然 后用滤模 后用滤模 0 2 0 45um 过滤 过滤 甲醇可溶解硅胶及其中一些物质 所以不适用甲醇可溶解硅胶及其中一些物质 所以不适用 于作展开剂及从硅胶上洗脱被分离的化合物 于作展开剂及从硅胶上洗脱被分离的化合物 常用溶剂 丙酮 乙醇 氯仿等常用溶剂 丙酮 乙醇 氯仿等 PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 九九 PTLC分离化合物的纯化分离化合物的纯化 PTLC过程中 因吸附剂中含有黏合剂及过程中 因吸附剂中含有黏合剂及 荧光指示剂 在溶剂提取过程中 吸附剂荧光指示剂 在溶剂提取过程中 吸附剂 中杂质易被提取 洗脱液极性越大 提取中杂质易被提取 洗脱液极性越大 提取 的可能杂质越多 这些杂质往往无的可能杂质越多 这些杂质往往无UV吸收 吸收 TLC检测难以发现其存在 因此溶液蒸去检测难以发现其存在 因此溶液蒸去 后 往往要经重结晶处理或相应的手段进后 往往要经重结晶处理或相应的手段进 行再纯化 方可通过含量测定及光谱分析行再纯化 方可通过含量测定及光谱分析 要求 要求 PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 第第二二节节离心薄层色谱离心薄层色谱 Centifugal Liquid Chromatography 离心液相薄层是制备薄层的一种改进 因为经典 的制备型PTLC存在着许多缺陷 如 展开过程太长长 需要将被分开的化合物从薄层上刮下 提取出来 费费时时 提取过程易引入引入吸附吸附剂剂杂杂质质及残留物等 为克服这些缺点 人们发明了离心薄层色谱 PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 一 离心薄层色谱的技术原理一 离心薄层色谱的技术原理 是一种是一种强强制性制性流动流动相移相移动动方法 方法 主要是在经典的主要是在经典的PTLC基础上 即样品在固定相和基础上 即样品在固定相和 流动相间的吸附 分配作用的不同 再加上离心流动相间的吸附 分配作用的不同 再加上离心 力的作用 使流动相加速流动 使样品各组分之力的作用 使流动相加速流动 使样品各组分之 间原有的间原有的Rf差异加大 从而提高了分离效果 加差异加大 从而提高了分离效果 加 快了分离速度 快了分离速度 由于由于CLC仪器简单 操作简便 分离效果好等优仪器简单 操作简便 分离效果好等优 点 而广泛用于合成和天然产物的制备分离 点 而广泛用于合成和天然产物的制备分离 PDF 文件使用 pdfF