07第七章、酶的抑制作用及抑制.ppt

第七章 酶的抑制作用及抑制动力学 失活作用 通过变性作用引起酶活力下降或丧失抑制作用 改变必需基团性质 引起酶活力下降 丧失第一节抑制作用的类型 一 分类 一 不可逆抑制作用 抑制剂以很牢固的共价键与酶结合 不能用物理方法除去 抑制后酶活力不能恢复专一性的不可逆抑制剂 非专一性的不可逆抑制剂 二 可逆抑制作用 抑制剂以非共价键与酶结合阻遏酶的活性 可以用物理方法除去抑制剂后 酶活力能恢复 二 区别方法 一 物理方法 二 动力学方法 1 酶预先用抑制剂处理后测定酶活力变化情况 2 在测活系统中加入抑制剂 然后加入不同酶量 测定酶活力变化情况 第二节不可逆抑制作用一 非专一性的不可逆抑制作用 1 概念 2 非专一性的不可逆抑制剂 酰化试剂 酸酐 乙酰咪唑 硫代三氟乙酸乙酯 O 甲基异脲 NH2 NH CO RR CO X E OH E O CO R HX C6H5 OH C6H5 O CO R SH S CO R 烷化试剂 2 4 二硝基苯氟 碘代乙酸 碘代乙酰胺等 NH3 NH R SH S RR X E COOH E COOR HX S CH3 S CH3 R咪唑基NH 咪唑基N R 含有活泼双键试剂 N 乙基顺丁烯二酸抱亚胺 NEMI 丙烯腈等 亲电试剂 四硝基甲烷 TNM 氧化剂 H2O2 NBS等作用 SH Trp 吲哚基等 还原剂 ME DTT等 作用 S S 二 专一性不可逆抑制剂 一 Ks型不可逆抑制剂 1 概念2 抑制机理E I EI EIn判断Ks型抑制剂作用是否发生在活性部位方法 化学定量法 底物 竞争性抑制剂保护方法 酶先可逆失活 再研究KS型抑制情况 二 Kcat型不可逆抑制动力学概念 自杀性底物例如中E coli中 羟基葵酰硫酯脱水酶CH3 CH2 6 CH2 CH OH CO S RR CH2 CH2 NH CO CH3CH3 CH2 6 CH CH CO S R 反式双键 CH3 CH2 5 CH CH CH2 CO S R 顺式双键 Kcat型抑制剂 3 4 葵炔酰 N 乙酰半胱胺CH3 CH2 5 C C CH2 CO S RECH3 CH2 5HC C CH CO SRCH3 CH2 5HC C CH2 CO SR不可逆共价结合 第三节可逆抑制作用的动力学 可逆抑制作用 ReversibleInhibition1 概念2 类型 竞争性抑制 Comp CCompetitiveinhibition非竞争性抑制NonC NCNon Competitive反竞争性抑制UnC UCUn Competitive混合型抑制MTMixedTypeinhibition 一 竞争性抑制作用动力学模型图 竞争性抑制作用动力学方程推导 酶形式矢量图动力学项Ek 1k 3 k 3k2ESk1k 3 S EIk 1k3 I k2k3 I 动力学模型 动力学方程 式中Vm k2 E o不变Km为米氏常数Kmapp表观米氏常数 增大KI为抑制常数 双倒数作图法 抑制常数 KI的求法 以Kmapp对 I 作图 横轴截距为 KI抑制率i 1 vi vo 100 i 与 S 有关 S i 二 非竞争性抑制作用动力学 动力学模型 动力学方程 Vm k2 E oVmapp为表观最大速度 减小Km为米氏常数 不变 KI为抑制常数 双倒数作图法 抑制常数 KI的求法 以1 Vmapp对 I 作图 横轴截距为 KI抑制率 i 与 S 无关 三 反竞争性抑制作用动力学 动力学模型 动力学方程 Vmapp为表观最大速度 减小Kmapp为表观米氏常数 减小KI为抑制常数 双倒数作图法 抑制常数 KI的求法 以1 Vmapp对 I 作图 横轴截距为 KI抑制率 i 与 S 有关 S i 四 混合型抑制作用动力学 动力学模型 动力学方程 Vmapp为表观最大速度 减小Kmapp为表观米氏常数 当KIKISKm减小 双倒数作图法 抑制常数 KI KIS的求法 以斜率对 I 作图 横轴截距为 KI以1 Vmapp对 I 作图 横轴截距为 KIS 第四节四种可逆抑制作用的动力学比较 竞争性抑制 Comp C Competitiveinhibition非竞争性抑制NonC NC Non Competitive反竞争性抑制UnC UC Un Competitive混合型抑制MTMixedTypeinhibition C KIS UC KI NC