气质联用仪器培训教材.ppt

Perkinelmer气质联用仪用户常见问题解答 根据用户来电整理的内容那顺PE色谱产品技术支持北京 TurboMassPhysicalComponents GC 离子源 质量分析器 检测器 真空表 真空腔 分子涡轮泵 机械泵 数据系统 MSElectronics 传输线 1软件主界面部分 项目文件夹都有哪些东西 了解文件管理办法 Tutorial SVOA pro中包含六个文件夹 ACQUDB中有色谱方法文件 质谱方法文件 调谐文件 实际数据文件在DATA中 后缀为raw MethDB中有定量方法文件 SampleDB中有样品列表文件 说明 每个项目文件中都有六个文件夹 它们分别为ACQUDB MethDB Data CurveDB SampleDB PeakDB 我们创建的气相方法文件 mth 质谱方法 exp 调谐文件 ipr 校准文件 caj 保存在ACQDB中 原始数据到Data中 样品列表文件到SampleDB中 标准曲线文件在CurveDB中 峰鉴定文件在peakDB中 定量方法在METHDB中 这是样品列表界面 在这里可以输入文件名 质谱方法文件名 气相色谱方法文件名 GC 自动进样器小瓶位置 进样口位置等信息 建立新的项目文件 点击projectwizard 输入项目名称及保存盘符位置 建立一个新的项目文件时以前叫c turbomass aaa pro defult ipr会变成c turbomass bbb pro defult ipr所以温度等参数会发生变化 应加以注意 如何打开项目文件 我们的仪器有好几个人在用 如何将大家的分析内容分类 可以建立不同的样品列表samplelist可以建立不同的项目文件 片子中这样颜色的问题都有超级链接 在播放状态下单击就可 2质谱方法部分 质谱方法的组成 溶剂延迟 总离子扫描 选择离子扫描 溶剂延迟的设定 设定溶剂延迟的目的 在溶剂延迟期间灯须关闭 防止大量溶剂进入质谱时烧坏灯丝 MSScan 总离子扫描 及SIR 选择离子扫描 的设定过程见下面的内容 MSScan 总离子扫描 界面参数的设定 质量扫描范围 输入起始和结束的质量扫描范围 根据所分析化合物种类确定范围 质量范围超出603后需做高质量校准 扫描时间范围 可以跟气相色谱的运行时间一致 Scantime 扫描时间 每次全扫描需要的时间 本例中由140 1000的扫描需要0 2秒时间 缺省值 Inter scandelay 两次扫描间隔时间 缺省值0 1s 基本概念 色谱图和质谱图的区别 横坐标 时间轴纵坐标 吸收强度 横坐标 质核比纵坐标 吸收强度 色谱数据点的构成 每个点都是一次质谱扫描 本例中色谱峰大约0 5min的宽度 等于30秒 如果扫描时间0 2s 扫描间隔时间0 1s 则一次完整的扫描需要0 3s 所以30秒内可以形成100个点 至少要有10个点 才能准确定量 色谱图实际上由多个点构成 选择离子方法的设定 选择离子选取原则 1 在化合物质谱图中选择吸收较强的离子 2 选择那些不易受到其它杂质干扰的离子 Dwell时间的意义 监测某个离子一次需要的时间 Inter channeldelay 两次扫描之间的间隔时间 缺省值0 1s 最短不能小于0 015s 质谱方法中既有总离子扫描 又有选择离子的时候 怎么计算 总离子扫描时间0 2s 扫描间隔时间0 1s 则一次完整的扫描需要0 3s 选择离子弛域时间 dwelltime 0 1s 两次扫描之间的间隔时间0 02s 则一次完整的扫描需要0 12s 所以30秒内可以形成30秒 0 42秒 71个点 既是总离子色谱图上有71个点 选择离子色谱图上有71个点 所以选择离子越多 构成色谱图的点数越少 建立方法时要注意至少要有10个点 才能准确定量 dwell时间对于信噪比和采样点数的影响 Diffirentdwelltime 0 20 020 01 1ppm浓度甲苯 同一个样品采用不同的dwell时间分析 条件一样 Deffirentdwelltime 不同dwell时间的面积基本一致 但信噪比差别较大 不同dwell时间的信噪比的比较 0 2 0 02 0 01 s nratio采样点数多少的比较 色谱峰开始到结束 第一张图基线噪音明显 40point 170point 220point MS方法设定注意的问题 MS方法设定注意的问题 总离子扫描和选择离子同时存在的时候 要避免第一组SIR的开始时间与全扫描的开始时间相同 要在0 2分钟后开始 总离子排到后面的时候会出现的问题 在实时采集界面 首先出现的不是总离子色谱图 而是三个选择离子的加和色谱图 首先出现的 功能组一 不是总离子色谱图 而是三个选择离子的加和色谱图 想要显示总离子通道 在display中选择tic即可 3色谱方法部分 点击 大拇指 图标可以进入气相色谱的设定界面 依次可以设定进样方式 柱箱 进样口 载气 包括分流流量 检测器及仪器时间事件的设定界面 1 下面是进样方式的设定界面 可以设定手动和自动进样方式 进样可以采用手动及自动进样的模式 接有顶空等外围设备时需要选择manual 1 2 3 4 2 下面是柱箱和进样口的设定界面 柱箱程序中输入初始温度 升温速率 下一阶温度 保持时间等 进样口A为前侧进样口 进样口B为后侧进样口 气相色谱总运行时间由柱箱程序确定 2 柱温箱和进样口的设定 设定色谱柱的升温程序及汽化室的温度 1 3 2 3 4 总的程序时间为 2 3 下面为载气的设定窗口 载气有三种控制方式 分别为压力模式 流速模式和线速度模式 为了使载气压力和流速正确转换 在这里需要输入色谱柱的详细信息 分流控制可以选择流量设定模式及分流比模式 可以根据样品浓度选择分流量 1 2 3分流出口 毛细柱 3 载气流速及分流的设定界面 如果装有两个色谱柱则流速需要分别设定 4 下面是检测器的设定界面 当带有气相色谱检测器时在这里设定 如果只用质谱不用气相色谱检测器则在温度栏中输入零度 并使检测器气体均为零 下面是仪器时间事件的设定界面 在这里可以设定分流大小和阀的开关载气节约模式的设定 如果载气使用的气体是较昂贵的氦气 如何在参数设定中实现节气模式 比如在进样的时候采用的50ml的分流流量 在进样完成后可以将分流流量关闭或改小流量 进样的时候分流流量为50ml min 进样之后的某个时间可以将分流流量关闭 返回 重复性为什么不好 GC部分可能原因分析如下 采用自动进样器时 检查针是否堵塞 吸样时是否有气泡如果没有备用自动进样针 则可以手动进样测试计算5次以上进样的重复性 相对标准偏差RSD的计算请参考相关分析化学文献 检查进样口是否添装玻璃毛 对重复性影响很大 如果所分析的化合物性质不稳定则可以先分析一下甲苯等典型样品确认仪器是否存在问题 返回 4调谐部分 调谐界面 调谐的目的 获得好的灵敏度 获得好的质量分辨率 获得好的峰形 调谐界面调谐采用的标准物为全氟三丁胺 全氟三丁胺的结构式和质谱图如下 从中我们可以看出特征峰为69 131 219 502 覆盖了0 600的质量范围 并且各离子比例稳定 这是为什么采用全氟三丁胺 FC 43 作为标准物的原因 下面图中为四级杆质谱的结构图 化合物分子由毛细柱末端送入离子源 经70mv电子的轰击后碎裂 在推斥极 repelar 的作用下推入透镜组中进行加速 飞入四级杆中实现质量分离并被光电倍增管检测到 此界面各参数的意义如下 将标气打入到离子化室中 打开的一瞬间可以观察到真空度的下降 通过FC43的4个最具有代表性的峰来判断调谐的好坏 打开灯丝 通过观察灯丝电流判断灯丝的开闭 普通分析中采用 自动调谐就可以了 分析的化合物质量范围或灵敏度有特殊要求的时候采用手动调谐 自动调机的过程 调谐结束后要关闭标准气并泵出标准气 注意在开始分析样品之前要把泵出参比气的选项拿掉 在这里可以看到分子涡轮泵旋转是否正常 要注意 真空度没有达到一定程度之前分子涡轮泵是不工作的 注意事项 1 如果收集极脏了或者灯丝未准直 离子源电流会显示较高 同时 收集极电流会显示较低值 2 如果内离子源是洁净的 推斥极的读数会接近于零 3 当离子源变脏时 就需较高的推斥极电压来迫使离子推出离子源 当推斥极的读数较高时 内离子源应该予以清洗 5校准部分 校准界面 什么是校准 如同天平的校准一样 采用全氟三丁胺这样的化合物将仪器质量轴调校到准确的位置 就像把不太准的天平用已知重量的砝码调准一样 经过校准后质量峰峰尖应该对准下面的刻度 校准时的采集参数 一般按缺省参数进行 就可以 校准过程 校准文件的后缀为cal 要调用正确的校准文件 如果分析的化合物具有高质量数 则开始分析之前需要调用高质量校准文件 质量数在700以上化合物在分析的时候需要做高质量校准 采用的化合物不是全氟三丁胺 而是trizine 未校准时质量轴偏移 重新校准后保存校准文件 就可以将质量轴纠正过来 质量轴已经校准 一般情况下请勿将倍增器电压升到600 对光电倍增器的寿命由影响 6实际样品分析过程 真空度到什么程度才可以做样 不要在真空度大于1 10 4Torr时单击PressforOperate按钮打开灯丝 否则将烧毁灯丝 氮气和氦气的比例什么情况下算正常 空气背景的观察在什么情况下观察 氮气峰不到氦气峰的10 观察 请将进样口载气分流设为50ml min以防止空气和水扩散入隔垫造成泄漏假相 在开始分析样品之前 应该注意除了色谱方法和质谱方法之外应该选择正确的调谐方法 ipr文件 在开始分析样品之前 应该注意除了色谱方法和质谱方法之外选择正确的校准方法 cal文件 最后一次打开的校准文件 开始分析样品 下部状态栏可以看到溶剂延迟的提示 溶剂进入真空腔时真空度会明显下降 判断溶剂进入质谱的时间 溶剂通过后真空度马上恢复 观察正在采集的色谱图点击此处 点击实时采集可以看到色谱图的采集情况 随时间的变化 标尺会变化 色谱图上如何显示保留时间和面积 为什么提取离子色谱图分叉 色谱峰过载 提取离子强度达到X XXE9 TIC达到E10时说明过载 需要稀释样品 小技巧 如何查看历史数据的测试条件在色谱图界面点击打开后点击experiment 可以看到样品分析时的详细参数 7定量方法部分 定量方法Generalparamaters 一般参数 的输入界面如下 其中可以选择内外标法 曲线拟合类型 是否过零点等参数 Integrateparameter 积分参数 的输入界面如下 积分参数的调整简介 响应域值的限定下面图中相对高度10 以下的峰均不显示 Peak to peakamplitude2000和20000时的比较 识别色谱峰的数目会发生很大变化 Peakdetect peakseparation90 和10 的比较 如何手动积分 下面的界面中需要输入化合物的保留时间 化合物名称 内标物的选择 用于定量的离子 A 下面举例建立一个定量方法 将定量用色谱图界面和定量方法界面处于一个窗口中 点击Name后转到色谱图界面右键拖曳便可以将保留时间和定量曲线输入到定量界面中 使色谱图和定量方法窗口同时存在 这样可以方便快捷的输入定量信息 如果采用选择离子来定量 则在TIC界面 选择用于定量的选择离子 使色谱图显示 例如m z799 使总离子和选择离子色谱图放到一块 右键拖拉定量的色谱通道 799 40 就可以将保留时间和定量离子自动输入 在如下界面给化合物命名 选择浓度输入列 保留时间窗等 现在就可以另存定量方法了 123 Mdb 存到当前项目文件的MethDB文件夹中就可以了 B 下面举例说明如何建立标准曲线 在样品列表中涂黑3个浓度点的标样文件 注意将样品类型选为Standard并输入相应浓度 点击quantify下面的process 选择前面的两项 积分样品 形成校准曲线 在形成标准曲线时不选择QuantifySamples 在这里选择定量用的方法和定量用的曲线 在Quantify界面中就可以看到标准曲线了 在Display中选择Curve就可 如果为单点校准曲线则需要选择过零点 在display中选择要显示的内容 曲线curve和定量信息summarywindow 以下为定量曲线及曲线相关信息 点击 键 我们可以依次看到不同化合物的定量曲线 C 在标准曲线形成后我们就可以定量未知化合物浓度了 涂黑要定量的样品行 并在样品类型中选择Analyte就可以开始定量了 选择积分样品和定量样品选项在定量未知样品时在下面的图中选择QuantifySample 不选择CalibrateStandards 选择正确的定量方法和定量曲线就可以定量了 在Quantify界面的display中选择showsummarywindow就可以显示未知化合物的积分面积及含量了 在conc中可以看到计算结果10 37 如何进行单点外标法 链接用文件 在这个文件夹中 屏幕动画 单点 平均响应因子法 单点 平均响应因子法 html 8如何进行普库搜索 扣除背景 如果想要观察8 23min化合物的质谱图 就需要局部放大 点击背景扣除 需要输入信号和噪音的区段 实际为扫描区段 右键选择信号区段 右键选择噪音区段 点击ok就会进行扣除计算 958到964的质谱图平均 样品 后减掉931 935的质谱图 背景 之后点击检索即可 为什么普库搜索匹配率不好 质量偏移 进行质量校准调机不够理想 重新进行调机谱库搜索条件设定不合适 重新设定 9维护信息 如何更换灯丝 如果肉眼不容易确定灯丝是否已经熔断 可以采用万用电表的电阻档测量 如下 应该都能听到电路通路的鸣叫 卸掉真空 拿出EI插拔源 正确的方向 采用随机专用的内六角扳手旋松灯丝的铜脚 将铜脚上到新的灯丝上 方向要对 10附加内容手动调谐的几个内容 改变质量分辨率对峰形的影响 高质量分辨率14 1时 改变质量分辨率对峰形的影响 高质量分辨率10时 质量分辨率变差 Ionenergyramp3 0时 高质量端灵敏度提高 分辨率下降 12附加内容如何更换气质联机真空油 什么时候换油 油的颜色变深 机械泵的声音变大 换油时仪器要卸掉真空 在这里观察油位 拧开此处 放掉旧油 需要将机械泵垫高 拧开此处 倒入新油 要用专用EDWARD真空油 13安装色谱柱 长度要正确 色谱柱断到源中时 应如何处理 14有关关机 注意 在源温和传输线温度到达100度以下 再卸真空 否则会使真空腔氧化 源温和传输线温度下降较慢 要留有充分的时间 正确的开机关机程序 检查仪器的硬件是否全部联好 确认He钢瓶的不锈钢供气管道无泄露后 将He钢瓶上的主阀开足 再调节输出减压阀上有70psig 约0 5MPa He供气压力 ppc的配置 按此顺序即计算机 打印机 GC和TurboMass打开其电源开关 待GC自检程序结束 进入Ready状态后 再使计算机进入TurboMass主页 在TurboMass主页上 用鼠标按动 图标 进入Tune页面 在Tune页面上 选择Other中下拉式菜单的pump项启动抽真空的软件 同时可观察和听到前级泵与涡轮分子泵的启动情况和正常的运转声响 大约需要3分钟就能使涡轮分子泵达到全速的80 此时所连接的继电器打开 就能正常操作质谱 按动真空规图标 从Pirani规上应见到从FAIL到OFF 并在30秒钟内开始有读数 注意 如果在3分钟后Pirani规还没有读数 整个系统没有启动 表明系统有严重漏气 应立即关闭整个抽真空的软件 以避免涡轮分子泵出现故障 通常在2分钟之内