球菌ppt课件

第六章革兰阳性球菌 1 第一节葡萄球菌属Staphylococcus 2 一 分类 根据DNA相关程度35个种 17个亚种根据是否产生凝固酶凝固酶阴性和凝固酶阳性葡萄球菌按噬菌体分型金黄色葡萄球菌分5群26型 3 二 临床意义 一 凝固酶阳性 金黄色葡萄球菌化脓性炎症局部皮肤 疖 痈 毛囊炎 伤口化脓等脏器 心内膜炎 脑膜炎全身 败血症 脓毒血症 4 毒素性疾病食物中毒烫伤样皮肤综合征 SSSS 毒性休克综合征 TSS 葡萄球菌性肠炎菌群失调症 5 二 凝固酶阴性葡萄球菌 CoagulasenegativestaphylococcusCNS 常见细菌表皮葡萄球菌 腐生葡萄球菌所致疾病菌血症或败血症尿路感染修复术或导管引起的感染创伤感染 6 三 生物学特性 一 形态与染色球形 直径约为0 5 1 5 m 无鞭毛 不形成芽胞 某些菌株形成荚膜 7 二 培养特性 1 需氧或兼性厌氧 营养要求不高普通琼脂平板 光滑 湿润 不透明 突起 边缘整齐的菌落可产生不同颜色脂溶性色素 金黄色 白色 柠檬色血平板 大多数有溶血环液体培养基 混浊生长2 致病菌株耐盐性强选择培养基 高盐琼脂平板 10 15 NaCl 8 三 生化反应生化活性强 能分解多种糖类 蛋白质 氨基酸 触酶阳性 四 抗原构造SPA 葡萄球菌A蛋白 绝大多数金黄色葡萄球菌细胞壁的一种表面蛋白 可与IgG分子的Fc段发生非特异性结合而不影响Fab段 可用于抗原检测 协同凝集试验 9 协同凝集试验 含A蛋白的金葡菌结合IgG的金葡菌 IgG Ag 10 五 对理化因素的抵抗力抵抗力最强的无芽孢细菌易产生耐药性DNAG Cmol 30 39 11 六 产生多种侵袭性酶和毒素 致病物质凝固酶 coagulase 耐热核酸酶 heat stablenuclease 葡萄球菌溶血素 staphylolysin Beta 肠毒素 enterotoxin 中毒性休克综合征毒素I TSST 1 杀白细胞素 leukocidin 剥脱性毒素 epidermolytictoxin exfoliationtoxin 12 凝固酶有2种结合凝固酶 聚集因子 结合在菌体表面的凝固酶 是纤维蛋白原受体 能与血浆中的纤维蛋白原交联使菌体凝集 游离凝固酶 分泌到菌体外的蛋白质 可被人或兔血浆中的协同因子激活 成为凝血酶样物质 从而使液态的纤维蛋白原变成固态的纤维蛋白 导致血浆凝固 13 耐甲氧西林葡萄球菌 MRS 对头孢菌素类固有性耐药 青霉素 头孢菌素 碳青霉烯类和 内酰胺药 内酰胺酶抑制剂类抗生素同时对氨基糖苷类 大环内酯类和四环素类抗生素也耐药 14 四 微生物学检验 一 检验程序 二 标本采集 三 标本直接检查无菌部位直接涂片革兰染色 四 分离培养与鉴定血平板 脓汁 分泌物 脑脊液高盐甘露醇平板 粪便 呕吐物 淡黄色菌落 增菌培养基血液 肉汤 1 10 15 细菌鉴定方法 1 菌落性状血平板孵育2 4天 1 金葡 6 8mm 光滑 凸起 半透明金黄色或橙色色素 2 表葡 5 6mm 白色色素 3 腐生 5 8mm 光滑 凸起 不透明白色或柠檬样色素革兰染色 革兰阳性球菌 16 2 凝固酶试验 1 玻片凝固酶试验 结合凝固酶注意事项1 不能用高盐琼脂上的菌落2 10s内观察结果3 必须制备浓厚的均匀菌悬液4 加血浆后不要剧烈混搅5 血浆最好用EDTA抗凝的兔血浆 17 有凝块 均匀混浊 血浆 生理盐水 血浆凝固酶试验 玻片法 18 2 试管凝固酶试验 游离凝固酶 金标准 游离凝固酶协同因子纤维蛋白原纤维蛋白血浆凝固注意 1 孵育时间不能过长2 血浆必须无菌 19 阳性反应 阴性反应 不凝固 少量 零散凝固 明显的块状凝固 巨大块凝固 完全凝固 倒置不流动 血浆凝固酶试验 试管法 20 金黄色葡萄球菌血浆凝固酶实验 21 3 耐热核酸酶试验方法 单向琼脂扩散法结果 出现粉红色环为阳性阳性菌 金葡 施氏 中间 猪葡4 磷酸酶试验方法 点种细菌于含硝基酚磷酸盐培养基上结果 菌落周围出现黄色阳性菌 表葡 金葡 施氏 中间 猪葡 22 5 吡咯烷酮芳基酰胺酶 PYR 试验方法 将孵育24h斜面培养物接种在含吡咯烷酮 萘基酰胺肉汤中 35 孵育2h结果 加入试剂2分钟内呈现深紫红色为阳性阳性菌 溶血 里昂 施氏和中间葡萄球菌6 肠毒素测定标本 呕吐物 粪便 食物方法 动物试验 幼猫试验抗原抗体反应 ELISA法 23 各种API条和配套试剂 24 三种葡萄球菌的比较 性状金葡表葡腐生色素金黄色白色白或柠血浆凝固酶 溶血素 耐热核酸酶 A蛋白 分解甘露醇 新生霉素敏感 致病性强弱弱 25 26 结果评价和报告 1 金葡系毒力很强的致病菌 无论从何种标本分离出均应鉴定 进行药敏试验 及时报告临床 2 表葡和腐生葡萄球菌 人工置入器械 如各种导管 和无菌部位检出有意义 3 尿液中G 杆菌菌落计数 105 ml为阳性葡萄球菌菌落计数 103 104为阳性 27 4 凝固酶阴性葡萄球菌与微球菌属细菌鉴别 呋喃唑酮纸片 100 g 片 杆菌肽纸片 0 04u 片 作药敏试验氧化酶试验结果微球菌对杆菌肽敏感而对呋喃唑酮耐药 氧化酶试验阳性 与葡萄球菌属正好相反 28 G 球菌触酶 链球菌属 29 第二节链球菌属 Streptococcus 一 分类1 根据抗原结构分类多糖抗原的不同 A B C D 群对人致病主要为A B C D F G群2 根据溶血现象分类 溶血甲型溶血性链球菌 溶血乙型溶血性链球菌 溶血丙型溶血性链球菌 30 传统分类方法 一 A C G群 溶血性链球菌1 大菌落 菌落直径 0 5mm A群 化脓性链球菌C群 马链球菌G群 似马链球菌2 小菌落 菌落直径 0 5mm 米勒链球菌 31 二 B群 溶血性链球菌无乳链球菌 三 溶血性链球菌肺炎链球菌和草绿色链球菌 未分群 四 不溶血D群链球菌牛链球菌 32 抗原群与溶血性间的对应关系 33 二 临床意义 一 化脓性链球菌1 致病物质链球菌溶素 streptolysin SLO SLS致热外毒素 SPE M蛋白其他 透明质酸酶 链激酶 链道酶链激酶 SK 溶纤维蛋白酶纤维蛋白酶原纤维蛋白酶 34 2 所致疾病化脓性感染淋巴管炎 蜂窝织炎 扁桃体炎 咽炎等中毒性疾病猩红热超敏反应性疾病风湿热 急性肾小球肾炎3 免疫性猩红热患者可建立牢固的同型免疫型别间无交叉免疫 35 二 无乳链球菌暴发性败血症 1周内婴儿化脓性脑膜炎 1周 3个月 三 C G群 溶血性链球菌同化脓性链球菌 四 米勒链球菌人体正常菌群 引起内源性感染 四 肺炎链球菌大叶性肺炎 支气管炎 五 草绿色链球菌亚急性细菌性心内膜炎的常见病原菌龋齿 变异链球菌 36 三 生物学特征 1 形态染色G 球形或椭圆形 0 5 2 0 m链状排列 无芽胞 鞭毛2 培养特性营养要求高 血液或血清培养兼性厌氧血平板 可出现不同溶血环液体培养为沉淀生长肺炎链球菌产生自溶酶 37 38 39 3 生化反应分解多种糖类 产酸不产气 蛋白质 氨基酸触酶阴性 区别于葡萄球菌 不分解菊糖 不被胆汁溶解 鉴别草绿色链球菌与肺炎链球菌 40 4 抗原构造复杂主要有三种抗原蛋白质抗原 表面抗原 型特异性抗原有M T R S四种M抗原 A群的主要毒力因子多糖抗原 C抗原 群特异性抗原核蛋白抗原 P抗原 无特异性5 抵抗力对干燥和消毒剂敏感 除肺炎链球菌外 较少引起细菌耐药性 41 四 微生物检验 一 检验程序 二 标本采集咽拭子 痰液 脓汁和血液等标本B群溶血链球菌 取35 37周妊娠妇女的阴道分泌物 置选择性培养肉汤中孵育18 24h 再作分离培养 42 三 标本直接检查 1 直接显微镜检查直接涂片 染色镜检肺炎链球菌 荚膜肿胀试验2 直接检测抗原凝集试验酶联免疫吸附试验 43 四 分离培养与鉴定 1 血平板 羊血琼脂平板 观察溶血特征2 肉汤培养基 增菌3 初次分离需5 CO24 菌落特征A C G群 溶血 菌落直径 0 5mm米勒链球菌 菌落直径 0 5mmB群链球菌 菌落较大 有或无溶血环 溶血菌落 菌落呈草绿色 44 链球菌属细菌鉴定的方法 1 溶血链球菌鉴定 1 Lancefield群特异性抗原鉴定 B群 无乳链球菌F群 米勒链球菌A C G群 不能确定种类 2 PYR试验 化脓性链球菌产生的吡咯烷酮芳基酰胺酶水解吡咯烷酮B 萘基酰胺 加入N N 二甲氧基肉桂醛试剂后产生桃红色 45 3 杆菌肽敏感试验 可作为筛选试验 0 04U杆菌肽药敏纸片贴在待测菌的血平板上 35 孵育过夜后 观察抑菌环 化脓性链球菌敏感为阳性 鉴定A群链球菌 4 VP试验 挑取平板上孵育过夜菌落置于2mlVP肉汤中 孵育6h后加入VP试剂 摇匀30秒 出现桃红色者为阳性 鉴定米勒链球菌 46 5 CAMP试验 无乳链球菌能产生CAMP因子 有促进金葡菌溶血能力 鉴定B群链球菌 47 2 非 溶血链球菌鉴定草绿色链球菌 肺炎链球菌 牛链球菌 1 optochin试验 含5 gOptochin纸片贴于涂布有待测菌的平板上 35 孵育过夜 抑菌圈 14mm即为敏感 应用 鉴定草绿色链球菌和肺炎链球菌结果 肺炎链球菌敏感 48 2 胆汁溶菌试验 应用 鉴定草绿色链球菌和肺炎链球菌结果 肺炎链球菌阳性 3 胆汁七叶苷试验 将待测菌落接种于胆汁七叶苷斜面 35 孵育48小时 斜面黑色为阳性 应用 鉴定D群链球菌结果 牛链球菌试验阳性 49 3 草绿色链球菌鉴定 50 五 抗链球菌溶血素O试验毒素和抗毒素的中和试验溶血法 传统测定法 胶乳凝集法常用于风湿热的辅助诊断 活动性风湿热患者的抗体效价一般超过400单位 51 六 药物敏感性试验A组为红霉素 青霉素 甲氧苄啶 磺胺甲恶唑等 B组为头孢吡肟 头孢噻肟 氧氟沙星 培南类等C组为阿莫西林 头孢呋辛 氯霉素 利福平等青霉素是抗链球菌的首选药物 此外头孢菌素 红霉素 万古霉素也是治疗链球菌感染的药物 耐青霉素肺炎链球菌 PRSP 52 七 检验结果分析与报告 溶血性链球菌和肺炎链球菌系毒力强的致病菌 均应及时报告 C G群大菌落 溶血性链球菌是咽喉炎病原体米勒链球菌群在脓肿或伤口中分离的应视为致病菌而非污染菌 牛链球菌生物型1和心内膜炎及胃肠道癌症有关 53 第三节肠球菌属 一 分类归类于链球菌科有19种肠球菌 分成5群临床分离的肠球菌多属于2群 54 二 临床意义 医院感染常见的革兰阳性病原菌粪肠球菌 80 90 屎肠球菌 5 10 所致疾病泌尿道感染腹腔 盆腔感染菌血症心内膜炎 55 三 生物学特性 一 形态与染色G 球菌 单个 成双或短链状排列 无芽孢荚膜 个别菌株有鞭毛 二 培养特性营养要求较高 血液 血清培养基上生长好 三高 培养基上生长 高盐6 5 NaCl高碱pH9 6高胆汁40 56 三 生化反应分解多种糖类产酸 触酶阴性 PYR阳性PYR L 吡咯酮 奈胺 四 分型D群链球菌 五 DNAG Cmol 37 45 六 抵抗力对多种药物耐药 57 四 微生物检验 一 检验程序 二 标本采集常规采集血 尿 创伤标本和其他拭子 标本于1小时内接种完毕 三 标本直接检查直接涂片镜检 单个 成双或短链排列 卵圆形革兰阳性球菌 58 四 分离培养与鉴定分离培养血平板或选择培养基叠氮胆汁七叶苷琼脂 黑色菌落血平板 溶血或不溶血 59 粪肠球菌在血琼脂平板 形成较小 灰白色 湿润 凸起 有 或 溶血环的菌落粪肠球菌在麦康凯琼脂平板 形成较小 干燥 粉红色菌落 60 细菌鉴定方法1 与触酶阴性的革兰阳性球菌鉴别 2 肠球菌属种间的菌种鉴定根据对甘露醇 山梨醇 精氨酸代谢分为五组 61 五 药物敏感试验A组 青霉素或氨苄青霉素 B组 万古霉素 C组 四环素类和红霉素 氯霉素 利福平 U组 环丙沙星 诺氟沙星等 耐万古霉素肠球菌 VRE 耐高水平氨基糖苷类肠球菌 HLAR 62 六 检验结果分析与报告对重症感染患者分离的肠球菌应鉴定到种肠球菌分型 63 G 球菌 触酶 葡萄球菌微球菌属 阳性 阴性 链球乳球肠球明串珠菌属菌属菌属菌属 溶血现象 溶血 非 溶血 菌落 PYR 杆菌肽 VP CAMPOptochin胆汁溶菌七叶苷 化脓性 米勒 无乳 马 似马链球菌草绿色肺链牛链球菌 P89表6 6 64 第七章革兰阴性球菌 65 第一节奈瑟菌属属 一 分类奈瑟菌属包括淋病奈瑟菌 脑膜炎奈瑟菌 解乳糖奈瑟菌 干燥奈瑟菌 微黄奈瑟菌 灰色奈瑟菌等 对人类致病菌 淋病奈瑟菌 脑膜炎奈瑟菌 66 二 临床意义 一 脑膜炎奈瑟菌1 致病物质荚膜 菌毛 内毒素2 所致疾病败血症 流脑鼻咽部入血败血症脑脊膜流脑3 免疫性体液免疫为主 IgA IgG IgM 67 二 淋病奈瑟菌1 致病物质菌毛 IgA1蛋白酶 外膜蛋白 内毒素2 所致疾病 淋病泌尿生殖道感染 最常见淋菌性结膜炎 新生儿产道感染播散性淋病 补体缺陷患者3 免疫性不强 可反复感染 68 三 生物学特性 1 形态与染色G 双球菌 肾形或豆形 凹面相对 0 6 1 5 m无鞭毛 无芽胞 大多有荚膜2 培养特性营养要求高 专性需氧 需血液 血清5 10 CO2常用培养基 巧克力色血平板 形成露滴样菌落3 生化反应氧化酶和触酶阳性 对糖分解能力不同 69 70 四 微生物检验 一 检验程序