从苦瓜中提取盐酸小檗碱.docx

分光光度法测定苦瓜籽中盐酸小檗碱的含量摘要:采用超声波法,对苦瓜籽粉中盐酸小檗碱进行提取,利用分光光度法测定盐酸小檗碱的含量,检测波长为428nm。回归方程y= 0.01737x0.00041，0.9992，结果表明，盐酸小擘碱在06.9.mL-1范围内与吸光度呈线性关系。这方法的平均含量为1.7061.mL-1。平均回收率分别为99.09%。实验结果表明,用超声波提取盐酸小檗碱提取率较高，实验提取方法可靠。分光光度法用于苦瓜籽粉中盐酸小檗碱的含量测定,简便,可靠,快捷。1 实验药品及仪器1.1验药品盐酸小檗碱 四川世坤植化有限公司苦瓜籽（市售） 焦作市山阳商城蒸馏水（化学纯CP） 深圳华南高科双蒸馏水器制取无水乙醇 (分析纯AR) 天津威晨化学试剂科贸有限公司浓盐酸分析纯AR) 天津市大陆化学试剂厂白凡士林（二级） 商丘市睢阳区伟康医用品厂1.2 实验仪器 DHG-9245A型电热鼓风干燥器 上海一恒科学仪器有限公司 MC电子分析天平 北京赛多利斯仪器系统有限公司VCS61/62型打碎机 北京丰汇加机电设备销售有限公司SHBIII型循环水真空泵 郑州长盛实验仪器有限公司 TL80-2型医用离心沉淀机 姜堰市天力医疗器械有限公司KQ-300VDB型三频数控超声波清洗器 昆山市超声仪器有限公司TU1901型紫外-可见光分光光度计 上海元析仪器有限公司锥形瓶(250 mL)；容量瓶(500mL，250ml、100mL、50mL、10m)；吸量管（2 mL 、5 mL）；离心管；比色管（25mL）；比色皿；坩埚；布氏漏斗；砂芯漏斗及滤纸2.总盐酸小檗碱的含量测定及提取2.1盐酸小檗碱标准溶液的配制将盐酸小檗碱于80烘箱中烘至恒重，置干燥器中冷却后，精密称取无水盐酸小檗碱对照品0.5900mg，置50ml的容量瓶中，加盐酸: 乙醇(1:100)至刻度，摇匀，即得盐酸小檗碱标准溶液。2.2盐酸小檗碱的提取22.1原料的预处理 选取磨好的苦瓜籽粉在电热鼓风干燥箱箱80的条件下烘干，烘干之后，称其重量。计算失水率0.4344%，然后放入干燥器中待称样。22.2从苦瓜籽中提取盐酸小檗碱称量苦瓜籽粉0.2007g， 置于25mL 的锥形瓶中, 加入盐酸乙醇( 1100 体积比) 约3.00mL, 60水浴加热15min, 然后置于超声波清洗器中水浴50超声60min 冷却至室温。用布氏漏斗抽滤，将滤液4000转离心30min，然后用0.45m微孔滤膜过滤，之后用盐酸: 乙醇(1:100)定容至50ml容量瓶, 摇匀作为供试品液待测。2.2.3 最大吸收波长的选取准确吸取一定量的盐酸小檗碱标准液于50mL容量瓶中，加入盐酸: 乙醇(1:100)溶液刻度，配制1.6ug/ml盐酸小檗碱作为显色标准溶液。用盐酸: 乙醇(1:100)溶液作参比液。准确取1.00ml的供试品液配制10ml的容量瓶中作为样品溶液。用紫外分光光度计分别300500nm波长范围内扫描显色和未显色的标准溶液和样品溶液，选择出最大吸收波长428nm。见下图2.2.4标准曲线的绘制精密量取对照品溶液0.0mL、0.5mL、1.0mL、1.5mL、2.0mL、2.5mL、3.0mL分别置于25mL的容量瓶中，各加入加入盐酸乙醇（1:100）溶液定容至刻度，摇匀，在428nm波长处测定吸光度，以浓度为横坐标，吸光度为纵坐标做线性回归，得回归方程为y= 0.01737x0.00041，0.9992，结果表明，盐酸小擘碱在6.9.mL-1范围内，吸光度与浓度呈良好的线性关系。见图标准曲线2.3超声波法提取盐酸小擘碱的最佳条件的研究2.3.1 料液比对盐酸小擘碱提取率的影响 精密称取6份粉碎后的样品各约0.1g，分别置于离心管中，编号1.2.3.4.5，按编号分别加入0.1L（1:5），1.0L（1:10），1.5L（1:15），2.0L（1:20），3.0L（1:30），.0L（1:40）盐酸乙醇（:100）溶液，在置于55溶液中超声波提取一次，抽滤，将滤液离心30min（4000转min），用0.45滤膜过滤，再用盐酸乙醇（1:100）溶液定容至10L容量瓶，摇匀待测，见下表。料液比料液比1:51:101:151:201:301:40吸光度/Abs0.12670.23530.23530.31600.30970.2513所得图形见下图： 2.3.2提取时间对盐酸小擘碱提取率的影响精密称取份粉碎后的样品各约0.10g，分别置于离心管中，编号1.2.3.4.5，按编号依次加入盐酸乙醇（1:100）溶液2.0L，在置于55水浴中时间分别为30min.60min、90min、120min、150min超声波提取一次，抽滤，将滤液离心30min（4000转/min），用0.45m滤膜过滤，再用盐酸乙醇（1:100）溶液定容至10mL容量瓶，摇匀待测，见下表。提取时间提取时间/306090120150吸光度/Abs0.19330.2273030770.2760.2910所得图形见下图：2.3.3提取次数对盐酸小擘碱提取率的影响精密称取份粉碎后的样品各约0.10g，分别置于离心管中，编号1.2.3，各加入加入盐酸乙醇（1:100）溶液2.0mL，在置于55水浴中90min按编号超声波提取一、二、三次，抽滤，将滤液离心30min（4000转min），用0.45m滤膜过滤，再用盐酸乙醇（1:100）溶液定容至10mL容量瓶，摇匀待测，见下表。提取次数提取次数123吸光度/Abs0.30770.0540.0013所得图形见下图：2.3.4提取温度对盐酸小擘碱提取率的影响精密称取份粉碎后的样品各约0.10g，分别置于离心管中，编号1.2.3.4.5.6，各加入加入盐酸乙醇（1:100）溶液2.0mL，分别置于45、50、55、60、65、70水浴中90min按编号超声波提取二次，抽滤，将滤液离心30min（4000转min），用0.45m滤膜过滤，再用盐酸乙醇（1:100）溶液定容至10mL容量瓶，摇匀待测，见下表。提取温度温度/4550556065吸光度/Abs0.2650.3060.31170.2780.28872.4 盐酸小檗碱的超声波法提取条件的正交实验为了消除各因素之间的交互作用对结果的影响，分析参数影响主次因素，得到最佳的提取工艺，选取提取温度、提取时间、料液比为三个对超声法提取苦瓜籽的因素进行单因素实验，其他提取条件为提取次数：1次，提取液不变。在单因素实验的基础上确定正交实验的因素和水平见表2表2正交试验（三因素三水平） 因素 水平 A B C 温度 时间 料液比1 50 60min 1:102 55 90min 1:203 60 120min 1:30选择L9（33）三因素三水平九次试验正交进行试验，实验数据及结果如下表所示:正交试验数据表_ 序号 温度（） 时间min 料液比 吸光度 1 A1 B1 C1 0.14602 A1 B2 C2 0.20573 A1 B3 C3 0.30274 A2 B1 C2 0.2290 5 A2 B2 C3 0.2587 6 A2 B3 C1 02463 7 A3 B1 C3 0.2437 8 A3 B2 C1 0.2357 9 A3 B3 C2 0.3110_ K1 0.2062 0.2181 0.2093K2 0.2334 0.2447 0.2486K3 0.2867 0.2635 0.2657R 0.0805 0.0454 0.0564由上表可知，影响苦瓜籽提取率的因素主次为ACB，即提取时间料液比时间。最佳提取工艺应为A3B2 C2（其实B2和B3相差不大，考虑到节约能源和节约时间用B2，C2和C3差别不大，考虑到节约原料用C2），即温度60，提取时间60min,料液比为1:20。 2.5 盐酸小檗碱含量测定方法由超声波法正交实验可得超声波最佳提取条件是：温度60，提取时间60min,料液比为1:20,提取次数：1次，提取液盐酸乙醇（1:100）溶液。精密称取3份粉碎后的样品各约0.10g在以上最佳条件下提取苦瓜籽中的盐酸小檗碱。苦瓜籽中盐酸小檗碱含量的计算由标准曲线得：在盐酸小檗碱06.9.mL-1时吸光度与盐酸小檗碱浓度呈线性关系。关系式为：y= 0.01737x0.00041 ，所以，C=（y-0.00041）/0.01737编号123平均值吸光度/Abs0.30670.30630.30670.3066浓度g/mL17.612217.610217.650517.6243苦瓜籽含量mg/g1.70501.70311.71031.70612.6 回收率的测定方法标准液取做标准准线的标准液，取4mL，定容到10mL样品液用约0.1g用最佳条件提取，定容到10mL。各取1.00mL加标加标前g加标量g加标后g回收率 %平均回收率 %R值17.823318.226336.0334100.2399.091.768417.765718.226335.630498.0217.823318.226335.457796.7517.765718.226335.860799.2817.765718.226336.2061101.172.7.精密度实验精密吸取配制0.8g/mL,1.6g/mL,3.2g/mL,4.8g/mL,6.4g/mL的标准液,按上述条件测定,重复进样5次,平均RSD为 ,表明精密性良好.浓度g/mL一次二次三次四次五次平均值RSD0.40.0040.00390.00400.00430.00410.004063.74%0.80.0150.0140.0160.0180.0170.0169.88%1.600210.0200.0230.0210.0230.02166.21%3.20.0490.0510.0480.0460.0510.0494.33%4.80.0800.0790.0830.0810.0780.08022.4%2.8.稳定性实验精密称取同一批苦瓜籽粉末1份约0.1g，按最佳条件提取，定容到10mL，每隔半小时测一次 时间0.511.522.533.544.55Abs0.2080.2580.3100.3