06TS000-04.00 MG-0.6型脉动真空蒸汽灭菌器灭菌效果验证方案——洗衣房——2010.doc

北京四环生物制药有限公司题目：MG-0.6型脉动真空蒸汽灭菌器（1120-0733）灭菌效果验证方案编号：06TS000-04.00实施日期:起草人：日期：会签：日期：批准人：日期：颁发部门：分发部门：目 录1 概述32 设备基本情况33 验证目的和计划33.1验证目的33.2 验证计划34 职责34.1 验证委员会34.2 保障部44.3 生产部44.4 质量部45 验证内容45.1 验证所需的条件45.1.1 验证所需的主要文件资料45.1.2 试剂、器材及仪器45.2 设备确认55.3 修订标准操作规程55.4 运行确认55.5 性能确认（灭菌效果的验证）55.5.1 目的55.5.2 真空度的检测55.5.3 空载热分布实验即压力锅温度分布状况的确定55.5.4 最大负载“F0”值测定75.5.5 最大负载热穿透试验75.5.6 脉动真空灭菌器呼吸器的除菌效果验证85.5.7 注意事项85.6 验证结果评定及结论85.6.1 评价方法85.6.2 湿热灭菌程序合格的标准（药品生产指南2003）85.6.3 验证次数85.7 验证周期85.8 验证报告86 附件86.1 验证公共记录86.2 本方案专用记录9 附1 脉动真空蒸汽灭菌器空载热分布实验记录10 附2 脉动真空蒸汽灭菌器最大负载热分布实验记录11 附3 脉动真空蒸汽灭菌器最大负载热穿透（生物指示菌片挑战实验）记录12 附4 脉动真空蒸汽灭菌器呼吸器除菌效果验证记录131 概述MG-0.6型脉动真空蒸汽灭菌器是进行洁净服高压灭菌的设备，经高压的洁净服能否达到灭菌要求是保证生产能否顺利进行及产品质量是否合格的前提，所以使用前必须对脉动真空蒸汽灭菌器灭菌效果进行验证。MG-0.6型脉动真空灭菌器是洗衣房专用于洁净服高压灭菌的设备，故其在满载温度分布验证和满载挑战试验时，必须根据洗衣房灭菌的洁净服的最大数量及装载模式等具体情况进行试验。2 设备基本情况设备名称：脉动真空蒸汽灭菌器型 号：MG-0.6型生产厂家：连云港千樱医疗设备有限公司设备编号使用部门工作间管理员1120-0733生产部洗衣房整衣存衣间杜方平3 验证目的和计划3.1 验证目的为确认MG-0.6型脉动真空蒸汽灭菌器系统能够正常运行，设备各项性能指标在使用一年后仍符合设计要求，保证湿热灭菌的洁净服能达到无菌，特制订本验证方案，对MG-0.6型脉动真空灭菌器系统进行验证。验证过程应严格按照本方案规定的内容进行。3.2 验证计划本次验证计划是按MG-0.6型脉动真空蒸汽灭菌器的使用和日常维护标准操作规程对生产用洁净服进行灭菌操作，在最大负载条件下进行生物指示菌片挑战试验，证明杀灭微生物能力符合规定的许可范围之内，不会对下一步的生产造成污染，对设备的灭菌效果进行3次灭菌试验验证其重复性，并对验证结果进行总结。4 职责4.1 验证委员会4.1.1 负责验证方案的审批。 4.1.2 负责验证的协调工作，以保证本验证方案规定项目的顺利实施。4.1.3 负责验证数据及结果的审核。4.1.4 负责验证报告的审批。4.1.5 负责发放验证证书。4.2 保障部 4.2.1 负责建立设备档案。4.2.2 负责仪器、仪表的校正。4.2.3 负责收集各项验证、试验记录，报验证委员会；也可以是使用部门或使用人。4.2.4 负责修订脉动真空蒸汽灭菌器系统操作、清洗、维护保养的标准操作程序；也可以是使用部门或使用人。4.2.5 负责脉动真空蒸汽灭菌器系统的维护保养。4.3 生产部（使用部门）4.3.1 负责验证条件的准备。4.3.2 负责脉动真空蒸汽灭菌器的灭菌验证操作。4.4 质量部 4.4.1 负责脉动真空蒸汽灭菌器灭菌的质量标准、检验规程及取样程序。4.4.2 负责脉动真空蒸汽灭菌器灭菌效果的检验，并根据检验结果出具检验报告单。5 验证内容5.1 验证所需的条件5.1.1 验证所需的主要文件资料:文 件 名 称编 号十万级洁净区人员进出的标准操作规程03SOP101-01.00脉动真空蒸汽灭菌器的使用和维护保养标准操作规程04SOP100-01.00洁净工作服、鞋的清洗、消毒、灭菌周期的规定及管理程序08SMP060-03.00DNP9272电热恒温培养箱使用和日常维护标准操作规程04SOP600-32.00MJX-250-I霉菌培养箱使用和日常维护标准操作规程04SOP600-33.00SPX-250B-II生化培养箱使用和日常维护标准操作规程04SOP600-38.00嗜热脂肪芽孢杆菌菌片使用标准操作规程09SOP210-20.00洁净服湿热灭菌的标准操作规程08SOP060-10.005.1.2 试剂、器材及仪器名 称规 格数 量嗜热脂肪芽孢杆菌106菌/1片10片留点温度计015010支试 管15100mm50支5.2设备确认5.2.1 关于消毒灭菌系统的详细技术参数和操作说明。5.2.2 对脉动真空蒸汽灭菌器质量有重大影响的关键部位的工艺参数,如:温度、压力等的仪表是否校验。5.3 修订标准操作规程根据新文件体系的建立以及生产实际情况确定是否要对所验证的规程进行修订。5.4 运行确认进行运行确认是脉动真空蒸汽灭菌器系统的实际运行试验，目的是为证明脉动真空蒸汽灭菌器系统能够达到设计要求及生产工艺要求。主要内容包括：5.4.1 检查脉动真空蒸汽灭菌器的运行情况。5.4.2 测定设备参数:温度、压力。如果压力灭菌器的运行确认已经单列验证方案并已得到确认，则在此方案实施时只需考察其运行确认报告即可。 5.5 性能确认（灭菌效果的验证）5.5.1 目的脉动真空蒸汽灭菌器系统安装确认与运行确认完成，经验证委员会审核试验结果，认为运转正常后，应对脉动真空蒸汽灭菌器系统进行性能确认。进行性能确认的目的是确认脉动真空蒸汽灭菌器系统能够连续使用并符合标准要求。性能确认需要做的实验包括：真空度的检测；空载热分布实验即压力锅温度分布状况的确定；最大负载温度分布实验即“F0”值测定；最大负载热穿透实验（微生物挑战试验）。5.5.2 真空度的检测将脉动真空蒸汽灭菌器抽真空至负压（-0.1MPa），关闭电源，100分钟后观察并记录读数，计算其真空泄露率是否小于130Pa/分钟（即0.00013MPa/分钟）。5.5.3 空载热分布实验即压力锅温度分布状况的确定5.5.3.1 操作人员按洁净区进入程序进入操作间。5.5.3.2 将10个带有编号的留点温度计分别用10个专用支架悬空固定。5.5.3.3把放有留点温度计的支架分10个点（如图）放在脉动真空蒸汽灭菌器的搁物架上。（有1点留点温度计置于灭菌器控制和记录探头旁，该探头位于排气口附近） 上门自左向右开启 下留点温度计装载图： 留点温度计号 位置 留点温度计号 位置 1 4-B- 6 2-B- 2 4-C- 7 2-A-IV 3 4-A-I 8 1-B- 4 1-A-I 9 4-A-IV 5 4-D-IV 10 与灭菌柜腔室温度探头放在一起5.5.3.4 关好压力灭菌器的门，按脉动真空蒸汽灭菌器标准操作规程进行湿热灭菌。 5.5.3.5 当灭菌器温度仪表数显值显示内锅温度为121时，开始计时5分钟，然后关闭加热开关，待高压蒸汽灭菌器压力降为“0”、温度降到80以下时，打开灭菌器门，取出各留点温度计观察其温度值是否都达到或超过121（要求所分布的10点温度计的温度都应达到121）。若有任何一点的留点温度计在第5分钟时未达到121，应重新设立时限（以每3分钟为一进阶）进行高压试验。高压前将各留点温度计温度甩至室温，待高压锅温度降至80以下，按5.5.3.5程序重新高压，高压时间延长5分钟，待高压蒸汽灭菌器压力降为“0” 、温度降到80以下时，打开灭菌器门，取出各留点温度计观察其温度值是否都达到或超过121。依此类推，直至各点的温度都达到121（说明此时热分布均匀）。此时的高压时间则为高压灭菌器在空载状态下各处均达到121所需要的最短有效时间。将此时间与该灭菌器第一次做性能验证达到该温度所需要的时间进行比较，所需要的时间一致，则说明该设备性能良好；若所需要的时间不一致，则该设备需要进行维修后再验证。5.5.3.6 验证结果分析及评价根据空载热分布3次运行的结果，判断灭菌器各处温度分布情况是否均匀（各留点温度计与平均温度差值3），找出灭菌器温度相对较低的区域或点（冷点），此区域或点是在灭菌效果验证时需要关注的灭菌点。5.5.3.7 本试验进行3次以检验其重复性。需要注意的是在3次试验的过程中，同一留点温度计需放置于同一位置。5.5.3.8 结果记录于表1中。5.5.4 最大负载热分布试验5.5.4.1将洁净服按照实际生产时的状况进行包裹，并按其装载模式进行摆放，且按照灭菌器所能容纳的最大数量进行装载（附照片或图表）。5.5.4.2 备好10包待灭菌洁净服，每包中放入1支留点温度计，分别按110标上数字以便灭菌后统计、监测。分布如空载验证时的分布图。5.5.4.3 关好脉动真空蒸汽灭菌器的门，按脉动真空蒸汽灭菌器标准操作规程进行高压。5.5.4.4 按“5.5.3.5” 操作查找灭菌器灭菌过程中存在的冷点。但满负载高压以空载分布热试验最短有效时间为起点进行验证。当各留点温度计都达到或超过121，此时的高压时间则为高压灭菌器在满载状态下各处均达到121所需要的最短有效时间。5.5.4.5 验证结果分析及评价根据满载热分布3次运行的结果，判断灭菌器各处温度分布情况是否均匀（各留点温度计与平均温度差值3）；并观察留点温度计的温度，当各点温度分布均达到121、“F0值”15时（参考：药品生产指南2003第256页），为合格的高压灭菌规程。5.5.4.6 待灭菌器温度降到80以下后连续试验3次；5.5.4.7 结果记于表2中。5.5.5 最大负载微生物挑战试验本试验用生物指示菌片对最大负载条件下的灭菌效果进行验证，同时进行细菌、真菌培养。继续使用“5.5.4 最大负载热分布试验”的物品进行试验。5.5.5.1 将1片生物指示菌片放入试管中，按物料灭菌要求制备好封口塞。并以该嗜热脂肪芽孢杆菌的菌片试管代替留点温度计的分布点。5.5.5.2 按“脉动真空蒸汽灭菌器标准操作规程”进行高压操作，高压时间30分钟。5.5.5.3 高压结束后，立即取出生物指示菌片，并按嗜热脂肪芽孢杆菌指示菌片培养标准操作规程向高压的菌片管加入培养液进行培养（56培养48h）。5.5.5.4 同时取1片未经高压灭菌的生物指示菌片作为阳性对照进行培养。5.5.5.5 观察并记录培养结果。5.5.5.6 本试验进行三次，以检验其重复性。5.5.5.7 验证结果分析及评价生物指示剂培养的培养液颜色由紫色变为黄色表明灭菌不彻底，验证表明灭菌不合格；生物指示剂仍为紫色者、且对照样品为黄色，则表明灭菌彻底，判定为灭菌验证结果合格，即无菌保证值6。5.5.6 脉动真空灭菌器呼吸器的除菌效果验证在5.5.5 最大负载微生物挑战试验高压灭菌结束后，从存衣间打开高压锅舱门，将已灭菌的含固体LB培养基的平皿敞口放置在呼吸器下方，关好高压锅舱门，进行一次抽真空试验，抽完真空不进行高压程序而直接进气，待压力恢复到0MPa时打开舱门，取出平皿进行培养，不低于十万级微生物限度标准。5.5.7 注意事项5.5.7.1 在高压过程中需分析冷点位置，以防止灭菌不彻底。5.5.7.2 高压后生物指示菌片应及时取出、在专用培养基中进行培养。5.6 验证结果评定及结论5.6.1 评价方法：高压温度用留点温度计测定，高压时分10点分布留点温度计。高压后，每1点留点温度计的温度都应达到121，表明温度分布均匀，判定为合格；有1点温度达不到，则判定为不合格；生物指示剂分10点放入高压灭菌器。高压结束后按嗜热脂肪芽孢杆菌指示菌片使用标准操作规程进行判断。5.6.2 湿热灭菌程序合格的标准（药品生产指南2003）：5.6.2.1 空载或满载时，各留点温度计温度在较短时间内分布均匀，各点与平均温度差值3，包括“冷点”；5.6.2.2 满载时“F0”15分钟；5.6.2.3 最大负载微生物挑战试验时全部生物指示剂培养的培养液颜色为紫色者，则表明无菌保证值6。5.6.3 验证次数 按此法进行3次，验证其可靠性及稳定性。若3次验证结果一致，证明利用MG-0.6脉动真空蒸汽灭菌器并按脉动真空蒸汽灭菌器的使用和维护保养标准操作规程进行灭菌工作是符合灭菌要求的。5.7 验证周期：正常生产每1年验证一次。 5.8 验证报告6 附录6.1 验证公共记录验证方案修改申请及批准书验证所需条件记录表验证所需仪器仪表校验记录表验证结果及分析评价报告规程验证合格证书6.2 本方案专用记录脉动真空蒸汽灭菌器空载热分布实验记录脉动真空蒸汽灭菌器最大负载热分布实验记录脉动真空蒸汽灭菌器最大负载热穿透实验记录脉动真空蒸汽灭菌器呼吸器除菌效果验证记录脉动真空蒸汽灭菌器运行记录器材灭菌记录附1 脉动真空蒸汽灭菌器空载热分布实验记录 灭菌器编号_ 工作间_验证日期 留点温度计量程 湿热灭菌温度 湿热灭菌时间 分钟1、 湿热灭菌记录操作内容起止时间锅内温度（）锅内压力（MPa）开始时 分排汽时 分至 时 分升温时 分至 时 分保温灭菌时 分至 时 分降温时 分至 时 分降至0 MPa时 分2、 结果2.1 脉动真空内室真空度检测，内室压力抽至 MPa后关闭电源， 分钟后压力回到0MPa，真空泄漏率为 MPa。2.2 脉动真空蒸汽灭菌器运行正常（ ）或不正常（ ）。 2.3 留点温度计测定结果温度计位置12345678910温度（）与平均值差最冷点3、 结论： 根据空载热分布运行的结果，灭菌器各处温度分布情况_均匀，脉动真空灭菌器的真空泄漏 0.00013MPa/min。灭菌器温度“冷点”位于_，在生产活动中要注意该点物品的灭菌效果。 操作者： 复核者：附2 脉动真空蒸汽灭菌器最大负载热分布实验记录 灭菌器编号_ 工作间_验证日期 留点温度计量程 湿热灭菌温度 湿热灭菌时间 分钟1、 湿热灭菌记录操作内容起止时间锅内温度（）锅内压力（MPa）开始时 分排汽时 分至 时 分升温时 分至 时 分灭菌时 分至 时 分降