百合切花保鲜实验方案.docx

实验方案实验材料：同一时期的百合花（含苞待放），先复水2h，然后进行修剪，长度约55cm左右，去掉多余的部分，保留3-5片叶子。实验处理：室温（18-22）,空气相对湿度30% ，百合花进行实验前，先在去离子水中进行斜45剪切，然后装入500ml的三角瓶中，每瓶装两支百合切花，每瓶装400ml的保鲜液，然后用脱脂棉封住瓶口，以免水分蒸发。每隔3d换一次保鲜液，并调节pH。 本实验设计了瓶插实验1和2，ck为去离子水，两个实验分别设置5个浓度梯度，分别为10g/L蔗糖，20g/L蔗糖，30g/L蔗糖，40g/L蔗糖，50g/L蔗糖；0.05g/LVc,0.1g/LVc,0.5g/LVc,1g/LVc,1.5g/LVc每天观察记录，隔天计算花枝鲜重变化率，并取样，测量花瓣中SOD, CAT, MDA, 可溶性蛋白和叶片中的叶绿素的生理指标。试验方法：一、形态指标的测定方法1.瓶插寿命的测定：瓶插寿命指标为50%的花瓣出现失水枯萎，发生褐变或出现花瓣枯黄脱落的现象为标准。2.花朵直径的测定：测量最外层花瓣间最大距离和最小距离，然后取其平均值（cm），每天测定1次。花朵直径增加值的计算方法：以某一天花朵的最大直径值减去第一天的花朵直径值。3.切花鲜重的测定：吸干花茎茎基外部的水分，然后用电子天平称量各花枝的鲜重（g），隔天测定1次鲜重变化率（%）=（瓶插期花枝质量瓶插初期花枝质量）/瓶插初期花枝质量*100二、生理指标的测定方法1、抗氧化酶的测定：称取百合花瓣0.5g，加5ml的pH7.8（0.05molL-1）的磷酸缓冲液，冰浴研磨，10000r/min（04）离心20min。上清液即为酶提取液。（1）超氧化物歧化酶（SOD）活性测定：取透明的试管，按表1加入各溶液组分表1 SOD反应液组分表试剂（酶）用量（ml）终浓度（比色时）0.05M磷酸缓冲液1.5130mM Met溶液0.313mM750M NBT溶液0.375M100M EDTA-Na20.310M20M核黄素0.32.0M酶液0.05（对照管加缓冲液）蒸馏水0.25总体积3.0所有管混匀后，将1支对照试管置暗处做空白对照，其余各管于4000lx光下反应20min，（各个试管受光要一致，温度为25）.反应结束后，以不照光的对照管为空白对照。560nm下测定OD值。SOD活性单位以抑制NBT光化学反应的50%为一个酶活性单位（u）。 (ACK-AE)*V SOD活性（ug-1）= 0.5*ACK*W*Vt式中：ACK为照光对照管吸光度；AE为样品管的吸光度；V为样品液总体积5（ml）；Vt为测定时样品用量（ml）；W为样品鲜重（g）。（2）过氧化氢酶（CAT）活性测定：0.02ml酶提取液+2.98mlCAT反应液，在240nm下比色，加入酶夜时开始计时，每隔10s读取数据一次。空白以缓冲液代替，总体积为3ml，以每分钟每克鲜重变化0.1的酶量为一个活性单位。CAT反应液：0.28ml 30%的H2O2用pH7.0（0.05）的磷酸缓冲液稀释至250ml（H2O2终浓度为10mM）。 A240*VCAT活性（ug-1min-1）= 0.1*VS*t*W A为吸光度差值；V为反应液体积（5ml）；t为时间差（min）；VS为加入酶夜体积（ml）；W为样品鲜重（g）。2、可溶性糖的测定：标准曲线的制作：取6支试管，按表2加入试剂。然后按顺序在各试管中分别加入0.5ml蒽酮乙酸乙酯和5ml浓硫酸，摇匀，立即将试管放入沸水浴中，逐管准确保温1min,取出，自然冷却至室温，在630nm波长下比色。作标准曲线。表2 可溶性糖标准曲线溶液配制表管号123456100molL-1蔗糖液ml00.20.40.60.81.0蒸馏水ml2.01.81.61.41.21.0蔗糖含量g020406080100提取液的制备：称取切花花瓣0.1g于试管中，加入10ml蒸馏水，薄膜封口，于沸水浴中浸提30min，提取液过滤于25ml容量瓶中，反复冲洗试管及残渣，定容至刻度。可溶性糖含量的测定：吸取0.5ml样品液于一试管中，加1.5ml蒸馏水，加0.5ml蒽酮乙酸乙酯和5ml浓硫酸，摇匀，立即将试管放入沸水浴中，准确保温1min，取出，自然冷却至室温，在630nm波长下测定其吸光度值，在标准曲线上查得可溶性糖含量。3、可溶性蛋白的测定：称取切花百合花瓣0.5g，用5ml蒸馏水研磨成匀浆后，3000r/min离心10min，取上清液0.1ml放入具塞试管中，并加入蒸馏水0.9ml,再加入5ml考马斯亮蓝G-250溶液，充分混合，放置2min后在595nm下比色，测定吸光度，并通过以牛血清蛋白所作标准曲线求值。 C*VT样品中蛋白质的含量=(mgg-1) VS*WF*1000式中:C为查标准曲线值（ug）；VT为提取液总体积（ml）；VS为测定时的加样量（ml）；WF为样品鲜重（g）。4、丙二醛（MDA）含量的测定：称取切花百合花瓣0.5g，加入5ml 5%的三氯乙酸（TCA），充分研磨，将匀浆转入10ml的离心管中，在转速3000r/min下离心10min，取上清液2ml（上清液为样品提取液），加入2ml 0.67%硫代巴比妥酸（TBA），在100沸水浴中煮沸30min,冷却（冰浴）后再离心一次，分别测定上清液在450nm,532nm,600nm波长下的吸光度，（以2ml蒸馏水加2ml0.67%TBA的混合液作为对照测定经行比色）。计算公式如下： MDA浓度（umolL-1）=6.45(D532-D600)-0.56D450MDA浓度（umolg-1）= MDA浓度（umolL-1）*提取液体积（5ml）/植物组织鲜重（g） 以上生理指标均作3次重复。5、叶绿素含量的测定：分别将各处理的叶片清洗干净吸干表面水分，剪碎混匀（除去大叶脉），各称取0.1g，然后将叶片置于25ml试管中，加入无水乙醇丙酮混合液（1:1）10ml，使叶片完全浸入液体中，加塞，在黑暗中放置24h，待叶片组织完全变白时，分别在663nm和