丹皮酚含量测定方法综诉.doc

丹皮中丹皮酚的测定方法研究 许先融 （学号：0806503164）中山市五桂山镇广东药学院08中药分析与鉴定1班 528458摘要：牡丹皮为毛茛科芍药属牡丹的干燥根皮，是具有抗菌消炎作用的常用中草药，其含有多种有效成分。而丹皮酚是起镇痛消炎、抗菌等作用的主要活性成分。随着中药现代化的进展，对中药有效成分的分离提取、含量测定已成为新的热点课题。本文主要对丹皮中丹皮酚的测定方法进行详细综述。关键词：丹皮 丹皮酚 测定分析牡丹皮为毛茛科植物牡丹 Paeonia Suff rut ico sa A ndr . 的干燥根皮。本品为历版 中国药典 收载品种, 具有清热凉血、 活血化瘀功能。丹皮中主要有效成分为丹皮酚, 经药理研究证明具有抗炎、镇痛、 解痉等药理作用。我国牡丹皮产地很多, 但其有效成分丹皮酚的含量有很大差别。产地对丹皮酚含量的影响 神农本草经载曰：“土地所出, 真伪陈新, 并各有法。”说明了产地的重要性。我国牡丹分布广，资源丰富，其活性成分丹皮酚的含量差异很大。为了探讨和建立不同产地丹皮药材的质量控制方法和指标，范明等118个省区不同产地的丹皮中丹皮酚含量测定结果显示，其中以云南产（5.94%）牡丹皮含量为最高, 宁夏产（3.83%）次之，而河南、福建产（1.58%）最低，可见产地对药材质量影响较大。胡世林等2对7个产地的丹皮酚含量进行研究，发现安徽铜陵的“凤丹皮”含量最高，各产地平均含量为1.08%2.51%。杨洁3测定的丹皮酚平均含量在上述范围内，含量最高的为四川产丹皮，其次为安徽产丹皮，福建产丹皮含量最低。通过研究认为，丹皮质量好坏不应该忽略产地对其有效成分的影响。所以提供有效的测定方法非常关键。本文采用各种牡丹皮中丹皮酚的含量测定方法, 为鉴定不同地区的牡丹皮提供依据。1 丹皮酚提取分离方法11 蒸馏煎煮法蒸馏-煎煮法 蒸馏煎煮法蒸馏-煎煮法是指先蒸馏提取挥发性成分，药渣再加水提取的方法，适用于含挥发性成分药材的提取。丹皮酚随蒸气馏出后，在冷藏状态下大量析出，滤过干燥即可用于成型，保存方便且转移率较高4，但其提取率远低于醇提法5；提取过程中选择适宜的pH范围使丹皮酚溶解，并确保溶液贮存过程中的稳定已成为丹皮酚提取液体制备过程中的关键，在蒸馏过程中可以加盐、先加碱后加酸等提高提取率，研究认为加盐蒸馏法是丹皮酚提取的最优方法；为了提高其在水中溶解度，通常采用有机溶剂、助溶剂、表面活性剂等途径来解决问题，有文献报道将其制成-环糊精包合物来提高其稳定性和生物利用度，能降低其挥发性，增加其溶解度6。12 醇提法醇提法以无水乙醇为溶剂，40温度下回流提取，即可将丹皮酚提取出来。醇提法提取工艺简单，有效成分提取多，似应为牡丹皮提取的最佳方法，但问题在于醇提液的后处理困难，因丹皮酚熔点低、挥发性强，实际生产中难于仅除去乙醇而不损失较多的丹皮酚，且提取过程中受热温度越高、时间越长,丹皮酚的含量和收率就越低7。1.3 CO2 超临界流体萃取法应用超临界萃取法是当前中草药有效成分提取的一个发展方向，具有提取温度低、时间短等优点。在15 MPa ，52 的提取条件下，2.5 h后其丹皮酚提取液为淡红棕色液体，冷藏后自动分层，上层为淡黄色液体，下层为淡红棕色固体8。CO2 超临界流体萃取法提取的丹皮酚量少，远低于文献报道值，该方法能萃取出大量脂溶性成分。因CO2 是非极性物质而酚苷类成分极性较大，故未能将该类萃取出来，这也是导致总提取物收率较低的一个原因9。为提高丹皮酚及酚苷类成分的收率，并保持本方法的提取特点，可考虑进一步优化提取条件并加入夹带剂，这方面的工作还有待深入研究。2，丹皮酚含量测定方法 21紫外可见分光光度法(Ultravioet2Visible Spec2trophotometry ,UV)紫外可见分光光度法具有操作简单、 费用较低等优点。但由于该法基本上没有分离能力 ,样品处理要求严格 ,故常被用于一般要求不很严格的测定以及中药材炮制方法、 处理条件的比较、 制剂工艺选择等方面。丹皮酚具有一定的挥发性 ,光谱法中样品处理一般都用水蒸气蒸馏或直接蒸馏法提取 ,以减少混入杂质 , 通常蒸馏液稀释后于 274 nm 处测定吸收度。周玉生等10 用该法测定了牡丹皮中丹皮酚含量 ,比较了不同加工方法的丹皮酚的含量:取已加工的牡丹皮样品适量 ,置蒸馏瓶中 ,加水约 120mL ,蒸馏后得馏出液约有 95 mL ,稀释后在 274 nm测定吸收度。结果发现 ,水洗 50 烘干损失率最高 ,为 34. 96 %;白酒喷淋晾干 ,损失率最低 ,为11.19 %。2.2高效液相色谱法杨洁等11采用HPLC法，结果显示丹皮酚在0.010.55 g/ml范围内线性关系良好(r = 0.999 6) ，平均回收率99.87% ，RSD 为1.46%。该法简便、快速，重现性好，精度高，适用于牡丹皮中丹皮酚的定量分析。实验中试用不同体系和比例的流动相，如甲醇磷酸，甲醇醋酸水，结果以甲醇醋酸水溶液为流动相时丹皮酚的分离效果最好。李海燕等12以甲醇0. 5%磷酸(6040)为流动相，检测波长274 nm下应用反相高效液相色谱法对丹皮酚含量进行测定，其检测效果也较为理想。2.3反相薄层色谱法( Reversed Phase Thin Layerchromatography ,RPTLC)高效薄层具有很高的分离能力 ,配备微机控制扫描设备 ,因而具有高灵敏度、 样品用量少、 处理较简单、 薄层板可用强氧化性显色剂显色、 并可多次重复扫描等优点。但反相薄层色谱法用于分析丹皮酚含量很少报导。高鲁霞等13 用该法同时测定了牡丹皮中丹皮酚和芍药苷含量。将样品粉碎过 60 目筛 ,用 70 %甲醇水溶液浸泡8 h ,超声处理30 min ,离心 4000 r/ min ,15 min ,取上清液点样。薄层和扫描条件:Rp218 F254 高效薄层板 ,70 %四氢呋喃溶液(含 011 %四丁基溴化铵)浸渍 ,干燥 ,用四氢呋喃2水(含 011 %四丁基溴化铵) = 42 58 展开 ,展距 415cm ,取出 ,挥干 ,用同一展开剂进行二次同向展开 ,展距 215 cm , UV 254 nm 定位 ,由色谱图可见 ,丹皮酚和芍药苷分离良好。对丹皮酚用单波长 299 nm 锯齿扫描 ,结果平均回收率 8914 % ,此法简便、 准确、 重现性好。2. 4 气相色谱法( Gas chromatography ,GC)气相色谱法具有很强的分离能力和很高的灵敏度 , 只需很少量的样品即可得到满意的结果。因此是分析成分复杂的中药中痕量成分的有效手段。为了增加检测灵敏度和选择性 ,并出于对色谱柱和检测器的保护 ,GC以及 HPLC对中药样品的处理要求也较严格 , 除水蒸气蒸馏法外 ,还有多种其它有效的提取方法。段玲等14用毛细管气相色谱法 ,以正十五烷为内标 ,测定了牡丹皮中丹皮酚含量 ,样品置 100 mL 恒压滴液漏斗中 ,用无水乙醇回流提取 4 h ,取提取液 1 mL 加内标 50L ,混匀 ,进样 0. 1L。色谱条件 ,石英毛细管柱(10 m 0. 25 mm I. D. ) ,SE230 键合相 ,FID 检测 ,用三因素二水平正交设计2单纯形组合优化法对柱温、 进样室温度、 柱前压进行试验 ,得出最佳条件:柱温 130,柱前压0. 55 kg/ cm2。丹皮酚在10900 ng范围内线性相关 , r = 0. 9984 ,平均回收率 99. 28 % , RSD2. 6 % ,结果与药典法、 HPLC 法一致。 3 小结丹皮酚是中药材牡丹皮和其制剂所含主要成分之一。其含量测定方法还有溴量法15 、 库仑滴定法16等 ,但这些方法已不多用。综上所述 ,从含丹皮酚中药及其制剂分析前处理方法和测定方法来看 ,样品处理主要有两类 ,一是蒸馏法: 直接蒸馏法和水蒸气蒸馏法 ,提取液较单纯 ,适用于紫外法等无分离能力的仪器分析;另一类是有机溶剂浸出法 ,效率较高 ,若配以超声处理 ,可大大缩短分析测定时间 ,但混入杂质较多 ,适用于具有高分离能力的色谱分析法。鉴于丹皮酚本身具有一定的挥发性 ,在中药材及其制剂中含量均不高 ,加之中药成分的复杂性 ,在条件许可的情况下 ,毛细管气相色谱法应是中药材及其制剂中丹皮酚首选的分离分析方法。参考文献：1 范 明，邱 燕，范 榕. 不同产地牡丹皮中丹皮酚含量测定J.福建中医药,1999 ,30 (4)：41.2 胡世林，池 群，赵中振.中国道地药材M.哈尔滨：黑龙江科学技术出版社, 198：541. 3 杨 洁，贾国强，刘 萍，等. HPLC法测定不同产地牡丹皮中丹皮酚的含量J.科学技术与工程,2006,6(3)：299.4 杨炳火，高运军，肖红兵. 不同提取方法对徐长卿中丹皮酚含量的影响J.时珍国医国药,1998 :9 (5) :417.5 范 明，邱 燕，范 榕. 不同产地牡丹皮中丹皮酚含量测定J.福建中医药,1999 ,30 (4)：41.6 陈巧谋，陈 平，王 炜，等. 复方延胡索片中丹皮酚-环糊精包合物的制备研究J. 湖南中医药导报, 2003 , 9 (8) :53.7 尹永宇.丹皮酚提取工艺的研究J.中成药,1995 ,17 (9) :2.8 王立红，周丽莉， 雷 雪，等.超临界CO2 萃取徐长卿中丹皮酚的工艺J.沈阳药科大学学报, 2006 , 23 (1) :53.9 冯武文，杨 村，于宏奇. 分子蒸馏与日用化工J.日用化学工业,2002 , 32 (5) ：74.10周玉生 ,吴泽丰 ,陈顺烈.不同加工方法对牡丹皮中牡丹酚含量的影响J . 中国医院药学杂志 ,1992 ,12 (2) :72.11 杨 洁，贾国强，刘 萍，等. HPLC法测定不同产地牡丹皮中丹皮酚的含量J.科学技术与工程,2006,6(3)：299.12 李海燕，陈小坚. 牡丹皮中丹皮酚含量动态变化研究J.时珍国医国药, 2000, 11(3)：197.13高鲁霞 ,梁素谦 ,王苓 ,等.牡丹皮中丹皮酚和芍药苷的反相薄层色谱反相J