液相常见问题.docx

1. 如何排除流动相中的气泡？如何排出流动池中的气泡？避免流动相中产生气泡的最佳方式是将流动相经脱气装置进行脱气。如果没有脱气装置，则可以在流动相溶剂瓶中通入氦气进行脱气。也可以在检测器的出口端加一根细管线以调节流动池中的背压，但必须注意不要超过流动池的最大压力，否则会造成流动池漏液或流动池损坏。如果流动池中出现气泡，则先摘下色谱柱，用一根管线直接将流动相接入检测器的入口。将异丙醇以较大的流速注入流动池。直到基线上看不到毛刺为止。气泡就应该清除掉了。2 如何减少基线噪音？无规律噪音可能与污染有关。请冲洗色谱柱，对样品做合适的前处理以避免污染，并使用 HPLC 级别的溶剂。连续噪音有可能由检测器或泵造成。要确定问题是否发生在检测器还是在泵，请先关泵停掉流量，监测基线。如果此时基线平稳，则噪音可能与泵有关系。使用 ChemStation 在线诊断或 LC 手持控制器检查泵方面的故障。如果停泵后噪音继续存在，则说明噪音与检测器有关。首先，请尝试更换灯。如果问题依然存在，则请与安捷伦科技公司联系。在中国，请拨打 800 820 3278。3 什么原因导致基线毛刺？这很有可能是流动池内有气泡。请先停泵来进行确认，如果毛剌消失，则很有可能是由于流动池内有气泡。需要冲洗流动池。如果毛剌仍然存在，则需检查检测器本身的电噪音有关。如果需要更多帮助，则请致电安捷伦科技公司。在中国，请拨打 800 820 3278。4 色谱图上出现鬼峰。如何消除？可能的原因：1. 上次进样遗留组分产生2. 有污染3. 有气泡4. 色谱柱问题5. 保护柱失效建议用户：1. 做样品后应保证有足够时间冲洗色谱柱，有必要的话在运行结束后使用更强溶剂冲洗色谱柱。2. 洗脱原色谱柱中的原有污染。3. 为确保系统中没有气泡，只使用彻底脱气后的溶剂。4. 更换色谱柱。5. 更换保护柱。6. 检查流动相纯度。7. 检查样品中的其他成分5 如何决定何时更换保护柱？许多色谱人员在测试一定数量的样品和标准样后更换保护柱。样品数量通常由实验决定，在长时间未更换保护柱而造成分析柱破损时或样品分析数量增加，而保护柱需要更换。保护柱的更换频率通常根据经验而定，按照每个方法/样品类型综合考虑，但是许多分析人员会在完成一定数量的样品分析或测试一些柱的性能指标（例如增加 10% 峰展宽或拖尾因子，或降低 10% 的柱效（塔板数）后更换保护柱。6 什么原因导致液相色谱仪压力过高？可能的原因：1. 吹扫阀的 PTFE 虑芯堵塞。2. 压力上限设置太低。3. 压力传感器堵塞。建议的措施：1. 打开排气阀。如果压力依然很高，则更换排气阀的 PTFE 虑芯。2. 查看软件的压力上限设置并确保设置值适于分析。3. 检查系统内的堵塞部位。（如下所述）要检查是否堵塞，请采用隔离系统的方法来排除故障：将安装的色谱柱、预色谱柱和预色谱柱过滤器摘开。1. 如果压力恢复到正常值，则在色谱柱的位置安装 ZDV 接头。1. 如果压力正常，则色谱柱、预色谱柱或过滤器是产生问题的原因。请进行更换。2. 如果压力仍然很高，则在色谱柱的另一端查找堵塞位置（例如：通入检测器或从其通出的管路）。2. 如果取出色谱柱后压力依然很高，则检查从排气阀到自动进样器的管路。如果压力正常，则使用进样步骤命令将自动进样器的进样阀切换到路模式。1. 如果压力正常，则说明自动进样器堵塞。请检查针、针座、针座毛细管和转子密封垫。2. 如果压力依然很高，则检查从进样六通阀到色谱柱入之间口的管线。7 何时应更换泵密封圈？泵密封圈应定期更换。建议每个液相色谱仪用户建立一个泵密封圈更换的定期检修计划。这应根据泵的使用和流动相组成情况而定。由于它们易磨损的特点，盐缓冲大大加速密封圈和活塞的磨损。在活塞下面的泵头上检测到泄漏时，保留时间不稳定时，或系统压力不稳定时，都应更换密封圈。请按照以下程序更换所维护的泵的密封圈。8 当LC检测器灯强度测试没有通过时我该如何办?强度测试是内置的UV / Vis检测器诊断测试功能. 是用于测试光学单元在全波长范围内的性能。安捷伦化学工作站在多个波长范围测量检测器的光谱强度，针对每个范围的极限值报告Pass（通过） / Fail（失败）状态。这一测试的失败是由于1. 灯老化了2. 流通池中有吸光的溶剂/空气泡3. 流通池脏了 / 污染了4. 光学窗口/透镜等被污染了要纠正这些问题，需要在流通池充满水 / 并用足够的时间让检测器稳定。检查开灯的运行时间，并当其寿命到期时更换之。用甲醇/无棉布清洗光学窗口。9 标准HPLC柱和 RRLC柱有何区别?一般来说，RRLC (快速分离液相色谱)柱有较小的填料粒度 - 1.8 微米，而传统的柱为 2 到10 微米。由于填料粒度小，故比普通柱的操作压力(400 Bar)高(600 Bar )。10 我什么时候应当更换自动进样器阀的转子密封件?最经常的进样阀维护之一就是更换转子密封件。需要更换的标志包括：1. 转子密封件堵塞。2. 转子密封件中接头点之间泄漏。通过观察注射针从样品瓶抽取样品后抬起时，针头有流动相液滴渗出，就可判断接头点之间有泄漏。注意：接头点之间泄漏也可通过压力测试来判断。当您发现进样体积精度变差时，您可能首先要考虑接头点之间有泄漏。11 在我的二极管阵列检测器上，为什么在我更换了新的灯和流通池以后仍然有基线噪声和漂移？ 该问题应该与流速有关。拆下流通池检查基线。如果问题消除了，说明流通池被污染了(更换/清洗检测窗口)，或者泵/进样器有问题。或者该问题在光学系统或光学系统的部件。或者更换整个光源透镜组件（部件号 G1315-65201）(或者组件的单个部件，如光谱窗口，部件号 79880-28111 以及单色器透镜，部件号 1000-0486)，或者更换检测池支持窗口 G1315-65202。如果问题仍然存在，请联系您最近的安捷伦技术代表。12 什么时候需要更换溶剂输送模块（泵）的冲洗阀中的过滤芯?确定冲洗阀滤芯是否需要更换的常见方法是打开冲洗阀，设定甲醇流速为 1 ml/min。如果压力大于7 BAR，就应该更换滤芯。13 在进样过程中HPLC的自动进样器为什么有压力的突变?自动进样器进样阀中的转子密封垫可能部分堵塞了。请清洗转子密封垫或者更换之。14 怎样知道 UV 检测器的流动池被污染了？用工作站诊断功能作池体测试，是比较流动池二极管的样品边与参考边所测到的氘灯强度。强度比值的结果 (样品:参考) 是测试流动池吸收的光的量。测试可用来检验流动池窗口是脏了或者被污染了。用水通过流动池作测试。工作站自动计算强度比值。强度比取决于流动池窗口污染的程度。以及所用的流动池的类型。理想的比值是1，比值为7或更大也可以接受。比值较低，说明流动池窗口有一些涂层或者流动池里有气泡。更多的光被流动池吸收。用水冲洗流动池以去除污染物。这样可以来代替溶剂，用水来冲洗。这时样品溶解在水。15 什么是1100/1200自动进样器马达温度错误？传动部分的马达运行时所需电流过大，引起过热。处理器将马达关掉，以免损坏它。可能的原因:1. 机械故障。2. 传动部分摩擦力过大。3. 马达皮带张力过高。4. 马达损坏。5. 传动部分弯板损坏。建议:1. 关掉自动进样器电源开关。等至少10分钟之后再开开关。2. 确认传动部分的运动不受阻碍。3. 更换传动部分。16 为什么我的灯点不着？最大的可能是它已经超过使用期限了或者坏了。根据检测器类型作诊断测试。如果需要，更换灯。如果问题依然存在，请联系Agilent公司。17 用什么溶剂冲洗 LC 管线，以去除污染？已发现各含50%的IPA和水的混合溶液，能有效地除去HPLC系统的溶液管线里，毛细管里，以及流动池里的污染物。水能清除盐类和其他的污染物，IPA 能清除极性和非极性的污染物。准备一瓶各含50%的 IPA 和水的混合溶剂，并对溶剂脱气。将所有的溶剂管线连到这个瓶子里(例如连四元泵的 A,B,C 和 D 溶剂管线，连二元泵的 A 和 B 溶剂管线， 连单元泵的溶剂管线)。可以关掉所有检测器的灯，如果不希望IPA和水的混合液通过柱子时，可以在柱子的位置安装一个两通接头替换它。18 易弯折的不锈钢毛细管线外表面上的颜色标记是什么意思？Agilent 易弯折的不锈钢毛细管线外表面上的颜色标记，指示管子的内径 (ID)红色 指示内径为 0.12 mm 或者 0.005 英寸。绿色 指示内径为 0.17 mm.或者 0.007 英寸。蓝色 指示内径为 0.25 mm 或者 0.010英寸。桔色 指示内径为 0.50 mm 或者 0.020 英寸。19 蒸发光散射检测法的好处是什么？实质上可以检测到所有的化合物。检测基于所有分析物的通用属性，不需要存在发色基团和电活化基团等。检测器的响应直接与洗提过的化合物质量相关。可以获得无法识别化合物的精确定量分析数据。20 什么是蒸发光散射检测器或 ELSD？对于挥发性低于流动相的化合物，蒸发光散射检测器（ELSD）能够有效地执行敏感检测。 它提供了一种在等度和梯度条件下实质上通用的测量法，独立于化合物的吸收、荧光性或电活性。低温蒸发技术能够检测半挥发性性和低水平感热性化合物。21 H3PO4清洗 HPLC 色谱柱有什么目的？经证明，磷酸洗涤剂能有效减少由于样品与HPLC系统中的金属络合而导致的拖尾。一般建议用 1% 磷酸来清洗系统和色谱柱，以此消除这种脱尾现象，这很有效。在安捷伦 ZORBAX StableBond 反相 HPLC 产品上使用这些推荐的清洗条件会取得非常理想的效果。StableBond HPLC 色谱柱在低PH条件下性能非常稳定 - SB-C18 色谱柱在 0.8 PH值和 90癈条件下可保持稳定。如何肯定峰拖尾是由于金属络合而引起的？只要辨别N或O原子上的孤对电子能否与金属螯合并形成5 或者 6元环。 金属络合物是一个普遍被忽视的峰拖尾成因，每个HPLC系统中都存在金属。22 如何处理HPLC中的盐带来的问题?现在有很多问题是由于用户的流动相含有盐成分造成的。建议用户在清洗时将水加热后再冲洗，这样既可以将盐溶解的更好，也可以溶解一些脂溶性物质，会减少很多问题的发生，包括管路堵塞，盐析出，基线噪音23 HPLC出“鬼峰”，如何排除HPLC出“鬼峰” 大部分发生在反相体系（甲醇， 乙腈， 水），是溶剂被污染造成的。还有一种原因是进样系统有残留。正相色谱：固定相极性大于流动相极性反相色谱：固定相极性小于流动相极性 让用户运行一个空白梯度洗脱的方法，从100%水过渡到100%有机溶剂，如果“鬼峰”出现，可以判断是水被污染了（水中有藻类Algae的污染）。如果用户是使用纯水机制作的水，这种现象是最常见的。建议用户更换“娃哈哈” 纯净水。 进样系统有残留很容易判断，建议用户加强或改善洗针程序，延长冲洗Loop的时间。24 峰面积或峰高重现性不好，偏差大?如果HPLC系统配有自动进样器，这种情况主要是自动进样器的问题。 首先确认柱前压是稳定的，保留时间的重现性好（参见第1，2条） 将自动进样器的抽样速度降低到50ul/min以下 (默认值是200ul/min).您的样品有可能粘度较大，降低抽样速度可以极大地改善粘度较大的样品的进样精度。 如果进样针或针座有轻微的堵塞，对进样精度的影响也非常大。请参考第5条的处理办法。 如果是手动进样器，请确认一定要使用Agilent配的标准进样针，且进样器的废液出口要与进样口水平，避免虹吸的影响。如果是满Loop进样，建议注射5倍Loop的进样体积。25 柱前压不稳定，压力上下波动?引起这种故障最常见的原因是泵里有气泡，建议用以下的方法排除。 如果您的系统没有配置脱气机（二元泵），溶剂一定要经常超声脱气。 脱气机的效率不够，特别是用甲醇/水的系统最容易发生。可以将A，B通道串联；C，D通道串联用来延长脱气的时间，效果非常明显。主动阀阀芯污染。 可以将阀芯取下，用甲醇超声清洗。26 排气阀里的过滤经常芯堵塞?如果是排气阀里的过滤芯堵塞引起的压力升高，请仔细检查一下换下来的过滤芯。正常情况下，一个过滤芯可以使用6个月左右，如果经常更换就有问题。 如果过滤芯的颜色发黑，说明是被柱塞密封垫磨损下来的碎屑堵塞的，请确认流动相使用的缓冲盐的浓度是否太高了，是否使用了柱塞清洗装置。 缓冲液在泵头内部析出的盐的结晶会加速密封垫的磨损。 如果过滤芯的颜色是乳白色的，非常干净。说明过滤芯很有可能是被流动相污染了。 请检查一下您是否使用了过期的溶剂（水，有机溶剂），或质量不好的溶剂。请马上更换别的品牌的溶剂或使用纯净水（推荐：娃哈哈纯净水）。如果流动相经过了滤膜过滤，请确认是否使用了正确的，优质的滤膜。建议您先不要使用滤膜过滤流动相，看看是否可以解决过滤芯堵塞的问题。 如果存放缓冲液或水的溶剂瓶不经常清洗，该通路会生长藻类，藻类会污染整个流路系统和脱气机的腔体，藻类及其代谢产物也会堵塞过滤芯。如果发生了这种情况，建议用60度的热水清洗溶剂瓶，并用异丙醇清洗整个管路和脱气机。建议以后一定要用棕色瓶存放缓冲溶液，避光，并且