免疫比浊法测定PCT的方法学评价.doc

免疫比浊法测定PCT的方法学评价 PBL教学-天天向上团队第一部分1.1 查阅资料，讨论与交流 通过课后交流，及建立网上交流群，使我们的讨论取得了较好的成果。1.2 提出问题，分配问题 在经过几次交流后，我们提出了下列十个问题： 1、PCT定义及临床意义？ (王妍乐) 2、免疫比浊法的原理及分类？ （唐莉） 3、测定PCT的方法有哪些？ （尤倩） 4、如何评价免疫比浊法测定PCT？（张艳美） 5、精密度的评价？ （郑天宇） 6、精确度的评价？ （a.干扰试验 宁佳宝；b.回收试验 王彦洁； c.方法比较试验 龙曙萍） 7、检测限的评价？ （孟逍） 8、可报告范围及参考区间的验证? （魏小雪） （括号内表示相应负责解决问题的人）1.3 解决问题 在分配问题后，大家积极查阅文献，有不懂的或不理解的，我们会在交流群里一起讨论；我们也会将一些好的文献及资料进行共享。大家在相互学习和帮助中将问题都一一解决了，并制成了详细的精美PPT。第二部分2.1 实验讨论 在完成第一部分后，老师在第二部分中交给了我们一些数据，让我们进行数据的分析与讨论。 2.2 实验分配 经过一番讨论后，我们将实验具体分给了个人，如下： 1、干扰实验 （Hb：宁佳宝，胆红素：郑天宇，TG：孟逍） 2、批内重复实验 （魏小雪） 3、天间重复实验 （王彦洁） 4、不确定度测定 （张艳美） 5、回收试验 （王妍乐） 6、方法对比实验 （龙曙萍） 7、检出限 （尤倩） 8、可报告范围 （唐莉） （括号内表示负责相应实验的人） 2.3 实验结果与分析 a.干扰实验 1、Hb 实验结果：基础管PCT浓度：0.75ng/ml 干扰I PCT浓度：0.64ng/ml 干扰II PCT浓度：0.55ng/ml 结果分析：1）.干扰值计算： 干扰值I=干扰管I测定值基础管测定值=0.64-0.75=-0.11ng/ml 干扰值II=干扰管II测定值基础管测定值=0.55-0.75=-0.20ng/ml 2）.计算恒定系统误差：用干扰值的绝对值与EA进行对比，若小于EA则可接受，反之不可以。当Xc为0.25、0.5时，EA为0.22 ng/ml干扰值IEA，干扰值IIEA，当Xc为2.0时，EA为0.32 ng/ml干扰值IEA，干扰值IIEA，当Xc为10.0时，EA为1.25ng/ml干扰值IEA，干扰值IIEA，所以，当TG浓度为1.0mmol/L,10.0mmol/L时，其干扰作用所产生的恒定误差小于允许分析误差，故免疫透射比浊法测定PCT的恒定误差可接受。 2、TG 实验结果；基础管PCT浓度：0.75ng/ml 干扰I PCT浓度：0.77ng/ml 干扰II PCT浓度：0.74ng/ml 结果分析：1）.干扰值计算： 干扰值I=干扰管I测定值基础管测定值=0.77-0.75=0.02ng/ml 干扰值II=干扰管II测定值基础管测定值=0.74-0.75=-0.01ng/ml 2）.计算恒定系统误差：用干扰值的绝对值与EA进行对比，若小于EA则可接受，反之不可以。当Xc为0.25、0.5时，EA为0.22 ng/ml干扰值IEA，干扰值IIEA，当Xc为2.0时，EA为0.32 ng/ml干扰值IEA，干扰值IIEA，当Xc为10.0时，EA为1.25ng/ml干扰值IEA，干扰值IIEA，所以，当TG浓度为1.0mmol/L,10.0mmol/L时，其干扰作用所产生的恒定误差小于允许分析误差，故免疫透射比浊法测定PCT的恒定误差可接受。 3、胆红素 实验结果：0.02 EA -0.14 EA 结果分析：当胆红素的病理值达到0.2g/L，10.0g/L时，其干扰作用产生的恒定误差小于医学决定水平，故免疫比浊法的恒定误差可接受。 b、批内重复实验 （魏小雪） 标准品1（浓度0.25ng/ml）: = = 0.25 ng/m S = = 0.017 CV = 100% = 6.8 % 标准品2（浓度2.0 ng/ml）： = = 2.02 ng/ml S = = 0.27 CV = 100% = 13.37 % 标准品3（浓度10.0 ng/ml）: = = 10.03 ng/ml S = = 0.02 CV = 100% = 0.19 % 结果分析：当1.96S Ea 时(Ea 为某一医学决定水平下的允许分析误差， S为标准差)，随机误差（RE）可接受；反之随机误差（RE）不可接受。 已知PCT测定：Xc为0.25；0.5；2.0时EA为0.22 ng/ml Xc为2.0时EA为0.32 ng/ml Xc为10.0时EA为1.25ng/ml 所以， 当Xc为0.25时，1.96S=0.033，即1.96SEa，RE不可接受。 当Xc为10.0时，1.96S=0.039，即1.96SEa，RE可接受。c、天间重复实验 （王彦洁） 标准品1（浓度0.25ng/ml）: = = 0.26 ng/ml S = = 0.02 CV = 100% = 7.69 % 标准品2（浓度2.0 ng/ml）： = = 1.94 ng/ml S = = 0.41 CV = 100% = 21.13 % 标准品3（浓度10.0 ng/ml）: = = 10.02 ng/ml S = = 0.20 CV = 100% = 2.00 % 【结果判断】:当1.96S Ea 时(Ea 为某一医学决定水平下的允许分析误 差，S为标准差)，随机误差（RE）可接受；反之随机误差（RE）不可接受。已知PCT测定： Xc为0.25；0.5；2.0时EA为0.22 ng/ml Xc为2.0时EA为0.32 ng/ml Xc为10.0时EA为1.25ng/ml 所以，当Xc为0.25时，1.96S=0.04，即1.96SEa，RE不可接受。 当Xc为10.0时，1.96S=0.39，即1.96SEa，RE可接受。 d、不确定度测定 （张艳美） 【结果与计算】30次重复测量结果为0.55；0.50；0.46；0.47；0.59；0.58； 0.47；0.42；0.49；0.58；1.55；0.53；0.56；0.44；0.48；0.42；0.58；0.51；0.52；0.53；0.47；0.45；0.46；0.50；0.51；0.58；0.52；0.57；0.55；0.53将数值带入计算：平均值X=0.5457 A类不确定度UA=s=0.588（由于数据中缺少a1、a2，而且查资料也未能找到，所以无法计算出B不确定度UB、合成不确定度U以及扩展不确定度U95） 【结果报告】此样本测量的平均值是0.5457，不确定度为U95,其95%的置信区间为（0.5457-U95，0.5457+U95）。 e、回收试验 （王妍乐） 实验结果：平均回收率为118.1%，比例误差为-18.1%。 结果判断：PCT测定的医学决定水平(XC)为0.25ng/ml、0.5ng/ml时，相应的允许分析误差(EA)为0.22ng/ml；XC为2.0ng/ml时，EA为0.32ng/ml；XC为10.0时，EA为1.25ng/ml。当XC=0.25，PE=（|R-100|)(XC/100)=0.05EA，PE可接受当XC=0.5，PE=（|R-100|)(XC/100)=0.09EA，PE不可接受当XC=10.0，PE=（|R-100|)(XC/100)=1.81EA，PE不可接受（R：平均回收率；PE：比例误差）当XC=0.25，XC=0.5时免疫透射比浊法测定PCT浓度的比例误差可接受。 f、方法对比实验 （龙曙萍） 实验结果：线性回归方程为：Y=0.0687+1.2645x 结果分析：当Xc为0.25时（a+bXc）-Xc=0.1348 EA 当Xc为0.5时；（a+bXc）-Xc=0.200 EA 当Xc为2.0时；（a+bXc）-Xc=0.5977 EA 当Xc为10.0时；（a+bXc）-Xc=2.7137 EA 实验结论：当Xc为0.25；0.5时都有 （a+bXc）-XcEA，系统误差可以接 受，免疫比浊法测定pct可以接受。恒定误差为0.0687，比例误差为1.2645。 当Xc为2.0；10.0时 （a+bXc）-Xc EA，系统误差不可以接受，免疫比浊法测定pct不可以接受。 g、检出限 （尤倩） 实验分析：1.检测低限：97.7%可能性：0.178； 2.生物检测限：97.7%可能性：祥见第二部检测象中的数表。 3.功能灵敏度：从结果可得样品3重复检测变异系数CV为 24.78%，最接近20%，此时检测限浓度为0.561，因此，本法的功能灵敏度为0.561。 h、可报告范围 （唐莉） 实验结果：Y=0.7996X+0.0178 ，相关系数r=0.7996 结果分析：免疫比浊法测定PCT的分析测量范围为0.150ng/ml.第三部分结论与总结：通过以上实验的结果和数据分析，可知： 1、免疫比浊法测定PCT的分析测量范围为0.150ng/ml. 2、检测低限：97.7%可能性：0.178；功能灵敏度为0.561。 3、方法比较试验：当Xc为0.25；0.5时都有 （a+bXc）-XcEA，系统 误差可以接受，免疫比浊法测定pct可以接受。恒定误差为0.0687，比例误差为1.2645。当Xc为2.0；10.0时 （a+bXc）-Xc EA，系统误差不可以接受，免疫比浊法测定pct不可以接受。 4、回收试验：当XC=0.25，XC=0.5时免疫透射比浊法测定PCT浓度的比例误差可接受；当XC=2.0，XC=10时免疫透射比浊法测定PCT浓度的比例误差不可接受。 5、不确定度测定：不确定度为U95,其95%的置信区间为（0.5457-U95，0.5457+U95）。 6、天间重复试验：当Xc为0.25时，1.96S=0.04，即1.96SEa，RE不可接受。 当Xc为10.0时，1.96S=0.39，即1.96SEa，RE可接受。 7、批内重复试验：当Xc为0.25时，1.96S=0.033，即1.96SEa，RE不可接受。 当Xc为10.0时，1.96S=0.039，即1.96SEa，RE可接受。 8、干扰试验：a.胆红素：当胆红素的病理值达到0.2g/L，10.0g/L时，其干扰作用产生的恒定误差小于医学决定水平，故免疫比浊法的恒定误差可接受。 b.TG：当TG浓度为1.0mmol/L,10.0m