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文档简介

番茄与马铃薯体细胞杂交培养实验意义：植物体细胞杂交能实现远远杂交，打破了仅仅依赖有性杂交重组基因创造新种的界限，有可能获得有性杂交无法获得的新型杂交植物，扩大了遗传物质的重组范围。实验原理：1植物细胞有细胞壁，用含有纤维素酶和果胶酶的酶液可将其去除，形成原生质体。2聚乙二醇（PEG）可作为促融剂促进原生质体细胞核的融合。 诱导原理：PEG分子带有的大量负电荷和原生质体表面的负电荷间在钙离子的连接下形成静电键，促使异源的原生质体间的黏着而结合。用高Ca和高pH溶液将与质膜结合的PEG分子进行洗脱，导致电荷平衡失调并重新分配，使两种原生质体上的正负电荷连接起来，进而形成具有共同质膜的融合体。膜融合：接触诱导（细胞质桥出现）融合稳定 实验原料和试剂番茄叶，马铃薯根尖，含有纤维素酶和果胶酶的酶液，PEG，灭菌高渗缓冲液（NAH2PO4），MS培养基，0.05 molL CaCl22H20光照培养箱，锥形瓶，平皿，无菌操作试验台。实验步骤：1取材：番茄叶，马铃薯根尖各1g,切成0.5cm见方放入小平皿中；2取酶液：将含有纤维素酶和果胶酶的酶液加入灭菌高渗缓冲液（NAH2PO4）制备；3酶解：将制备好的酶液加入小平皿中放入25。C的培养箱酶解，约4小时；4过滤离心：用铜网将未酶解的杂质过滤掉，将滤液收集在10ml离心管，1500转离心2分钟，用吸管吸走上清液；4. PEG融合:用0.05 molL CaCl22H20悬浮原生质体，将两种原生质体悬液等量混合后用刻度吸管将混合的原生质体悬液滴在直径为60mm的平皿中，每皿7-8滴，每滴约0.1ml.然后静置十分钟，使原生质体贴在皿低，形成一薄层（应有3-5个平皿的重复）；5. 用吸管将等量的PEG溶液缓慢的加在原生质体液滴上，再静置10-15分钟。此时可取一个平皿在倒置显微镜上观察原生质体间的粘连情况。此时，新的细胞壁已经形成；6. 组织培养：将融合的细胞分别放入10组含MS培养基的锥形瓶进行培养.光照培养基16-26 。C，16小时光照条件下培养4周，可长成完整植株，能用于田间移栽。注意事项：1. 融合细
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