平板计数琼脂培养基.doc

PCA平板计数琼脂培养基平板计数琼脂培养基即PCA，是在08GB中用于菌落总数测定的配方：1、成分 胰蛋白胨 5.0g 酵母浸粉 2.5g 葡萄糖 1.0g 琼脂 15.0g 蒸馏水 1000mlpH 7.0士0.22、制法： 将上述成分加于蒸馏水中，煮沸溶解，调节pH。分装试管或锥形瓶，121高压灭菌15min。 LST 月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤简称LST，在08GB中是用于大肠菌群的检测，大肠杆菌的计数，金黄色葡萄球菌的检测。配方：1、成分： 胰蛋白胨或胰酪胨 20.0g 氯化钠 5.0g 乳糖 5.0g 磷酸氢二钾 2.75g 磷酸二氢钾 2.75g 月桂基磺酸钠 0.1g 蒸馏水 1000mlpH 6.8士0.22、制法： 将上述成分溶解于蒸馏水中，调节pH ，分装到有玻璃小导管的试管中，每管10ml。121高压灭菌15min。 煌绿乳糖胆盐肉汤 BGLB煌绿乳糖胆盐肉汤简称BGLB，在08国标中是用于大肠菌群的检测配方：1、成分： 蛋白胨 10.0g 乳糖 10.0g 牛胆粉溶液 200.0ml 0.1%煌绿水溶液13.3ml 蒸馏水 1000mlpH 7.2士0.12、制法： 将蛋白胨、乳糖溶解于500ml蒸馏水中，加入牛胆粉溶液200.0ml（将20.0g脱水牛胆粉溶于200ml的蒸馏水中，pH7.0-7.5）用蒸馏水稀释到975ml，调节pH至7.4，再加入0.1%煌绿水溶液13.3ml，用蒸馏水补足到1000ml，用棉花过滤后，分装到有玻璃小导管的试管中，每管10ml。121高压灭菌15min。 V-P试剂Voges-Proskauer试剂V-P试剂是Voges-Proskauer试剂的简称，用于副溶血性弧菌的V-P试验。配方：1、成分甲液 -萘酚 5.0g 无水乙醇 100.0ml乙液 氢氧化钾 40.0g 用蒸馏水加至1000ml2、试验方法 将3%氯化钠胰蛋白胨大豆琼脂生长物接种3%氯化钠MR-VP培养基，36士1培养48h。取1ml培养物转放到一个试管内，加0.6ml甲液，摇动。加0.2ml乙液，摇动。随意加一点肌酸结晶，4h后观察结果。阳性结果是呈伊红的粉红色。 尿素培养基尿素培养基是尿素酶琼脂培养基中去掉琼脂的培养基，是用于小肠结肠炎耶尔森氏菌检验。配方：1、成分 尿素 20.0g 酵母浸粉 0.1g 磷酸二氢钾 0.091g 磷酸氢二钠 0.095g 酚红 0.01g 蒸馏水 1000ml2、制法 将上述成分于蒸馏水中溶解，校正pH6.8士0.2.不需要加热，过滤除菌，无菌分装于灭菌小试管中，每管为3ml。3、试验方法 挑取琼脂培养基接种于尿素培养基，26士1培养24h。尿素酶阳性者由于产碱而使培养基变成红色。改良CCD琼脂mCCDmCCD是改良CCD琼脂的简写，在08GB中是用于空肠弯曲菌检验的。配方：1、 基础培养基：成分： 肉浸液 10.0g 动物组织酶解物 10.0g 氯化钠 5.0g 木炭 4.0g 酪蛋白酶解物 3.0g 去氧胆酸钠 1.0g 硫酸亚铁 0.25g 丙酮酸钠 0.25g 琼脂 8.0g-18.0g 水 1000ml制法：用水溶解基础培养基成分，煮沸。分装至合适的三角瓶内，121高压灭菌15min。2、 抗生素溶液成分头孢哌酮 0.032g两性霉素 0.01g利福平 0.01g乙醇/灭菌水（50/50，体积比）5ml制法：将上述成分溶解于乙醇/灭菌水混合溶液中。3、 完全培养基：成分： 基础培养基 1000ml 抗生素溶液 5ml制法：当基础培养基的温度约为45左右时，加入抗生素溶液，混匀。待完全培养基的pH值调至7.2士0.2（25）。倾注约15ml于无菌平皿中，静置至培养基凝固。使用前需预先干燥平板。可将平皿盖打开，使培养基面朝下，置于干燥箱中约30min，直到琼脂表面干燥。预先准备的平板未干燥时在室温放置不得超过4h，或在4左右冷藏不得超过7.4.Bulton肉汤在08国标中，Bulton肉汤是用于空肠弯曲菌检验的。配方：1、 基础培养基成分：动物组织酶解物 10.0g乳白蛋白水解物 5.0g酵母浸粉 5.0g氯化钠 5.0g丙酮酸钠 0.5g偏亚硫酸氢钠 0.5g碳酸钠 0.6g-酮戊二酸 1.0g 水 1000ml制法用水溶解基础培养基成分，如需要可使用加热促其溶解。将基础培养基分装至合适的锥形瓶内，121灭菌15min。2、 无菌裂解脱纤维绵羊或马血对无菌脱纤维绵羊或马血通过反复冻融进行裂解或使用皂角昔进行裂解。3、 抗生素溶液成分头孢哌酮（cefoperazone) 0.02g万古霉素（vancomycin) 0.02g三甲氧苄氨嘧啶乳酸盐（trimethoprimlactate) 0.02g两性霉素B(amphotercin B) 0.01g多粘菌素B(polymyxin B) 0.01g乙醇灭菌水（50/50，体积比） 5mL制法将上述成分溶解于乙醇灭菌水混合溶液中。4、 完全培养基成分基础培养基（A.1.1) 1000mL无菌裂解脱纤维绵羊或马血（A.1.2)50mL抗生素溶液（A.1.3) 5mL制法当基础培养基的温度约为45左右时，无菌加人绵羊或马血和抗生素溶液，混匀，将完全培养基的pH值调至7.2士0.2(25），将培养基无菌分装至合适的试管或锥形瓶中备用。配制的增菌液在常温下放置不得超过4h，或在4左右避光保存不得超过7d。Mueller Hinton琼脂 MH琼脂MH琼脂是Mueller Hinton琼脂的简称，用于空肠弯曲菌的检测配方：1、 基础培养基成分动物组织酶解物6.0g酪蛋白酶解物17.5g可溶性淀粉1.5g琼脂5.0915.0g水1000mL制法将基础培养基成分溶解于水中，煮沸。将基础培养基分装于合适的三角瓶中，121高压灭菌15min。2、 无菌脱纤维绵羊血无菌操作条件下，将绵羊血加人到盛有灭菌玻璃珠的容器中，振摇约10min，静置后除去附有血纤维的玻璃珠即可。3、 完全培养基成分基础培养基（A.7.1) 1000mL无菌脱纤维绵羊血（A.7.2) 50mL制法当基础培养基的温度约为45左右时，无菌加人绵羊血，混匀。根据需要，将完全培养基的pH值调至7.2士0.2(25）。倾注约15mL于灭菌平皿中，静置至培养基凝固。使用前需预先干燥平板。可将平皿盖打开，使培养基面朝下，置于干燥箱中约30min，直到琼脂表面干燥。预先制备的平板未干燥时在室温放置不得超过4h，或在4左右冷藏不得韶讨7d_ 哥伦比亚琼脂哥伦比亚琼脂就是哥伦比亚血琼脂，用于用空肠弯曲菌的检测。配方1、基础培养基成分动物组织酶解物 23.0g淀粉 1.0g氯化钠 5.0g琼脂 8.0g18.0g水 1000ml制法将基础培养基成分溶解于水中，加热促其溶解。分装至合适的三角瓶内，121高压灭菌15min。2、无菌脱纤维绵羊血无菌操作条件下，将绵羊血加人到盛有灭菌玻璃珠的容器中，振摇约10min，静置后除去附有血纤维的玻璃珠即可。3、完全培养基组分基础培养基（A.3.1) 1000mL无菌脱纤维绵羊血（A.3.2) 50mL制法当基础培养基的温度为45左右时，无菌加人绵羊血，混匀。将完全培养基的pH值调至7.2士0.2(25）。倾注15mL于无菌平皿中，静置至培养基凝固。使用前需预先干燥平板。可将平皿盖打开，使培养基面朝下，置于干燥箱中约30min，直到琼脂表面干燥。预先制备的平板未干燥时在室温放置不得超过4h，或在4左右冷藏不得超过7d。脑心浸出液肉汤BHIBHI是脑心浸出液肉汤的简写，08GB中用于金黄色葡萄球菌的检测。配方：1、成分胰蛋白质胨 10.0g 氯化钠 5.0g磷酸氢二钠（Na2HPO412H2O ) 2.5g葡萄糖 2.0g 牛心浸出液500 mL pH7.40.2 2、 制法加热溶解，调节pH ，分装16 mmX160 mm 试管，每管5 mL ，置121 ，15 min 灭菌。10氯化钠胰酪胨大豆肉汤LSTLST是10氯化钠胰酪胨大豆肉汤的简称，是用于08GB中金黄色葡萄球菌的检测。配方：1、成分胰酪胨（或胰蛋白胨） 17g植物蛋白胨（或大豆蛋白胨）3g氯化钠 100g磷酸氢二钾 2.5g 丙酮酸钠 10g 葡萄糖 2.5g 蒸馏水 1000ml pH 7.30.2 2 制法将上述成分混合，加热，轻轻搅拌并溶解，调节pH ，分装，每瓶50 mL , 121oC 高压灭菌15 minMRS培养基在08GB中，MRS培养基是用于食品中乳酸菌检测的。配方：1、成分蛋白陈 10.0g牛肉粉 5.0g酵母粉 4.0g葡萄糖 20.0g吐温80 1.0mL磷酸氢二钾2.0g乙酸钠 5.0g柠檬酸三铵2.0g硫酸镁 0.2g硫酸锰 0.05g琼脂粉 15.0g蒸馏水 1000mL2、制法 将上述成分加人蒸馏水中，加热溶解，校正pH 6.2，分装后121高压灭菌15min20min。MC培养基在08GB中，MC培养基是用于食品中乳酸菌检测的。配方：1、成分大豆蛋白陈 5.0g牛肉粉 3.0g酵母粉 3.0g葡萄糖 20.0g乳糖 20.0g碳酸钙 10.0g琼脂 15.0g蒸馏水 1000ml1中性红溶液 5.0ml2、制法将前面7种成分加人蒸馏水中，加热溶解，校正pH6.0，加人中性红溶液。分装后121高压灭菌15min20min。0.5%蔗糖发酵管在08GB中，0.5%蔗糖发酵管是用于食品中乳酸菌生化鉴定的。0.5%纤维二糖发酵管在08GB中，0.5%纤维二糖发酵管是用于食品中乳酸菌生化鉴定的。0.5%麦芽糖发酵管在08GB中，0.5%麦芽糖发酵管是用于食品中乳酸菌生化鉴定的。0.5%甘露醇发酵管在08GB中，0.5%甘露醇发酵管是用于食品中乳酸菌生化鉴定的。0.5%水杨苷发酵管在08GB中，0.5%水杨苷发酵管是用于食品中乳酸菌生化鉴定的。0.5%山梨醇发酵管在08GB中，0.5%山梨醇发酵管是用于食品中乳酸菌生化鉴定的。0.5%乳糖发酵管在08GB中，0.5%乳糖发酵管是用于食品中乳酸菌生化鉴定的。七叶苷发酵管在08GB中，七叶苷发酵管是用于食品中乳酸菌生化鉴定的。VRB-MUG琼脂在08GB中是用于大肠杆菌计数。配方：1、成分：蛋白陈 7.0g 酵母膏 3.0g乳糖 10.0g氯化钠 5.0g胆盐或3 号胆盐 1.5g中性红 0.03g结晶紫0.002g琼脂15g琼脂18g蒸馏水1000.0mL 4-甲基伞形酮-D-葡萄糖苷（MUG ) 0.1g pH7.40.1 2、制法将上述成分溶于蒸馏水中，静置几分钟，充分搅拌，调节pH 。煮沸2 min ，冷却至4550 使用。缓冲蛋白胨水 BPWBPW是缓冲蛋白胨水的简称，在08GB中用于阪崎杆菌检验和沙门氏菌的前增菌。配方：1、 成分蛋白胨 10g氯化钠 5g磷酸氢二钠9g磷酸二氢钾1.5g蒸馏水 1000mlpH 7.2 2、制法加热搅拌至溶解，调节pH,121高压灭菌15 min 。改良月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤一万古霉素 mLST-Vm mLST-Vm 是改良月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤一万古霉素的简称，是用于坂崎杆菌检验。配方：1、改良月桂基硫酸盐胰蛋白胨（mLST ）肉汤成分 氯化钠 34.0g 胰蛋白胨 20.0g 乳糖 5.0g 磷酸二氢钾 2.75g 磷酸氢二钾 2.75g 十二烷基硫酸钠 0.1g 蒸馏水 1000mL pH 6.80.2 制法 加热搅拌至溶解,调节pH 。分装每管10mL,121 高压灭菌15 min 。2、万古霉素溶液成分 万古霉素 10.0 mg 蒸馏水 10.0mL 制法10.0mg万古霉素溶解于10.0mL 蒸馏水,过滤除菌。万古霉素溶液可以在0-5 保存15 天。3、改良月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤一万古霉素 每10mL mLST 加人万古霉素溶液0.1mL，混合液中万古霉素的终浓度为10g/mL 。注意：mLS-Vm 必须在24h 之内使用。阪崎肠杆菌显色培养基 DFI琼脂DFI琼脂是阪崎肠杆菌显色培养基的简称，是用于阪崎肠杆菌的分离培养。配方：1、成分胰蛋白胨 15.0g 大豆蛋白胨 5.0g 氯化钠 5.0g 柠檬酸铁按 1.0g 硫代硫酸钠 1.0g 脱氧胆酸钠 1.0g 5-溴-4-氯-3-吲哚-D-吡喃葡萄糖 0.1g 琼脂 15g 蒸馏水 1000mL pH 7.30.2 2、制法 加热搅拌至完全溶解，调节pH，121 高压15min，冷却至50，倾注平板。4% 2,3,5一氯化三苯四氮唑水溶液 TTCTTC是2,3,5一氯化三苯四氮唑的简称，在08GB是中用于鲜乳中抗生素残留检验。配方：1、成分2,3,5一氯化三苯四氮哩（TTC) 1g灭菌蒸馏水 5mL2、制法称取TTC，溶于灭菌蒸馏水中，装褐色瓶内于2一5保存。如果溶液变为半透明的白色或淡褐色，则不能再用。临用时用灭菌蒸馏水5倍稀释，成为4水溶液。溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨培养基在08GB中，溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨培养基是用于鲜乳中抗生素残留检验。配方：1、成分蛋白胨 10.0g葡萄糖 5.0g2漠甲酚紫乙醇溶液 0.6mL琼脂 4.0g蒸馏水 1000mL2、制法 在蒸馏水中加人蛋白陈、葡萄糖、琼脂，加热搅拌至完全溶解，调节pH至7.10.1，然后再加人嗅甲酚紫