罗氏Roche潮霉素B说明书北京.doc

潮霉素B Hygromycin罗氏潮霉素B（说明书） Roche原装 20ml;浓度50mg/ml作用机制： 潮霉素B是由吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus)代谢产生的一种氨基糖苷类抗生素，通过抑制蛋白质合成而杀死细菌、真菌和高等真核细胞。潮霉素B通过干扰70S核糖体易位和诱导对mRNA模板的错读而抑制蛋白合成。目前常用于筛选和维持培养含潮霉素抗性基因的原核或真核细胞。 抗性基因： 对潮霉素B的抗性源自编码潮霉素B磷酸转移酶（Hph）的基因。至今发现两种来源： Streptomyces hygroscopicus产生的Hph抗性基因； Escherichia coli，Klebsiella pneumoniae内质粒携带的Hph抗性基因（常用）； 生物应用： 1） 筛选和维持培养稳定转染Hph+载体的原核细胞或真核细胞（植物细胞和哺乳动物细胞）； 2） 由于作用模式的差异，常与G418 (GeneticinTM)，Zeocin 和blasticidin S联合使用，筛选稳定转染两个不同载体的细胞株；双抗性稳定转染细胞筛选的抗生素作用机制及抗性抗生素抗性机制抗性基因哺乳动物筛选浓度潮霉素B干扰70S核糖体易位和诱导对mRNA模板的错读Hph200500g/mLG418干扰80S核糖体功能和抑制蛋白合成Tn5/Tn6011001000g/mLZeocin掺入或者切割DNA引起细胞死亡Sh ble50100g/mLblasticidin S核糖体上抑制肽键形成Bsd/BSD350g/mL3）抗病毒剂，由于潮霉素B选择性渗透进入因病毒感染增强通透性的细胞，而且具有抑制翻译的功效；4）作为驱虫药加入动物饲料； 应用浓度： 潮霉素B用来筛选稳转株的工作浓度需要根据细胞类型，培养基，生长条件和细胞代谢率而变化。推荐使用浓度为50-1000 g/mL，最佳浓度需要杀灭曲线来确定。 哺乳动物细胞200-500 g/mL；细菌/植物细胞100-300 g/mL；真菌300-1000 g/mL； 产品使用：使用一：杀灭曲线确定最佳杀死浓度（仅作参考，因个人检测体系而异）（1）往组织培养级的96孔板内加入未转染细胞，细胞密度约50-200细胞/孔；细胞贴壁之后，往每孔加入含不同浓度（如50-1000g/mL，至少5个浓度）潮霉素B的200L新鲜培养基；（2）37，5% CO2培养箱孵育细胞10-14天；（3）培养5-7天后更换新的培养液，培养液内含有相应浓度的潮霉素B；（4）10-14天后使用细胞增殖方法如MTT，CCK-8等评估细胞活力；也可以通过检测细胞克隆数或百分比汇合率来确定毒性效应。一般选择在10-14天能够杀死所有细胞的最小浓度为最佳筛选浓度。使用二：筛选稳定转染细胞（1） 对于贴壁细胞，直接吸去60mm培养皿内的转染细胞培养基，然后加入含有潮霉素B的新鲜培养基5-6ml；对于悬浮细胞，无菌条件250x g,离心10min除去旧的转染细胞培养基，然后悬浮在约5ml的含潮霉素B的新鲜培养基；（2） 5-7天后，如上方法更换含有潮霉素B的新鲜培养基；（3） 再孵育细胞5