载脂蛋白E 基因多态性与早发冠心病及血脂含量的关系.doc

【摘要】 目的：研究载脂蛋白E （ApoE ）基因多态性与早发冠心病（C H D ）的相关关系及其对血脂水平的影响。方法：应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PC R -R FLP ）基因分析方法，测定92 例早发C H D 、237 例迟发C H D 患者和220 名对照者的ApoE 基因型。血脂水平按常规方法测定。结果：发现的5 种ApoE 基因型，分别为E33 、E22 、E32 、E43 及E42 。早发C H D 组和迟发C H D 组A poE 43 基因型和4 等位基因频率均高于对照组（P 0105 ， 0101 ）；进一步对两组C H D 患者的ApoE 多态性进行分析，发现早发组4 等位基因频率较迟发组高（P 0105 ）。A poE 各等位基因型的T C 和L D L2C 水平存在统计学差异（P 0105 ）。结论：ApoE 基因多态性与早发C H D 的发生发展有关，并影响血脂的水平。 【关键词】 冠状动脉疾病；载脂蛋白E 类；基因；高血压 Association of apolipoprotein E gene polymorphism with early2onset coronary heart disease and itsinfluence on the plasmalipid levelC H U Yurong ，C H U Zhihui，Z H U YingzhaoChinese Journal of Cardiovascular Rehabilitation M edicine ， 2007 ，16 （4 ）：334 Abstract：Objective ：To detect the association of apolipoprotein E（A po E ）gene poly morphism with early2onset coro2nary heart disease（C H D ）and to evaluate the influence of A po E gene polymorphism on plasma lipid levels .M ethods ：The Apo E genotypes of 92 early2onset C H D patients （age 38 ， 55 years ），237 aged C H D patients and 220 controlswere determined by PC R -R FLP .Plasma lipid levels were measured by using routine methods .Results ：Five geno2 types of A po E ，E33 ，E22 ，E32 ，E43 and E42 were detected in this study .The A po E 43 and 4 frequencies ofearly2onset aged C H D patients were more than those of controls （P 0105 ， 0101 ）.The frequency of 4 in the ear2ly2onset C H D patients was higher than thatin the aged C H D patients （P 0105 ）.The 4 and 2 alleles also differentlyaffected the plasma total cholesterol and low density lipoprotein cholesterollevels （P 0105 ）.Conclusion ：These re2sults suggest that Apo E gene polymorphisms is association with the occurrence and develop ment of early2onset C H Dand it affects the plasma lipid levels . Key words ：Coronary artery disease ；Apolipoprotein E ；Gene ；H yperlipoidemia冠心病（C H D ）的病理基础是动脉粥样硬化。动脉粥样硬化形成受多种因素的影响，其中脂质沉积发挥重要作用。载脂蛋白E （A poE ） 是血浆中主要载脂蛋白之一，具有多态性，其不同异构体与受体的结合活性有较大差异，从而对血脂、脂蛋白代谢和C H D 的发病产生较大影响1 ， 3 。我们应用聚合酶链反应限制性片段长度多态性（poly merasechain reaction2restricted frog men length poly mor2phism ，PC R -R FLP ） 方法， 检测了早发、迟发C H D 患者与对照者的A po E 基因型， 目的在于探讨A po E 基因遗传变异与多态性对早发C H D 的作用及其对血脂水平的影响。 1 资料与方法 1.1 一般资料 样品来源于2003 年10 月至2004 年11 月住院患者，早发C H D 组92 例，男50 例，女42 例，年龄38 ， 57 ， 平均（4816 410 ） 岁； 迟发C D H 组237 例，男135 例， 女102 例，年龄60 ， 89 ，平均（6719 515 ）岁。对照组220 例门诊体检者，汉族，男121 例，女99 例，年龄46 ， 76 ，平均（6314 610 ）岁。C H D 分组年龄的界定参照中国医学科学院重点项目冠心病遗传因素的研究进展”4 。C H D诊断按照1981 年全国冠心病诊断标准确定。对照组均未患C H D 。研究个体之间无血缘关系。 1.2 方法 所有受试对象均空腹12 ， 14h 后，于清晨6 ， 7时取卧位肘静脉血，置E D T A 和肝素抗凝血各一管，分别供血脂检测和载脂蛋白E 基因分型用。血脂检测： 高血脂症根据W H O 诊断标准甘油三酯（T G ） 517 m m olL 和（或） 总胆固醇（T C ） 117 m m olL 确诊，排除肝、肾、甲状腺病变和糖尿病等。用酶法测定血清总胆固醇（T C ）、甘油三酯（T G ）和低密度脂蛋白胆固醇（L D L2C ）； 免疫比浊法测定载脂蛋白A1 和载脂蛋白B100 ；直接法测定高密度脂蛋白胆固醇（H D L2C ）。A po E 基因型测定：按常规方法提取D N A 。上游引物：5-T C2 C A A G G A G C T G C A G G C G G C G C A -3，下游引物：5 - A C A G A A T T C G C C C C G G C C T G G T A C A C T2 G C C A -3。 PC R 反应体系为1215 l，其中包含模板基因组D N A 50 ， 100 ng ，4 脱氧核糖核苷三磷酸（dN T Ps ）各215 m m ol，PC R 引物A po E 前引物 （F ）、A po E 后引物（R ）各5 mol，D N A 聚合酶（rTaq ）015 U ，二甲亚砜（D M S O ）015 l。 PC R 循环条件采用Touch Dow n 程序： （1 ）94 30s ，68 30s （每个循环降低015 ），72 30s ，共12 个循环；（2 ）94 30s ，62 30s ，72 30s ，共20 个循环。 反应产物1 %琼脂糖凝胶电泳，紫外线分析仪检测227bp PC R 特异性扩增产物。使用H haI 限制性内切酶37o C 水浴消化6 h 。8 %聚丙烯酰胺凝胶电泳分离酶切产物，以Pbr 322M spI M arker 酶切片段作为D N A 片段的标准物。用银染的方法进行显带。 经特异性限制性内切酶消化后，可出现6 种片段大小的组合：即E33 ：91 ，48bp ；E22 ：91 ，81bp ； E32 ：91 ，81 ，48bp ；E34 ：91 ，72 ，48bp ；E24 ：91 ，81 ，72 ，48bp ；E44 ：72 ，48bp 。 1.3 统计分析 计量资料组间比较采用t 检验，两组以上采用一步法A N O V A 检验，用Bonferroni 方法进行两两比较。分类资料的组间比较用x2 检验。 2 结果 2.1实验结果 图1 为A poE 基因PC R 扩增结果；图2 为PC R片段经酶切后，检测到5 种A poE 基因型，分别为E33 、E32 、E43 、E42 及E22 ； 未发现E44基因型。 2.2 载脂蛋白E 基因型分布 3 组研究对象的A poE 基因型和等位基因数量和频率分布见表1 。早发和迟发C H D 组E43 基因型及4 等位基因型频率均显著高于对照组（ P 0105 ， 0101 ），早发C H D 组E33 和3 基因频率较对照组低（P 0105 ， 0101 ），在不同发病年龄的两组C H D 患者中，早发组4 等位基因频率较高（P 0105 ），E33 基因频率则明显低（ P 0101 ）。E42 例数较少，未行统计学比较。 2.3 对照组A poE 等位基因对血脂、脂蛋白水平的影响 与3 等位基因相比，4 等位基因具有升高血T C 和L D L2C 水平的作用， 而2 等位基因则降低T C 和L D L2C 水平（P 均 0105 ）。3 种等位基因对其它血脂水平的影响无统计学差异（表2 ）。 3 讨论 人类A poE 基因具有显著的遗传多态性，由位于19 号染色体长臂上的单一结构基因所编码，3 种复等位共显性基因2 、3 、4 构成常见的6 种表型：即3 种纯合子（E22 、E33 、E44 ）和3 种杂合子（E23 、E24 、E43 ）。人群中常见的等位基因是3 ，最常见的表型是A poE 3 种纯合体。A poE的重要生理功能是作为脂蛋白的配体和结构与功能蛋白， 参与脂质的肝脏代谢， 尤其是致动脉硬化（atherosclerosis ，A S ） 脂类如乳糜微粒（C M ） 残基的代谢，从而影响C H D 的发病。已有一些学者对该基因变异与C H D 的相关关系进行了研究，但其与早发C H D 的相关关系，目前国内的研究报道较少。Gauley 等5 比较正常人年轻组（42 ， 50 岁）和年长组（61 ， 90 岁） 的A poE 基因多态性，发现在年长组A poE4 等位基因频率较低，2 等位基因频率较高；对澳洲年轻男性（30 ， 50 岁） 冠心病患者A poE 基因变异的分析比较说明4 等位基因是男性早发缺血性心脏病的危险因素，4 纯合子在C H D早发的危险性更为增高6 。而对中年女性（49162 4183 岁）的相关研究证明A poE 43 基因型者并同时伴有高T CH D L2C 比值和低A poA -II 水平者是冠心病的高危人群。A poE 基因变异可认为是C H D遗传和代谢的危险指标，对女性C H D 高危人群的筛选和干预有重要意义7 。Nassar 等8 通过多因素分析明确提出在年轻C H D 患者（ 50 岁） 中2 等位基因频率明显低于年长患者（ 65 岁），4 等位基因则较高。本研究结果表明：C H D 患者A poE 43 基因型和4 等位基因频率明显高于对照组； 对C H D 患者按年龄进一步分组比较表明， 早发C H D患者的4 等位基因频率比迟发C H D 患者更为增高，3 等位基因频率则较对照组为低。已有一些学者对A poE 基因多态性与血脂代谢及水平的相关关系进行了研究分析，Utermann 等9 首先观察到， 正常人群中2 等位基因携带者E2X 型， 血浆T C 和L D L2C 水平明显低于A poE 33 者，而4 等位基因携带者E4X 型则伴随L D L2C 的升高。著名的Framingham 子代研究显示A poE 多态性体现了一种血清脂蛋白的遗传变异，4 等位基因与高的L D L2C 和A poB100 均值有关，这种关系在女性绝经后表现得更为明显，并可影响冠心病的发病10 。本研究排除了可能引起高脂血症的各种疾病，并在病例组和对照组之间平衡各项混杂因素，结果显示：血浆T C 、L D L2C 和A poB 水平高低依次是E4X E33 E2X ，E4X 型血浆T G 水平高于E33 和E2X 型，E2X 型H D L2C 水平高于E33 和E4X 型，支持上述结论。 这说明A poE 基因多态性确实影响个体的血脂和脂蛋白水平。高T C 、高L D L2C 和低H D L2C 是动脉粥样硬化和冠心病的独立危险因素11 ， 因此不同A poE 基因型、血脂水平与C H D 发生特别是早发 C H D 之间存在明显关联。这对于防治人群中动脉粥样硬化和冠心病的发生发展具有一定的指导意义。参考文献：1 金倩;氯地酊联合激光治疗痤疮158例疗效观察J;广东医学;1997年10期 2 董新亭,李卫莉,张随学;自拟粉刺消治疗痤疮126例J;中国中医药科技;1999年06期 3 查旭山,陈修飏;寻常痤疮治疗体会J;江西中医药;/xyfm/class/.2002年05期 4 张随学 ,谭正辉 ,孙叶梅 ,李梅 ,俞玉芳 ,韩峰;3003例痤疮患者特征分析与控制对策J;中华医学美学美容杂志;/xyfm/class/.2002年06期 5 刘勇,王冬梅;痤疮的药物治疗J;临床医药实践杂志;2003年09期 6 高宜云;痤疮从肝论治J;中医药临床杂志;2004年03期 7 欧其平,林维山;中西医结合治疗痤疮J;中华皮肤科杂志;2004年09期 8 陈五一;痤疮辨治体会J;世界中医药;/yisheng/main/index.php.2007年03期 9 雷放;中药热敷治疗痤疮有效J;新中医;/book/main/index.php.1992年09期 10 李东华;异维生素A酸治疗痤疮J;新医学http:/www.baokan8