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流式细胞仪的使用与调校实验目的1. 了解流式细胞仪的基本结构与基本原理2. 掌握四色荧光微球校正仪器光路的方法3. 掌握单色标记和多色标记检测细胞表面分子的方法实验器材流式细胞仪一台，四色荧光微球一瓶，荧光标记抗体：抗CD3-PEcy5,抗CD4-FITC,溶血剂A液和B液实验原理应用流体学技术，流式细胞仪等生物粒子混悬液制成单细胞粒子流。在测定室内，应用单色激光来对未经荧光标记的或经荧光标记的生物粒子进行照射，应用光学系统和计算机系统收集，分析生物粒子经激光照射而产生的散射信号（FS,SS）和荧光信号，从而达到对生物粒子的理化及生物学特性的进行定性，定量分析的母的。实验步骤1 流式细胞仪开机（1） 分别将鞘液盒，清洗液盒加满，废液桶倒净。开启计算机。（2） 打开电源箱门，检测AIR FLITER ,VACUUMFILTER必须干燥无水，SYSTEMPRESURE表，在2832之间，开机预热30分钟，主机显示进入READY状态。可以进行检测分析。2.四色荧光微球校正光路（1）将FLOW CHECK.在室温下放置10min(2)选择检测FLOW CHECK的PROTOCOL(3)取0.5ml(1520滴) FLOW CHECK.放入12mm*75mm流式细胞仪专用试管中。（4）将试管放在样品台进行检测数5000（FS）(5)记录FS及荧光FL1FL4的HPCV值，HPCV应该小于2%（6）如长期不开机，开机后先清洗机器，再测FLOW CHECK3.免疫荧光分析 细胞表面抗原（或细胞膜受体）与相应的荧光标记抗体结合，形成带有荧光的抗原抗体复合物。通过流式细胞仪检测其荧光量，即可得到细胞表面相应抗原的表达情况。（1） 取100ul全血加入到12*75mm的流式细胞仪的专用的试管中。（2） 加入适量的荧光标记抗体，如抗CD3PC5 10UL,抗CD4FITC10ul，抗cd8pe 10ul，加在同一标本管中，置于室温暗处标记30分钟（3） 溶解红细胞：1） 在标记的试管里加入500ul OptoyseC ，室温避光10分钟，2） 加500ulPBS ,室温避光10分钟3） 1500rpm离心5min，弃去上清液，加入1mlPBS悬浮细胞，待检测（4） 同型对照管，（5） 上机检测：仪器进入正常的工作状态后，建立并选择CD4/CD8/CD3三色检测方案。在对数方案上，同型对照管调电压。电压调节达要求后对测定管检测数据记录及处理1. 测定日期及测定过程。2. 测定标本的CD3 CD4 CD8百分数3. 评价
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