药物分析实验讲义.doc

实验一 葡萄糖的一般杂质检查一、目的要求1、熟悉药物中一般杂质限量检查的方法及限量计算方法。2、熟悉药物中一般杂质检查的目的和意义。3、掌握氯化物、硫酸盐、铁盐的检查原理。二、实验原理(一)葡萄糖的生产工艺 葡萄糖是用淀粉以无机酸水解或在酶催化下经过水解得稀葡萄糖液，再经脱色、浓缩结晶制得。国内生产方法如下： 1、酸水解法 以无机酸将淀粉水解为葡萄糖。2、双酶水解法 以生物酶为催化剂将淀粉水解为葡萄糖。3、酸酶水解法 以盐酸为液化剂，糖化酶为催化剂，将淀粉水解为葡萄糖。 根据葡萄糖生产工艺特点，应进行氯化物、硫酸盐、铁盐等一般杂质检查，进行蛋白质、可溶性淀粉等特殊杂质检查。 (二)各种杂质检查原理 l、氯化物检查法 氯化物在硝酸酸性溶液中与硝酸银作用，生成氯化银白色浑浊液，与一定量的标准氯化钠溶液和硝酸银在同样条件下处理生成的氯化银浑浊相比较，测定供试品中氯化物的限量。 2、硫酸盐检查法 药物中微量硫酸盐与氯化钡在酸性溶液中作用，生成硫酸钡微粒而显白色浑浊液，同一定量标准硫酸钾溶液与氯化钡在同样条件下，用同法处理生成的浑浊比较，判断药物中含硫酸盐的限量。 3、铁盐检查法 三价铁盐在硝酸酸性溶液中与硫氰酸盐生成红色可溶性硫氰酸铁络离子，与一定量标准铁溶液用同法处理后进行比色。 进行葡萄糖的铁盐检查时，需在显色前加硝酸3滴，煮沸5min，使Fe2+氧化为Fe3+。由于硝酸中可能含有亚硝酸，亚硝酸也能与硫氰酸根离子反应生成红色的亚硝酰硫氰化物，影响比色，因此加入显色剂之前加热煮沸有助于除去氧化氮，以消除氧化氮生产的亚硝酸干扰。 三、试剂与器材 1、材料 葡萄糖(药用)。 2、试剂 (1)酚酞指示液：取酚酞l g，加乙醇100ml使溶解，即得。 (2)氢氧化钠滴定液(0.02molL)：取氢氧化钠4.000g，加水振摇使溶解成饱和溶液，冷却后，置聚乙烯塑料瓶中，静置数日，澄清后备用。 取澄清的氢氧化钠饱和溶液5.6ml，加新沸过的冷水使成1000ml，摇匀，精密量取溶液2 m1，置10ml容量瓶中加水稀释至刻度，即得。 (3)标准氯化钠溶液：称取氯化钠0.165g，置1000ml容量瓶中，加水适量使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。 (4)稀硝酸：取硝酸105ml加水稀释至1000ml，即得。(5)硝酸银试液(0.1 molL)：取硝酸银17.5g，加水适量使溶解成1000ml，摇匀，置玻璃塞的棕色玻瓶中，密闭保存。 (6)标准硫酸钾溶液：称取硫酸钾0.181 g，置1000ml容量瓶中，加水适量使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得(每1ml相当于100g的SO4)。(7)稀盐酸：取盐酸234 ml，加水稀释至1000ml，即得。 (8)25氯化钡溶液：取氯化钡6.10g，加水适量使溶解成10 ml，即得。 (9)标准铁溶液：称取硫酸铁铵FeNH4(SO4)212H2O 0.863g，置1000 ml容量瓶中，加水溶解后，加硫酸2.5 ml，用水稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。 (10)碘试液(0.05 molL)：取碘13.0g，加碘化钾36g与水50 ml溶解后，加盐酸3滴与水适量使成1000 ml，摇匀，用垂熔玻璃滤器滤过，置玻璃塞的棕色玻瓶中，密闭，在凉处保存。 (11)磺基水杨酸溶液：取磺基水杨酸lg，加水适量使溶解成5ml，即得。 (12)硫氰酸铵溶液：取硫氰酸铵30g，加水适量使溶解成100 ml，即得。 (13)其它：乙醇、石蕊试纸。 3、器材 量筒(100ml 1个、500 ml 2个、1000ml 1个)； 刻度吸管(1ml 1支、5ml 1支、10ml 1支、20ml 1支)； 容量瓶(10ml 1个、100ml 2个、1000 ml 2个)： 移液管(2ml 1支)； 聚乙烯塑料瓶(500ml 2个)； 玻璃塞的棕色玻瓶(1000ml 2个)； 无色广口瓶(1000ml 2个)； 纳氏比色管(50ml 6支)； 烧杯(50ml 6只、100ml 4只)； 试管(50ml 4支)； 垂熔玻璃滤器1个，加热回流装置，电子天平，水浴锅，电炉。 四、实验步骤 l、酸度 取本品2.0g，加水20 ml溶解后，加酚酞指示液3滴与氢氧化钠滴定液(0.02molL)0.20ml，应显粉红色。 2、乙醇溶液的澄清度 取本品1.0g，加90乙醇30ml，置水浴上加热回流约10min，溶液应澄清。3、氯化物 (1)标准氯化钠溶液的制备 精密量氯化钠贮备液10ml，置100ml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得(每lml相当于10g的Cl)。 (2)供试溶液的配制 取本品0.60g，加水溶解使成25 ml (溶液如显碱性，可滴加硝酸使遇石蕊试纸显中性反应)，再加稀硝酸10ml，溶液如不澄清，应用事先已洗淨Cl-的滤纸滤过；置50 ml纳氏比色管中，加水使成约40ml，摇匀，即得供试溶液。 (3)对照溶液的配制 取标准氯化钠溶液6.0ml，置50ml纳氏比色管中，加稀硝酸10ml，用水稀释使成约40 ml，摇匀，即得对照溶液。 (4)检查 于供试溶液与对照溶液中分别加硝酸银试液(0.1 molL)1.0ml，用水稀释使成50 ml，摇匀，在暗处放置5min，同置黑色背景上，从比色管上方向下观察，比较所产生的浑浊，样品管不得比对照管更浓(0.01)。 4、硫酸盐 (1)标准硫酸钾溶液的制备 称取硫酸钾0.181g，置1000ml容量瓶中，加水适量使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得(每lml相当于100g的SO4)。 (2)供试溶液的配制 取本品2.0g，加水溶解使成约40ml(如溶液显碱性，可滴加盐酸使遇石蕊试纸显中性反应)；溶液如不澄清，应滤过；置50ml纳氏比色管中，加稀盐酸2 ml，摇匀，即得供试溶液。 (3)对照溶液的配制 取标准硫酸钾溶液2.0ml，置50 ml纳氏比色管中，加水使成约40 ml，加稀盐酸2 ml，摇匀，即得对照溶液。 (4)检查 于供试溶液与对照溶液中分别加入25氯化钡溶液5m1，加水稀释至50ml，充分摇匀，放置10min，同置黑色背景上，从比色管上方向下观察，比较所产生的浑浊，样品管不得比对照管更浓不得更浓(0.01)。5、铁盐(1)标准铁溶液的制备 精密量取硫酸铁铵贮备液10ml，置100ml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得(每1ml相当于10g的Fe)。 (2) 检查 取本品2.0g，加水20ml溶解后，加硝酸3滴，缓缓煮沸5 min，放冷，加水稀释使成45ml，加硫氰酸铵溶液(30100)3ml，摇匀，如显色，与标准铁溶液2.0ml用同一方法制成的对照液比较，不得更深(0.001)。 6、亚硫酸盐与可溶性淀粉 取本品1.0g，加水10ml溶解后，加碘试液(0.05molL)l滴，应即显黄色。 7、蛋白质 取本品1.0g，加水10ml溶解后，加磺基水杨酸溶液(15)3ml，不得发生沉淀。 五、数据记录及处理 样品名称 来源 批号数据记录检查项目 现象及数据 结果 酸度乙醇溶液的澄清度氯化物硫酸盐铁盐亚硫酸盐与可溶性淀粉蛋白质结论：六、杂质限量计算葡萄糖中的杂质氯化物、硫酸盐、铁盐的检查方法采用对照法，其计算公式为： 因一定量的供试品(S)中所含杂质的量是通过一定量标准溶液进行比较，杂质最大允许量=标准溶液体积(V)标准溶液浓度(C)，所以杂质限量(L)可表示为：l、氯化物的检查2、硫酸盐的检查3、铁盐的检查 七、注意事项 1、纳氏比色管的选择与洗涤 比色或比浊操作，一般均在纳氏比色管中进行，因此在选用比色管时，必须注意使样品与标准管的体积相等，玻璃色质一致，最好不带任何颜色，管上的刻度均匀，如有差别，不得大于2mm。纳氏比色管用后应立即冲洗，比色管洗涤时避免用毛刷或去污粉等洗刷，以免管壁划出条痕影响比色或比浊。 2、平行操作原则 进行比色、比浊检查时，样品溶液与对照溶液的实验条件应尽可能一致，严格按照操作步骤平行操作，按规定顺序加入试剂。比色、比浊前可利用手腕转动360的旋摇使比色管内试剂充分混匀。比色方法一般是将两管同置于白色背景上，从侧面观察；比浊方法是将两管同置于黑色或白色背景上，自上而下地观察。 3、实验中应准确选用量具，杂质检查中允许的误差为10，量筒的绝对误差为1ml，刻度吸管的绝对误差为0.010.1 ml，在实验中，应根据样品、标准液的取用量正确选用量器。例如，取标准液2ml应选择刻度吸管或移液管吸取标准液。取样品2g，允许的误差为0.2g，可选用称量精度为0.1g的普通天平。 4、进行铁盐检查时，采用硝酸将Fe2+氧化为Fe3+，标准液应与样品液同法操作。样品液加硝酸煮沸时，应注意防止暴沸，必要时补充适量水。 八、思考题 l、比色、比浊操作中应注意什么原则?2、进行葡萄糖的铁盐检查时，在加入显色剂之前应如何操作?为什么?实验二 固体药物制剂的常规检查 一、目的要求l、熟悉固体药物制剂中片剂和胶囊剂的常规检查项目。2、掌握片剂的常规检查操作方法。3、掌握胶囊剂的常规检查操作方法。4、掌握干燥失重测定的操作技能。二、实验原理 (一)片剂的常规检查 l、重量差异检查 片剂的重量差异指按规定称量方法测定每片的重量与平均片重之间的差异程度。 中国药典(2010年版)规定片剂重量差异不得超过下表限度的规定。片剂的重量差异限度要求 平均片重或标示片重 重量差异限度 0.30g以下 7.5 0.30g及0.30g以上 52、崩解时限检查 崩解指固体制剂在检查时限内全部崩解溶散或成碎粒，除不溶性包衣材料或破碎的囊壳外，应通过筛网。 测定时使固体制剂在液体介质中，随着崩解仪器吊篮的上下移动，发生崩解成碎粒、溶化或软化的现象，以供试品通过筛网或软化的时间来控制。(二) 胶囊剂的常规检查 l、装量差异检查 胶囊剂的装量差异指按规定称量方法测定每粒胶囊的内容物的装量与平均装量之间的差异程度。 中国药典(2010年版)规定胶囊剂装量差异不得超过下表限度的规定。胶囊剂的装量差异限度要求平均装量 重量差异限度 0.30g以下 10 0.30g及0.30g以上 7.52、崩解时限检查 同片剂 (三)干燥失重测定法 干燥失重是指药物在规定条件下，经干燥后所减失的重量，根据所减失的重量和取样量计算供试品干燥失重的百分率。干燥失重检查法主要控制药物中的水分，也包括其他挥发性物质如乙醇等。三、试剂与器材 l、材料 维生素B1片(规格 10mg)，对乙酰氨基酚片(规格 0.5g) ，诺氟沙星胶囊(规格 0.1g)。 2、器材 烧杯(1000ml 2只) 电子天平，崩解时限测定仪，电热恒温干燥箱，温度计(2根)，研钵，扁形称量瓶(8只)，培养皿(4个)，干燥器(1只)。四、实验步骤 (一)性状观察维生素B1片的性状,本品为白色片。观察对乙酰氨基酚片的性状,本品为白色片。观察诺氟沙星胶囊的性状,本品内容物为白色至淡黄色颗粒和粉末。 (二)片剂的常规检查 l、重量差异检查 分别取维生素B1片20片、对乙酰氨基酚片20片，精密称定总重量，求得平均片重后，再分别精密称定每片的重量，每片重量与平均片重相比较，按表中的规定，超出重量差异限度的不得多于2片，并不得有1片超出限度l倍。 2、崩解时限检查 将吊篮通过上端的不锈钢轴悬挂于金属支架上，浸入1000ml烧杯中，烧杯内盛有温度为(371)的水，调节吊篮位置使其下降时筛网距烧杯底部25mm，调节水位高度使吊篮上升时筛网在水面下15 mm处，并使升降的金属支架上下移动距离为55 mm2 mm，往返频率为每分钟30-32次。 取维生素B1片6片、对乙酰氨基酚片6片，分别置上述吊篮的玻璃管中，启动崩解仪进行检查，各片均应在15min内全部崩解。如有l片不能完全崩解，应另取6片复试，均应符合规定。 (三)胶囊剂的常规检查 l、装量差异检查取诺氟沙星胶囊20粒，分别精密称定重量后，倾出内容物（不得损失囊壳），再分别精密称定囊壳重量，求得每粒内容物的装量与平均装量。每粒的装量与平均装量相比较，按表中的规定，超出装量差异限度的不得多于2粒，并不得有1粒超出限度l倍。 2、崩解时限检查取诺氟沙星胶囊6粒，按片剂的装置与方法（如胶囊漂浮于液面，可加档板）检查。硬胶囊应在30min内全部崩解。如有l粒不能完全崩解，应另取6粒复试，均应符合规定。 (四)干燥失重取已检查过重量差异的对乙酰氨基酚片8片，研细后取粉末约1.0g，置105干燥至恒重的扁形称量瓶中，精密称定。并将供试品平铺于瓶底，将称量瓶放入洁净的培养皿中，瓶盖取下，置称量瓶旁，放入恒温干燥箱内，调节温度至105(2)，干燥2-4小时。取出后迅速盖好瓶盖，置干燥器内放冷至室温，迅速精密称重。计算减失重量。五、数据记录及处理样品名称： 来源： 批号： 维生素B1片 对乙酰氨基酚片诺氟沙星胶囊现象 结论(一)性状维生素B1片 对乙酰氨基酚片诺氟沙星胶囊(二)片剂的常规检查1、维生素B1片的重量差异检查20片维生素B1片的总重平均片重 0.3g重量差异上限重量差异下限维生素B1片的每片重量判断结论2、对乙酰氨基酚片的重量差异检查20片对乙酰氨基酚片的总重平均片重 0.3g重量差异上限重量差异下限对乙酰氨基酚片的每片重量判断结论(三)胶囊剂的常规检查诺氟沙星胶囊的装量差异检查20粒诺氟沙星胶囊的总重平均粒重 0.3g装量差异上限装量差异下限诺氟沙星胶囊的每粒重量判断结论 (四) 干燥失重干燥前称量瓶+粉末重需干燥的药粉重干燥开始时间干燥结束时间干燥后称量瓶+粉末重干燥后药粉重干燥失重计算公式六、注意事项 l、片剂的重量差异限度和胶囊剂装量差异限度的判断，首先应确定片剂（或胶囊剂）的平均片重（或平均装量）是0.3g以上还是以下，再根据要求计算出片重（或装量）的允许上限和下限，把精密称定的20片(或20粒)的重量与这个上、下限比较，作出判断。 2、干燥失重试验时，供试品颗粒较大或结块，应研细后干燥；称量时应尽量缩短称量时间，防止供试品吸收空气中的水分，特别是空气中湿度较大时，更须注意。七、思考题 1、平均重量在0.3g以上和0.3g以下的胶囊剂，装量差异限度分别为多少? 2、中国药典(2010年版)规定，凡检查含量均匀度的制剂，不再作哪一项检查?凡规定检查溶出度、释放度或融变时限的制剂，不再作哪一项检查? 实验三 葡萄糖注射液的质量检查一、目的要求l、掌握葡萄糖注射液的鉴别原理及方法。2、葡萄糖注射液中特殊杂质检查原理及方法。3、熟练使用旋光仪，掌握旋光法测定葡萄糖含量的操作并能进行有关计算。 二、实验原理(一)鉴别葡萄糖分子中含有羰基，具还原性，能还原碱性酒石酸铜试液(斐林试液) 生成氧化亚铜红色沉淀。 (二)葡萄糖注射液中5-羟甲基糠醛的检查采用紫外分光光度法检查5-羟甲基糠醛的含量。利用5-羟甲基糠醛在284nm波长处有最大吸收。本品每100ml中含1.0g葡萄糖的水溶液在284nm波长处的吸收度不得大于0.32。(三)含量测定葡萄糖采用旋光法测定其含量。根据测得供试品的旋光度与2.0852相乘，计算出葡萄糖在供试品中的百分比浓度和标示量的百分比。三、试剂与器材1、材料葡萄糖注射液(规格20m1:10g)。2、试剂(1)碱性酒石酸铜试液： 取硫酸铜结晶6.93g，加水使溶解成100m1。 取酒石酸钾钠结晶34.6g与氢氧化钠10g，加水使溶解成100m1。用时将两液等量混合，即得。(2)氨试液：取浓氨溶液400ml，加水使成1000m1，即得。3、器材刻度吸管(2ml 2支)；容量瓶(100ml 2个，或100ml 1个、50ml 1个)；移液管(20ml 1支，或10 ml 1支)；试管(25ml 2支)；试剂瓶(250ml 4个)；水浴，紫外一可见分光光度仪，旋光仪。四、实验步骤(一)性状观察葡萄糖注射液的性状，本品为无色或几乎无色的澄明液体；味甜。(二)鉴别 取本品，缓缓滴入微温的碱性酒石酸铜试液中，即生成氧化亚铜的红色沉淀。(三)5-羟甲基糠醛的检查l、测定液的配制： lOOml容量瓶：精密量取本品适量(约相当于葡萄糖1.0g，即精密量取本品2ml)置100ml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。 5Oml容量瓶：精密量取本品适量（约相当于葡萄糖0.5g，即密量取本品1ml）置50ml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。2、测定：取配制的测定液盛入lcm厚的石英池中，置预先校正好的紫外分光光度计的试样室中，以水为空白，在284nm波长处测定其吸收度，重复三次，取其平均值，中国药典2005规定，其吸收度不得大于0.32。 (四)含量测定 中国药典2010规定，本品含葡萄糖(C6H12O6H2O)应为标示量的95.0%105.0%。 l、测定液的配制：lOOml容量瓶：精密量取本品适量(约相当于葡萄糖10g，即精密量取本品20ml)，置lOOml容量瓶中，加氨试液0.2ml，用水稀释至刻度，摇匀，静置10分钟，即得。5Oml容量瓶：精密量取本品适量(约相当于葡萄糖5g，即精密量取本品10ml)，置5Oml容量瓶中，加氨试液0.2ml，用水稀释至刻度，摇匀，静置10分钟，即得。2、测定：依法测定该溶液的旋光度，与2.0852相乘(测定管长度为ldm)，即得供试品中含有C6H12O6H2O的重量(g)。3、计算五、数据记录及处理样品名称： 来源： 批号： 现象 结论(一)性状(二)鉴别(三) 5-羟甲基糠醛检查 读数1 读数2 读数3 吸收度平均值 判断 0.32结论(四)含量测定读数1 读数2 读数3 旋光度平均值含量计算公式判断 95.0%105.0%结论六、注意事项 l、碱性酒石酸铜试液是由碱性酒石酸铜试液(硫酸铜溶液)与碱性酒石酸铜试液(碱性酒石酸钾钠溶液)于临用前等量混合而得。2、紫外分光法检查5-羟甲基糠醛时，由于仪器的不同，测定操作亦可能有所差异。在测定中除应注意光源及波长的选定外，须用溶剂做空白，调吸收度为零，以消除吸收池及溶剂可能带来的误差因是直接通过所测吸收度值来判断5-羟甲基糠醛的限量，未采取与标准品比较法，故所测吸收度值应准确，仪器必须先校正合格后，方可进行测定。 附 WZZ-2型自动旋光仪的用法 目前，使用较多的旋光仪为WZZ-2型自动旋光仪。该仪器性能稳定，测定精确，使用方便。现简介如下。 (一)自动旋光仪外型见实验图1l (二)使用方法 l、接通电源，打开“电源开关”，钠光灯启亮，预热5分钟，再打开光源开关。 2、打开测量开关，读数显示窗应有数字显示。 3、仪器调零，将测定试管装入水或其他空白溶剂，放入供试品室，盖上箱盖，待示数稳定后，按清零按钮，读数显示窗示零即可。 4、将待测供试液注入试管中，按调零时相同的位置和方向将试管放入供试品室，盖好箱盖仪器读数显示窗将自动显示出该供试品的旋光度。5、揿下“复测按钮”，重复读数则重测一次，如此重复测定34次，取平均值作为该供试品的测定结果。 6、仪器使用完毕，应依次关闭测量、光源、电源开关、拔下电源插头。 (三)注意事项 1、该仪器电压为220伏，应使用交流电子稳压器，并将接地脚可靠接地。 2、钠光灯泡使用时间勿过长(一般不超过2小时)，连续使用中不宜经常开关，以免影响灯泡使用寿命。当钠光灯熄灭后，应待灯泡冷后再开启使用。 3、如供试品的旋光度超过测量范围，仪器在45处来回振荡。取出试管，仪器即自动转回零位。 4、当放入小于0.5供试品时，示数可能无变化，只要按复测按钮，就会出现新的数字。 5、仪器应放在干燥通风处，防止潮气，应在20的工作环境中使用仪器，并小心轻放避免振动。 七、思考题 l、为什么葡萄糖注射液中应控制5-羟甲基糠醛的含量? 2、测定规格为10ml：2g的葡萄糖注射液含量时，需要加氨水吗?为什么? 3、已知5-羟甲基糠醛在284nm波长处为145，根据实验中对测定液的配制情况，计算5-羟甲基糠醛的杂质限量。实验四 维生素C注射液的鉴别和含量测定 一、目的要求 1、掌握维生素C注射液的鉴别原理及方法。 2、熟悉碘量法测定维生素C注射液的基本原理及操作方法，并能进行有关计算。 3、了解排除注射剂中常用附加剂干扰的操作。 二、实验原理 (一)鉴别 维生素C分子结构中的连二烯醇基具有较强的还原性，可以被多种氧化剂氧化为二酮基，成为去氢抗坏血酸，常用氧化剂主要有硝酸银、2，6-二氯靛酚等。这些氧化剂被还原后会产生沉淀或发生颜色变化，因此可以利用这一特性，对维生素C进行鉴别。(二)含量测定 维生素C分子结构中的连二烯醇基具有较强的还原性，在酸性溶液中，被碘定量地氧化，因此，可以用碘量法测定其含量。 焦亚硫酸钠、亚硫酸氢钠或亚硫酸钠等抗氧剂，可与丙酮或甲醛反应生成加成物，从而排除抗氧剂对测定的干扰。 三、试剂与器材 1、材料 维生素C注射液(规格2 m1：0.5g)。 2、试剂 (1)硝酸银试液：取硝酸银17.5g，加水适量使溶解成1000 m1，摇匀，置玻璃塞的棕色玻瓶中，密闭保存。 (2)二氯靛酚钠试液：取2，6-二氯靛酚钠0.1g，加水100 ml溶解后，滤过，即得。 (3)稀醋酸：取冰醋酸60 ml，加水稀释至1000 ml，即得。 (4)淀粉指示液：取可溶性淀粉0.5g，加水5 m1搅匀后，缓缓倾入100 ml沸水中，随加随搅拌，继续煮沸2分钟，放冷，倾取上层清液，即得。本液应临用新制。 (5)碘滴定液(0.05molL)：取碘13.0 g，加碘化钾36g与水50 m1溶解后，加盐酸3滴与水适量使成1000m1，摇匀，用垂熔玻璃滤器滤过。 (注：在定量分析中，滴定液应进行标定，由于碘滴定液在标定中用到的基准物为三氧化二砷，是毒品，需通过严格的审批手续才能购买，而且要上锁防盗保管，不方便处理，这里就省去标定过程。) (6)其它：丙酮。3、器材量筒(50ml 1个)； 刻度吸管(1ml 2支、5ml 2支)； 容量瓶(1000ml 2个)； 移液管(2ml 1支)； 三角瓶(25ml 2个、50ml 2个)； 试管(25ml 4支) 烧杯(100ml 2个)； 玻璃塞的棕色玻瓶(1000ml 1个)： 电炉，垂熔玻璃滤器(1个)，紫外-可见分光光度仪，滴定仪。 四、实验步骤 (一)性状观察维生素C注射液的性状，本品为无色至微黄色的澄明液体。(二)鉴别 1、取本品适量(约相当于维生素C 0.2g)（取维生素C注射液0.8ml），加水10 ml溶解后，分成两等份，在一份中加硝酸银试液0.5ml，即生成银的黑色沉淀。在另一份中，加二氯靛酚钠试液l2滴，试液的颜色即消失。 2、颜色取本品，加水稀释成每lm1中含维生素C 50mg的溶液，（取维生素C注射液10m1稀释至50m1），照紫外-可见分光光度法，在420nm的波长处测定，吸光度不得过0.06。 (二)含量测定精密量取本品适量(约相当于维生素C 0.2g)（取维生素C注射液0.8ml），加水15 m1与丙酮2ml，摇匀，放置5分钟，加稀醋酸4ml与淀粉指示液lml，用碘滴定液(0.05molL)滴定，至溶液显蓝色并持续30秒钟不褪。每1ml碘滴定液(0.05 molL)相当于8806mg的C6H8O6 。中国药典2010年版规定本品含维生素C(C6H8O6)应为标示量的90.0110.0。 式中 V为消耗碘滴定液的体积，ml； T为滴定度，即每lml碘滴定液相当于8.806mg的C6H8O6， mgml： F为碘滴定液的浓度校正系数； W为供试品取样量，ml。 六、数据记录及处理样品名称： 来源： 批号： 现象 结论(一)性状(二)鉴别(三) 颜色 读数1 读数2 读数3 吸收度平均值 判断 0.06结论(四)含量测定样品1 样品2 滴定/ml含量/%含量计算公式判断 90.0%110.0%结论七、注意事项 l、测定中加入稀醋酸，是使滴定在酸性溶液中进行，在酸性介质中维生素C受空气中氧的氧化速度减慢，但样品溶于稀酸后仍需立即进行滴定。 2、应以重新煮沸冷却的水作为溶媒，目的是减少水中溶解氧对测定的干扰。 3、测定中加入丙酮，是为了消除注射液中的抗氧剂焦亚硫酸钠(或亚硫酸氢钠)的干扰。 4、维生素C注射液的规格： (1)1m1：0.25g (2)2ml：0.1g (3)2ml：0.25g (4)2ml：0.5g (5)2ml：1g (6)2.5ml：1g (7)5ml：0.5g (8)5ml：1g (9)10ml：lg (10)1Oml：2g (11)20ml：2.5g 八、思考题 l、维生素C为什么易发生氧化还原反应?药典收载的维生素C注射液的鉴别反应有哪些?2、维生素C注射液含量测定的原理是什么?实验五 甲硝唑片的鉴别和含量测定 一、目的要求 l、掌握甲硝唑片的鉴别原理及方法。 2、熟悉紫外分光光度法测定甲硝唑片含量的基本原理及操作方法，并能进行有关计算。 3、了解排除片剂中常用辅料干扰的操作。 二、实验原理 (一)鉴别 甲硝唑结构中的咪唑环显碱性，在酸性条件下可与某些试液(如三硝基苯酚试液等)生成有色沉淀，用于鉴别；甲硝唑在酸碱溶液中加热时呈不同的颜色可用于鉴别(此为芳香性硝基化合物的一般反应)；甲硝唑结构中的咪唑环为共轭体系，在一定的紫外光区有特征吸收，可供鉴别。 (二)含量测定 根据甲硝唑能产生紫外吸收的性质，将本品用盐酸溶液配成稀溶液，在甲硝唑的最大吸收波长处测定吸收度，根据吸收度与浓度的关系，用紫外分光光度法中的吸收系数法计算含量。 利用甲硝唑能溶于盐酸溶液中，而片剂中的赋形剂不溶，通过过滤消除赋形剂对测定的干扰。 三、试剂与器材l、材料 甲硝唑片(规格 0.2g) 2、试剂 (1)氢氧化钠试液：取氢氧化钠4.3g，加水使溶解成lOOm1，即得。 (2)稀盐酸：取盐酸234 ml，加水稀释至1000ml，即得。 (3)三硝基苯酚试液：三硝基苯酚的饱和水溶液。 (4)硫酸溶液：取硫酸3.0ml，加水稀释成100ml，即得。 (5)盐酸溶液：取盐酸9.0ml，加水稀释至1000ml，即得。 3、器材 量筒(100ml 1个)； 刻度吸管(5ml 2支、10ml 2支)； 容量瓶(100ml 1个；200 ml 1个)； 移液管(2ml 1支、5ml 1支)； 烧杯(50m1 3只)； 试管(25m1 2支、50 ml 2支)。 量杯(1000m 1只)； 研钵，分光光度计，电子天平，电炉。 四、实验步骤 (一)性状观察甲硝唑片的性状，本品为白色或类白色片。(二)鉴别 l、取本品的细粉适量(约相当于甲硝唑10mg，0.0114g)，加氢氧化钠试液2ml微温，即得紫红色溶液；滴加稀盐酸使成酸性即变成黄色，再滴加过量氢氧化钠试液即变成橙红色。 2、取本品的细粉适量(约相当于甲硝唑0.2g)，加硫酸溶液(3100)4m1，振摇使甲硝唑溶解，滤过，滤液中加三硝基苯酚试液10ml，放置后即生成黄色沉淀。 3、取含量测定项下的溶液，照紫外-可见分光光度法测定，在277nm的波长处有最大吸收，在241nm的波长处有最小吸收。 (三)含量测定 取本品10片，精密称定，研细，精密称取适量(约相当于甲硝唑50mg，即0.0284 g)，置5Oml量瓶中，加盐酸溶液(91000)约40ml，微温使甲硝唑溶解，加盐酸溶液(91000)稀释至刻度，摇匀，用干燥滤纸滤过，精密量取续滤液1.25ml，置50ml量瓶中，加盐酸溶液(91000)稀释至刻度，摇匀。取该溶液置lcm厚的石英吸收池中，以相同盐酸溶液为空白，在277nm的波长处测定吸收度，按C6H9N3O3的吸收系数为377计算，即得。 中国药典2010年版规定本品含甲硝唑(C6H9N3O3)应为标示量的93.0 107.0。 五、含量计算 在紫外分光光度法测定片剂时，根据朗伯-比尔定律：上式表示lOOml供试液中所含甲硝唑的量(g)，则lml中所含甲硝唑的量(g)为：甲硝唑的量 故：每片甲硝唑的量 式中， V：供试品溶液原始体积(m1)； D：稀释倍数；W：称取供试品的量(g)。 甲硝唑片占标示量的百分比可按下式求得：六、数据记录及处理样品名称： 来源： 批号： 现象 结论(一)性状(二)鉴别 1、 2、(三) 紫外吸收 270nm 277nm 285 nm 吸收度 230nm 241nm 250nm 吸收度结论：最大吸收波长 最小吸收波长(四)含量测定 10片重量细粉 样品1 样品2 称量/g吸收度含量/%含量计算公式判断 93.0%107.0%结论七、思考题1、 测定甲硝唑片含量时，用什么方法除去辅料的干扰？2、 试述甲硝唑片鉴别试验的原理。实验六 纯化水的质量检查 一、目的要求 l、熟悉纯化水需要检查的项目及各项检查的原理。 2、掌握纯化水各项检查的操作技能。 3、熟练计算各项杂质检查的限量。 二、实验原理 1、酸碱度 利用规定的指示剂的变色范围控制供试液中酸碱性杂质限量。纯化水通过采用甲基红指示液的显色来控制酸度，通过溴麝香草酚蓝指示液的显色来控制碱度，即纯化水的酸碱度控制在pH4.27.6。 2、钙盐 利用Ca2+与C2O4生成不溶性CaC2O4白色沉淀。 3、硝酸盐 利用硝酸的氧化性，将二苯胺氧化成有色化合物，检出限度为0.5g，但氧化剂有干扰。 4、亚硝酸盐 利用亚硝盐在酸性条件下与具有芳香第一胺结构的对氨基苯磺酰胺反应生成重氮盐，再与盐酸萘乙二胺偶合而显色。 5、氨 利用氨与碱性碘化钾反应显色。 6、二氧化碳 利用C02与Ca(0H)2生成不溶性CaC03混浊。 7、易氧化物 利用易氧化物的还原性，可与氧化剂高锰酸钾发生氧化还原反应使高锰酸钾褪色。 三、试剂与器材l、材料 纯化水。 2、试剂 (1)甲基红指示液：取甲基红0.1g，加0.05molL氢氧化钠溶液7.4ml使溶解，再加水稀释至200m1，即得。 (2)溴麝香草酚蓝指示液：取溴麝香草酚蓝0.1g，加0.05molL氢氧化钠溶液3.2 m1使溶解，再加水稀释至200ml，即得。 (3)草酸铵试液：取草酸铵3.5g，加水使溶解成lOOml，即得。 (4)10氯化钾溶液：取氯化钾7.455g，加水溶解并稀释至100ml，摇匀，即得。 (5)0.1二苯胺硫酸溶液：取二苯胺0.169g，加硫酸溶解并稀释至100ml，摇匀，即得。 (6)碱性碘化汞钾试液：取碘化钾10g，加水10ml溶解后，缓缓加入二氯化汞的饱和水溶液，随加随搅拌，至生成的红色沉淀不再溶解，加氢氧化钾30g，溶解后，再加二氯化汞的饱和水溶液1ml或1ml以上，并用适量的水稀释使成200ml，静置，使沉淀，即得。用时倾取上层的澄明液应用。 (7)氢氧化钙试液：取氢氧化钙3g，置玻璃瓶内，加水1000ml，密塞，时时猛力振摇，放置1小时，即得。用时倾取上清液。 (8)稀盐酸：取盐酸234ml，加水稀释至1000ml，即得。 (9)稀硫酸：取硫酸57ml，加水稀释至1000ml，即得。 (10)高锰酸钾滴定液(0.02molL)：取高猛酸钾3.2g，加水1000 ml，煮沸15分钟，密塞，静置2曰以上，用垂熔玻璃滤器滤过，摇匀，置玻璃塞的棕色玻瓶中，密闭保存。 (11)对氨基苯磺酰胺的稀盐酸溶液：取对氨基苯磺酰胺1.0g，加稀盐酸溶解并稀释至lOOml，摇匀，即得。 (12)盐酸萘乙二胺溶液：取盐酸萘乙二胺0.10g，加热水溶解并稀释至100ml，摇匀，即得。 (13)无氨水：取纯化水1000ml，加稀硫酸lml与高猛酸钾试液1ml，蒸馏，即得。 3、器材 量筒(100ml 2个、500ml 2个、1000ml 1个)； 刻度吸管(1ml 5支、2ml 4支、5ml 3支、10ml 3支、25ml 3支)； 容量瓶(50m1 1个、100ml 3个、200ml 3个、1000ml 2个)； 移液管(1ml 1支、10ml 1支)； 玻璃塞的棕色玻瓶(1000ml 2个)； 试剂瓶(250ml 10个、1000ml 3个)； 平底烧瓶(1000ml 1个)： 试管(50ml 3支)； 具塞量筒(50ml 2个)； 纳氏比色管(50ml 2支)； 垂熔玻璃滤器1个，蒸馏装置，冰浴，水浴锅，电子天平、电炉。 四、实验步骤 1、酸碱度 取本品lOml，加甲基红指示液2滴，不得显红色；另取lOml，加溴麝香草酚蓝指示液5滴，不得显蓝色。 2、钙盐 取本品，置50ml试管中，加草酸铵试液2ml，不得发生浑浊。 3、硝酸盐 (1) 标准硝酸盐溶液的制备 取硝酸钾