家兔急性肾功能不全及其肾功能评价指标检测.doc

家兔急性肾功能不全及其肾功能评价指标检测姓名 温正煌 学号201212200904011专业 临床医学 班级 本部4班实验目的 1.用氯化汞中毒方法复制家兔急性肾功能不全模型。2.观察急性肾功能不全时肾功能评价指标变化，从而探讨致病因素及急性肾功能不全的可能发病机制。实验材料和方法实验仪器：分光光度计，离心机，恒温水浴锅，哺乳动物手术器械，注射器，试管架，试管， 试管夹，微量移液器，量筒实验药品和试剂：20%氨基甲酰乙酯，0.6%酚红溶液，20%葡萄糖溶液，10%NaOH，12.5%NaOH 溶液，50%乙酸溶液，1%氯化汞，碱性你苦味酸，生理盐水，肌酐标准应用液，蒸馏水实验动物 家兔实验步骤1.1急性肾功能不全模型复制：于实验前24h，取两只家兔，称重，一只作为实验兔，按 0.81.0ml/kg体重剂量皮下或肌肉注射10g/L氯化汞造成急性肾功能不全备用，另一只皮下注射或肌肉注射等量的生理盐水作为对照兔。1.2麻醉固定：用200g/L氨基甲酸乙酯按5ml/kg体重剂量注射耳缘静脉，缓慢注射。待兔 麻醉后将其仰卧，先后固定四肢及兔头。1.3心脏采血：剪去家兔胸前区部位的毛，在第34肋间靠近胸骨处，用左手食指摸到心跳最明显处，右手持注射器垂直刺入心脏，当针穿刺心脏时，血液由于心脏搏动的力量自动进入注射器，取血3ml，推入干燥试管，静置。1.4 膀胱插管术：从耻骨联合向上沿中线作约34厘米的切口，沿腹白线打开腹腔，将膀胱轻拉至腹壁外，先辨认清膀胱和输尿管的解剖部位，先用注射器取尿液2ml于试管中，然后在输尿管下方穿线结扎尿道，再用止血钳提起膀胱前壁（靠近顶端部分），选择血管较少处，切一纵行小口，插入插管后结扎，将膀胱插管平放于耻骨处，引流管自然下垂，管口低于膀胱水平，排空膀胱，术毕，用温热生理盐水纱布覆盖腹部切口。然后准备小烧杯，收集尿液。1.5酚红排泄试验：按1ml/kg耳缘静脉注射0.6%酚红溶液,开始计时，再按30ml/kg耳缘静脉缓慢注射20%葡萄糖溶液。从注射酚红溶液起收集15分钟（对照组），30分钟（模型组）尿液。1.6生化检测1.6.1测酚红排泄率 a.收集注射酚红后的全部尿液移入500ml量筒内，加入10%NaOH10ml，使之显色，再加入自来水至500ml摇匀。b.从量筒中吸出尿液置于试管中，与标准管比色管进行比较，即为15min、30min酚红排泄率。1.6.2测血肌酐将静置后心脏采血的血用离心机2000r/min离心5分钟，小心吸取血清置于另一干燥试管中，测血肌酐用。取硬质试管3支编号，分别为空白管、标准管及测定管。按表1加样，混匀，37水浴30min，用分光光度计以波长510nm，空白调零，读OD值。然后各管液体倒回试管，加50%乙酸溶液两滴，静置6min后，再测OD值。按公式Cr（mg%）=（OD测-OD测）/（OD标-OD标）0.01/0.2100（正常值=0.70.8mg%）表1 血清肌酐测定单位/ml空白管标准管测定管肌酐标准应用液/（0.05mg/ml)0.2血清0.2蒸馏水0.2碱性苦味酸2.02.02.01.6.3测尿肌酐 a.按表2中步骤操作 b.混匀，放10min后加蒸馏水6.0ml，摇匀，用分光光度计以波长530nm，空白调零，读 取OD值，按公式计算尿肌酐值Crp(mg%)=OD测/OD标0.05mg100ml/0.1ml表2 尿肌酐测定单位/ml空白管标准管测定管尿液（原尿或1:50稀释）0.1尿肌酐标准应用液0.1蒸馏水0.1碱性苦味酸2.02.02.012.5%NaOH溶液0.50.50.51.6.4内生肌酐清除率 内生肌酐清除率=尿中肌酐含量/血中肌酐含量尿量（ml/min)1.7肾形态学观察：于耳缘静脉注射10ml空气处死家兔，解剖取出肾脏，沉重，计算肾脏与 体重之比（即肾系数），并观察肾外形、质地，包膜，最大径纵向剖开肾脏，观察肾切面包膜、肾实质色泽、皮髓质结构改变。实验结果：家兔的血肌酐、尿肌酐数据表管号对照组模型组血肌酐尿肌酐血肌酐尿肌酐加乙酸前加乙酸后加乙酸前加乙酸后标准管0.4230.0520.4610.0510.0160.181测定管0.0560.0490.1570.1500.0400.086对照组和模型组家兔各项生化指标血清肌酐Crp（mg%）尿肌酐Cru（mg%）尿肌酐/血肌酐酚红排泄率（%）肾比重（g/kg)内生肌酐清除率对照组9.47.850.83458.790.0835模型组15.74.30.2757.330.0054不同浓度标准比色液分光光度值排泄率（%）5101520253035404550OD值0.010.0340.0650.1130.1340.1640.1780.2720.2840.312 结果说明：与正常组的家兔对比，急性肾功能不全的家兔血清肌酐升高，尿肌酐明显降 低，每分钟的尿量减少，内生肌酐清除率明显下降，酚红排泄率下降，肾系数降低（由于实验中结扎尿道时不慎将输尿管结扎，造成尿路梗阻，肾脏积水，以致对照组肾系数大于模型组）。正常肾脏颜色为红褐色，切面色泽鲜艳，皮髓质分界清晰。模型组的家兔肾脏重量增加，肾脏颜色苍白，表面肿胀，切面为苍白色，皮髓质分界不清，偶有淤血。实验讨论：1. 氯化汞是一类具有较强毒性的重金属盐，溶于水，其中的汞离子可使含巯基的酶丧失活性，失去功能；还能与酶中的氨基、二巯基、羧基、羟基以及细胞内的磷酰基结合，引起相应的损害。家兔皮下或肌肉注射1%氯化汞，可引起以肾小管坏死为主的急性肾功能不全。急性肾功能不全临床分为少尿型和非少尿型两种，前者多见。少尿型一般表现少尿甚至无尿、等渗尿。血浆肌酐进行性升高，肌酐从尿中排出障碍，尿肌酐/血肌酐40有明显区别.2. 氯化汞引起家兔急性肾功能不全的机制：（1） 管内的NaCl增加，刺激致密斑使肾素分泌增加，肾素-血管紧张素系统激活，血管紧张素增加，从而使入球小动脉收缩，肾小球毛细血管血压下降，肾小球有效滤过压下降，肾小球滤过率下降，导致少尿。（2） 肾小管阻塞：当HgCl2引起急性肾小管上皮细胞坏死时，管型、细胞碎片或细胞肿胀等阻塞肾小管，直接引起少尿；另一方面，近端肾小管阻塞，肾小囊内压升高，有效滤过压下降，肾小球滤过率降低，尿量减少。 （3） 原尿回漏和肾间质水肿：肾小管上皮细胞受损，基膜断裂，原尿到达肾小管时便回漏到肾间质，而后进入肾血管，直接使尿量减少。肾间质水肿和间质压增高，一方面使有效滤过压下降，导致肾小球滤过率降低，尿量减少；另一方面，压迫肾血管，妨碍尿液流入肾小管，压迫肾周围毛细血管，导致肾缺血，进一步引起少尿。3.急性肾功能衰竭时的功能代谢变化：（本实验中毒家兔处于少尿期）（1）尿变化：少尿或无尿；低比重尿；尿钠高；血尿、蛋白尿、管型尿。（2）水中毒：ARF时，因少尿、分解代谢所致内生水增多、摄入水过多等原因，导致体内水潴留、稀释性低钠血症和细胞水肿。严重时可出现心功能不全、肺水肿和脑水肿。（3）高钾血症：尿量减少使钾随尿排出减少；组织损伤和分解代谢增强，使钾大量释放到细胞外液；酸中毒时，细胞内钾离子外溢；低钠血症，使远端小管的钾钠交换减少。（4）代谢性酸中毒：GFR降低，使酸性代谢产物在体内蓄积；肾小管分泌H+和NH3能力降低，使NaHCO3重吸收减少；分解代谢增强，固定酸产生增多。（5）氮质血症：血中尿素、肌酐、尿酸等非蛋白氮含量显著增高，称氮质血症，其发生主要是由于肾脏排泄功能障碍和体内蛋白质分解增加所致，少尿期，氮质血症进行性加重，严重时可出现尿毒症。4. 内生肌酐清除率（80120ml/min）测定的临床意义： 肌酐是肌酸代谢的最终产物，体内的肌酸大部分与磷酸结合生成磷酸肌酸，磷酸肌酸与能量代谢有关。在体外肌酐与肌酸可以互变，在酸性溶液中，肌酸及易脱水而变成肌酐，在碱性溶液中，肌酐则可变回肌酸。但是，在体内肌酸脱水生成肌酐是一种不可逆反应。（1）判断肾小球损害的敏感指标：多数急性肾小球肾炎内生肌酐清除率低到正常值的80%以下，但血清尿素氮、肌酐测定仍在正常范围，故是较早的反映肾小球滤过功能的敏感指标。（2）初步估价肾脏的损害程度：轻度损害Ccr在7051ml/min；中度损害在5030ml/min；小于30ml/min为重度损害；慢性肾功能衰竭病人若清除率在2011ml/min为早期肾功能衰竭；106ml/min为晚期肾功能衰竭；小于5ml/min为终末期肾功能衰竭。（3）指导治疗：内生肌酐清除率为3040ml/min，应限制蛋白质摄入；小于30ml/min噻嗪类利尿剂治疗常无效；小于10ml/min应结合临床进行透析治疗，对袢利尿剂（如速尿、利尿酸钠）的反应也已极差。（4）慢性肾炎临床分型的参考：如慢性肾炎普通型Ccr常降低，肾病型Ccr常偏高。5.尿肌酐/血肌酐比值：功能性肾衰40，器质性肾衰20。功能性肾衰（也叫肾前性肾衰）由肾的灌流不足引起，使肾血流量和肾小球滤过率下降，但内生肌酐在体内积聚不多；器质性肾衰由肾小球滤过率下降、肾小管坏死引起，内生肌酐不能从尿中排出，从而使血肌酐浓度急剧升高。6.氯化汞中毒导致肾小管上皮细胞损伤，尿量减少，酚红排泄率降低。酚红排泄率是反映肾血流量与肾小管排泌功能的指标。注射大量的葡萄糖溶液是为了造成渗透性利尿，利于排除酚红。酚红是一种对人体无害的红色染料，经静脉注射后，大部分与血浆蛋白结合，除20%为肝脏清除，经胆道排出外，其余则由肾脏排出。在肾脏的排泌过程中，94%由近曲小管上皮细胞主动排泌，小部分不与白蛋白结合者可从肾小球滤过，尿中排出4%左右，2%通胆汁到大肠由粪便排出，因为酚红大部分通过近曲小管分泌、排出，所以其尿中排出量，可作为判断近曲小管排泌功能的指标。氯化汞中毒导致肾小管上皮细胞损伤，尿量减少，酚红排泄率降低。7.肾形态观察：（1）正常家兔：表面光滑，皮质红褐色，髓质淡红色，皮髓质纹理清楚。（2）中毒家兔：重量增加，体积增大，包膜紧张，皮质肿胀苍白，纹理不清，髓质充血。实验结论： 氯化汞中毒导致的急性肾功能不全时，家兔尿肌酐/血肌酐1，酚红排泄率降低；肾脏的主要病理改变为肾脏肿大、颜色苍白、重量增加；切面皮质苍白、髓质呈暗红色。参考文献：1.陆源，