普罗帕酮对Kv14ΔN钾通道的作用及细胞外钾离子和pH浓度变化时的影响.pdf

1 7 7 普罗帕酮对K v l 4A N 钾通道的作用及细胞外 钾离子和pH 浓度变化时的影响 王智泉1蒋学俊2任江华1巢升平1张冬1 摘要 目的 探讨抗心律失常药物普罗帕酮对K v l 4 A N 钾通道的作用 以及细胞外钾离子和p H 浓度变 化时对该作用的影响 并探讨该作用可能的机制 方法 将K v l 4 A N 的m R N A 注射入非洲爪蟾卵母细胞并使用 双电极钳制法观察普罗帕酮对K v l 4 A N 电生理特性的影响 以及细胞外钾离子和p H 变化时的电生理特性改 变 结果 p H 7 4 状态下 普罗帕酮对K v l 4 A N 通道的峰电流有抑制作用 这种阻滞作用具有电压依赖性 浓度 依赖性以及频率依赖性 并且随电位的升高而作用加强 符合单指数和线性关系 普罗帕酮加速电流的失活过 程 在不同的钾离子浓度下 这种阻滞作用具有p H 依赖性 细胞外高钾p H 7 4 时 不同浓度普罗帕酮灌流显示 I C 5 0 为1 2 1p m o l I 细胞外酸性环境下 p H 6 o I C 5 提高到4 6 3 z m o l L 碱性化的环境 p H 8 0 降至5 8p m o l L 结论 普罗帕酮是K v l 4 A N 的阻滞剂 可能与作用于细胞内的某嵝位点有关 关键词 钾通道 抗心律失常药物 电压门控型离f 通道 电压钳 膜电流 中图分类号 R 5 4 0 5 文献标志码 A 文章编号 1 0 0 1 1 4 3 9 2 0 0 9 0 3 0 1 7 7 0 5 E f f e c t so fp r o p a f e n o n eo nT h ec t y p eK v l 4 p o t a s s i u mc h a n n e lb yP H Oa n dK 十 W A N GZ h i q u a n lJ I A N G X e j 咒2 R E N J i a n g h u a l C H A O S h e n g p i n 9 1 Z H A N G D o n 9 1 1D e p a r t m e n to fC a r d i o l o g y Z h o n g n a nH o s p i t a lo fW u h a nU n i v e r s i t y W u h a n 4 3 0 0 71 C h i n a 2D e p a r t m e n to fC a r d i o l o g y P e o p l e 7 sH o s p i t a lo fW u h a nU n i v e r s i t y A b s t r a c tO b j e c t i v e T h ee f f e c t so ft h ea n t i a r r h y t h m i cd r u gp r o p a f e n o n ea tc t y p eK v l 4c h a n n e l si nX e n o p u s l a e v i so o c y t e sw e r es t u d i e dw i t ht h et w o e l e c t r o d ev o l t a g e c l a m pt e c h i n i q u e M e t h o d D e f o l l i c u l a t e do o c y t e s s t a g e V V 1 w e r ei n j e c t e dw i t ht r a n s c r i b e dc R N A so ff e r r e tK v l 4 A Nc h a n n e l s D u r i n gr e c o r d i n g o o c y t e sw e r ec o n t i n u o u s l yp e r f u s e dw i t hc o n t r o ls o l u t i o no rp r o p a f e n o n e R e s u l t P r o p a f e n o n ed e c r e a s e dt h ec u r r e n t sd u r i n gv o l t a g e s t e p s T h eb l o c kw a sv o l t a g e u s e a n dc o n c e n t r a t i o n d e p e n d e n tm a n n e r s T h eb l o c kw a si n c r e a s e dw i t hp o s i t i v e g o i n gp o t e n t i a l s T h ev o l t a g ed e p e n d e n c eo fb l o c kc o u l db ef i t t e dw i t ht h es u mo fm o n o e x p o n e n t i a la n dal i n e a r f u n c t i o n P r o p a f e n o n ea c c e l e r a t e dt h ei n a c t i v a t eo fc u r r e n td u r i n gt h ev o l t a g es t e p T h ec o n c e n t r a t i o no fh a l f m a x i m a lb l o c k I C 5 0 w a s1 2 l z m o l L W i t hh i g h n o r m a l a n dl o w e x t r a c e l l u l a rp o t a s s i u mc o n c e n t r a t i o n s t h ec h a n g e so fI C 5 0v a l u eh a dn os i g n i f i c a n ts t a t i s t i c a ld i f f e r e n c e s T h eb l o c ko fp r o p a f e n o n ew a sp H d e p e n d e n ti nh i g h n o r m a l a n dl o w e x t r a c e l l u l a rp o t a s s i u mc o n c e n t r a t i o n s A c i d i f i c a t i o no ft h ee x t r a c e l l u l a rs o l u t i o nt op H 6 0i n c r e a s e dt h eI C s ov a l u e st o4 6 3t m o l L a l k a l i z a t i o nt op H 8 0r e d u c e di tt o5 8t t m o l L C o n c l u s i o n T h er e s u l t ss u g g e s tt h a tp r o p a f e n o n eb l o c k st h eK v l 4 A Nc h a n n e li nt h eo p e ns t a t ea n dg i v es o m eh i n t sf o ra ni n t r a c e l l u l a rs i t eo f a c t i o n K e yw o r d s p o t a s s i u mc h a n n e l a n t i a r r h y t h m i cd r u g v o l t a g e g a t e di o nc h a n n e l sv o l t a g ec l a m p m e m b r a n e c u r r e n t s 普罗帕酮是临床上广泛应用的抗心律失常药 物 电生理研究的动物模型显示 普罗帕酮降低动 作电位的最大上升速度和幅度 延长动作电位时 间n 此外 有研究显示 普罗帕酮抑制兔心房肌 及鼠的心室肌的瞬间外向电流旺3 抑制兔的窦房结 和心房肌及豚鼠的心室肌细胞的延迟复极电 流 1 一幻 基金项目 国家自然科学基金 N o 3 0 2 7 0 3 6 2 1 武汉大学中南医院心内科 武汉 4 3 0 0 7 1 2 武汉大学人民医院心内科 通信作者 王智泉 E m a i l w a n g z h i q u a n l 0 3 1 y a h o o c o m c n 电压门控性钾电流在形成和中止心脏动作电 位方面起着重要的作用 尽管存在几种钾电流 但 可分为两大类 快速激活和失活电流 比如I t o 延 迟缓慢失活电流 比如I k r 对于I t o K v l 4 钾通 道经常被用于研究和讨论 因为对于动作电位复极 过程中的复极电流I t o K v l 4 通道组成了I t o 电流 的主要成分 有研究表明在病理条件下心脏K v l 4 通道的表达有异常改变 去交感神经支配的鼠 的心室肌的K v l 4 通道的蛋白质表达明显降低0 1 鼠的心肌梗死模型显示左室心肌的不同部位 K v l 4 的m R N A 和蛋白质的表达都下降 在 糖尿病鼠的心室肌 链脲霉素造成的 K v l 4 通道 万方数据 1 7 8 m R N A 和蛋白质的表达水平明显提高 在心肌的病理状态下 往往合并有细胞外环境 的p H 和 K 的变化 因此 了解K v l 4 钾通道对 于p H 和 K 变化时的动力行为的分子基础有 着重要的生理意义 我们利用去除N 端的K v l 4 钾通道 这种通道缺乏快速的N 一型失活 但是存在 c 型失活 本研究在于探讨普罗帕酮对于C 一型失 活K v l 4 钾通道的影响和作用机制 以及对于细胞 外p H 和 K 变化时的改变 l 材料与方法 1 1 材料 1 1 1 主要材料实验所用K v l 4 A N 通道为野 生型K v l 4 通道去除N 端2 1 4 6 位碱基 体外转 录试剂盒为A m b i t i o n 公司的产品 限制性内切酶 为X h oI N E B 胶原酶I H E P E S 普罗帕酮以 及矿物油为S I G M A 公司产品 其他试剂均为国 产分析纯试剂 玻璃微电极毛坯使用南京泉水实 验仪器公司产品 实验使用2 年生雌性非洲爪蟾 购自中科院遗传与发育研究所实验动物中心 1 1 2 主要仪器机械式三维微操纵仪为M 3 3 0 1 L 以及M 3 3 0 1 R W P I U S A A D 转换为D i g i d a t a 1 3 2 2 A A x o n U S A 双电极钳制放大器为C A 1 B D a g a n U S A 纳升级微注射器使用N a n o l i t e r2 0 0 0 W P I U S A 电极拉制器使用P P 8 3 N a r i s h i g e J a p a n 灌流槽采用R C 1 1 W a m e r U S A 1 2 方法 1 2 1 分子生物学实验用限制性内切酶X h oI 将质粒D N A 线性化 然后用T 3k i t A m b i t i o n 进 行体外转录 转录获得的c R N A 按1p g A 浓度稀 释 一7 0 保存备用 1 2 2 爪蟾卵母细胞分离及微注射爪蟾浸入 1 5g L 的T r i c a i n e 中麻醉1 5 2 0m i n 将麻醉好 的爪蟾置于碎冰卜手术 下腹部做0 5 1 0e m 长 的纵行切口 取出约1c m 3 卵组织 o R z 液 8 2 5 m m o l LN a C l 2m m o l LK C l 1m m o l LM g C l 2 5 m m o l LH E P E S 用N a O H 调节p H 值至7 4 清 洗后置于含1 5g L 胶原酶I 的0 R 液中 摇震消 化约2h 取出卵母细胞置于O R 液中反复清洗 并挑选出 一V 级细胞用于实验 使用N a n o l i t e r 2 0 0 0 纳升级微注射器 每个卵母细胞注射c R N A 2 7 3 4n l 注射后卵母细胞置于1 8 9 6 孔培养 板中孵育 保存液为含青霉素1 0 0 弘 m l 的B a r t h s s o l u t i o n m m o l L 8 8N a C I 1K C l 2 4N a H C 0 3 0 8 2M g S 0 4 1 5C a C l 2a n d5H e p e s p H7 4 1 2 3 双电极钳制技术记录电流卵母细胞孵育 2 4 7 2h 后可以用于电生理实验 采用双电极钳 制技术法 电极内液为3m o l L 1 的K C l 电极电 阻V 1 钳制电极 为0 5 1 M Q V i 记录电极 为 JC l i nC a r d i o l C h i n a M a r2 0 0 9 V o l2 5 上N o3 1 2M Q 高钾细胞外液配方 9 8m m o l LK C l 1 m m o l LM g C l 2 1 8m m o l LC a C l 2 1 0m m o l L H E P E S 用N a O H 调节p H 值至7 4 低钾细胞外 液配方 9 7m m o l LN a C I 1m m o l LK C l 1 m m o l LM g C l 2 1 8m m o l LC a C l 2 1 0m m o l L H E P E S 用N a O H 调节p H 值至7 4 酸性灌流 液及碱性灌流液由H C L 或N a O H 滴定高钾溶液 至p H 6 和p H 8 对照液配方 9 6m m o l LN a C l 2 m m o l LK C l 1m m o l LM g C l 1 8m m o l L C a C l 2a n d1 0m m o l LH e p e s 用N a O H 调节p H 值至7 4 普罗帕酮分别配制为1 0 l m o l L 1 0 0 g m o l L 和10 0 0p m o l L 浓度备用 细胞外液灌 流速度3 5m l m i n 药物灌流的洗脱时间为1 0 m i n 数据采集和记录使用P C L A M P 9 o A x o n 1 2 4 统计学处理实验数据分析使用 C l a m p f i t 9 O A x o n 通道的电压曲线由t h eB o l t z m a n ne q u a t i o nY Gm a x 1 e x p V l 2 一v b 拟合得出 失活时间常数由e x p o n e n t i a l 方程 r A e x p 一v x r 0 拟合得出 使用C l a m p f i t 9 0 内置拟合程序 浓度曲线由L a n g m u i re q u a t i o nY 一 K D c n H 1 K D e n H 拟合得出 实验 数据统计分析使用S P S S l l 5 软件 实验数据用z 土5 表示 2 组数据间的比较用两样本组间均数t 检 验 P 0 0 5 即认为有显著差异 本实验所有关于 电流值的统计均采用标准化值 s t a n d a r dc u r r e n t 2 结果 2 1 对照组和普罗帕酮组电流曲线的比较 K v l 4 N 的电流曲线 显示快速激活和缓慢 失活的特征 指令电压在一4 0m V 时出现外向电 流 电流在指令电压 5 0m V 时达到峰值 图1 显 示1 0 0 m o l L 的普罗帕酮灌流可以显著抑制峰电 流 指令电压 5 0m V 时电流降至对照组的4 1 钳制电压为一8 0m V 指令电压为一8 0m V 至 5 0m V 越阶1 0m V 钳制电压5S 恢复时间2 0s 1 2 1 0 0 8 鬈0 6 0 4 0 2 卫 电压 m V 对照组 口 1 0 0p m o l l 普罗帕酮组 图1 电流一电压关系 万方数据 2 2 普罗帕酮对K v l 4 N 电流抑制作用特征 显示不同浓度的普罗帕酮 1 0t u m o l L 1 0 0 u m o l L 10 0 0t a m o l L 的灌流均具有抑制作用 其 中10 0 0 t m o l L 的浓度抑制电流的作用更强 普 罗帕酮对K v l 4 X N 电流的抑制作用具有电压依 赖性 图2 电流在电压较高的状态下抑制作用更 明显 4 0m V 时1 0 0t L m o l L 的普罗帕酮灌流产 生的电流为对照组的 6 1 4 0 A 5 0m V 时电流 为对照组的 3 2 2 咒 1 0 P O 0 5 0 O 0 0 烬0 锄O 0 O 0 0 O2 04 06 0 电压 m V 1 0t J m o l L 普罗帕酮组 一 1 0 0t m o l L 普罗帕酮 组 10 0 0t l m o l l 普罗帕酮组 图2 电压依赖性抑制曲线 显示普罗帕酮的抑制作用具有频率依赖性 图 3 与对照组相比 当卵母细胞给予1H z 的持续电 刺激时 普罗帕酮能在一系列刺激的最初显著的抑 制电流 P 0 0 5 行一5 并且很快的达到稳态水平 显示频率依赖性的动力学特点 1 0 O 8 据0 6 删 基 篓0 4 O 2 0 1 02 03 04 05 0 刺激频率陂 对照组 普罗帕酮组 图3 频率依赖性抑制曲线 2 3 普罗帕酮对K v l 4 A N 电流失活后的复活影 响 图4 显示双刺激电刺激程序时 普罗帕酮对 1 7 9 K v l 4 A N 通道的复活影响 钳制电压为一9 0m V P 1 为 5 0m V 持续时间为5S P 1 后紧跟一1 2 0 m V 刺激时间可变的去激活电压 时问间隔为1 0 0 m s 2 0 0m s 3 0 0m s 4 0 0m s 5 0 0m s 10 0 0m s 20 0 0m s 30 0 0m s 40 0 0m s 50 0 0m s 1 00 0 0 m s 2 00 0 0m s 随后用 5 0m V 刺激时间为1s 的 P 2 刺激引出失活后恢复电流 每个s w e e p 之间间 隔3 0S 以使通道充分恢复 结果提示普罗帕酮使 K v l 4 N 通道的恢复减慢 P O 0 5 2 5 随 着2 次刺激时间间隔的延长 标准化电流增加而电 流的末端没降低 这提示存在通道开放阻滞 而不 存在通道关闭阻滞 对照组5 0 的恢复时间是 9 8 0 8 9 3 0 m s 而普罗帕酮组的恢复时间是 1 6 5 3 1 5 1 0 8 4 5 m s P O 0 5 行一5 具有显著性 差异 1 0 O 8 髫o 6 簟 塾4 0 2 0 51 01 5 时间间隔 s 对照组 1 0 0t z m o l L 普罗帕酮组 围4 恢复曲线 2 4 普罗帕酮对K v l 4 N 电流失活时间影响 在 5 0m V 时对照组的失活时间常数是 4 4 9 4 5 0 8 m s 1 0 0t l m o l L 的普罗帕酮灌流后失活 时间常数是 7 0 4 4 1 7 9 m s P O 0 5 扎一8 2 5 细胞外不同浓度钾对I C 值的影响 用不同浓度的普罗帕酮灌流后产生的电流 显示存在浓度依赖性 符合L a n g m u i 方程 P 0 0 5 挖一5 见图5 2 6 不同的细胞外钾离子浓度下 改变细胞外的 p H 值对K v l 4 N 通道电流的影响 万方数据 1 8 0 o 1m m o l L iV 5 m m o l I V 9 8m m o l L 图5 不同细胞外钾浓度下的浓度反应曲线 改变细胞外的钾浓度及p H 值时 不同浓度的普罗 帕酮灌流产生的电流符合L a n g m u i r 方程 普罗帕 酮对f K v l 4 N 的作用具有p H 值依赖性 在不 同的钾浓度下 酸性可加速通道的失活 而碱性减 慢失活 p H 值可改变普罗帕酮对f K v l 4 A N 的 敏感性 当细胞外钾为9 8 比m o l L 时 p H 值为酸 性时 p H 一6 I C 值为4 1 3 3 l m o l L 当细胞外环 境为碱性环境时 p H 一8 I C 5 值为5 8l a m o l L 具 有显著性差异 P d 0 0 5 咒 8 p H8 p H7 4 p H6 圈6 不同p i t 值和细胞外高钾浓度下的浓度反应曲线 3 讨论 瞬间外向电流 I t o 显著影响人类心肌的动作 电位时间 近年有研究证明 在缺血的心肌 介导瞬 间外向电流的K v l 4 钾通道的m R N A 及蛋白质表 达增加 因此 当p H 值和钾浓度变化时 研究 K v l 4 通道的电流特性的改变具有很重要的意义 当离子通道由开放状态向非开放状态转化时 其物理结构会发生改变 这种结构的重新安排对通 道的亲和力 药物的结合部位及邻近部位 会产生 JC i nC a r d i o l C h i n a M a r2 0 0 9 V o l2 5 N o3 很大的影响 外界的环境变化也可对上述因素产生 很大的影响 研究结果显示普罗帕酮作用于K v l 4 A N 的 可能机制 普罗帕酮对K v l 4 A N 钾电流的抑制 作用具有电压依赖性 提示了K v l 4 A N 通道的开 放可能性越大 传导性越强 抑制作用就越明显 这 意味着随着通道开放时间的延长 普罗帕酮的抑制 作用越强 由此可以推论 普罗帕酮是在K v l 4 N 通道的开放状态下发挥阻滞作用 这个结论 和以前的关于普罗帕酮作用于K v l 5 和H E R G 通 道的机制报道一致哺吖1 以前的研究表明 普罗帕酮在通道的开放状态 下与H E R G 结合 而且普罗帕酮阻滞人心房肌细 胞的瞬间外向电流 本研究探讨了普罗帕酮结合与 电压门控钾通道C 型失活的关系 普罗帕酮作用 于K v l 4 N 通道的部位 结论并不是很确定 然 而 实验提供的线索表明 普罗帕酮作用于K v l 4 N 通道的内侧 在低p H 的状态下普罗帕酮对通 道的阻滞作用降低 在酸性条件下 普罗帕酮的质 子化程度提高 既然作用于细胞内 普罗帕酮必须 通过细胞膜 从结构来说分子化形式更容易通过 细胞膜进入细胞内 那么酸性条件下普罗帕酮的质 子化会导致细胞内普罗帕酮的浓度降低 这样发挥 阻滞作用的可能性就越小 对于这种解释 还必须 考虑到普罗帕酮的作用效率 这与通道在开放状态 的时间有关系 这个结论与抗心律失常药物奎尼 丁作用于K v l 5 钾通道及作用部位在细胞内的结 果一致 药物或亲脂氨基酸作用于细胞内口与C 型失 活的关系存在2 种假设 渗透机制和变构机制 渗 透机制 3 是指阻断渗透作用直接影响C 型失活 细胞外钾浓度的降低意味着更少的钾离子结合在 细胞外部位 那么钾通道更容易处于C 型失活状 态 变构机制 3 认为与通道内口物理结构的改变 相比 钾离子的聚集减少与C 型失活的关系可忽视 不计 这种变构作用是由通道蛋白介导的 C 型失 活包括了细胞外口的构象改变 然而 也有些实验 证明了C 型失活包括了通道内口的构象改变 在 该机制中 离子通道被认为是组合在一起的构象单 元 比如说远处部位的结构改变可能会通过蛋白的 介导最终导致通道口的构象变化 比如C 型失活就 可以通过通道内面的变化影响细胞膜外口的变化 有研究显示将S 6 亚基的C 末端的缬氨酸突变后会 对K v l 4 通道的C 一型失活产生明显的影响 这 种跨膜的交流是很难用渗透机制来解释的 细胞外钾离子的浓度升高会导致药物的结合 力下降 这可以是直接作用 静电效应 的结果 也 可以是通过构象的改变调整通道口区域的结构 从 而产生间接作用的结果 或两者可能兼有n 如果 万方数据 是直接的静电效应 提高细胞外的钾浓度将降低普 罗帕酮与K v l 4 A N 通道的结合 然而 本研究显 示提高细胞外钾离子的浓度并不显著影响普罗帕 酮作用于K v l 4 N 的I C s o 值 这个结果不支持 渗透学说 也就是说 对于K v l 4 N 钾通道 细胞 外钾离子的浓度对药物结合能力的调整并不是静 电效应的结果 变构效应可能占主要地位 那么 对 于野生型的K v l 4 钾通道 也可能存在同样的机 制 近来的研究显示普罗帕酮阻滞K V 2 1 通道在 开放状态从细胞内内侧进入通道的内部管道 这 些结果显示 普罗帕酮可能作用于通道螺旋结构的 较低部位和 或 S 6 残基 提示了C 型失活介导的 通道关闭和细胞内的普罗帕酮结合部位存在联系 既然S 6 部位对于药物的结合很重要n 而且近来 的研究显示了该部位和C 型失活存在联系n C 型失活时S 6 发生变动 因此 C 型失活伴随的结 构改变不仅包括以前理论设想的 而且还可能作用 于细胞内普罗帕酮结合部位的改变 普罗帕酮作 用于K v l 4 A N 的分子结构部位不完全清楚 以前 的研究显示p H 值影响C 型失活包括H 5 0 8 和 K 5 3 2 部位的改变 K v l 4 通道的模型建立在K c s A 的结晶结构上 显示H 5 0 8 和K 5 3 2 部位靠的很近 我们的研究推论普罗帕酮作用于膜的细胞内侧部 位 可能导致H 5 0 8 和K 5 3 2 附近部位的结构改变 当改变K V l 2 通道的几个部位时会降低普罗 帕酮对该通道的敏感性 比如通道细胞内末端和 S 4 一S 5 部位的改变会产生该作用 越来越多的实验 证明 通道的膜内侧末端和S 4 一S 5 部位可能会减弱 普罗帕酮与钾通道内口的结合 这些部位接近通道 孔的膜连接部 并形成了细胞内的结合体 们 而改 变 5 6 或S 6 部位 可完全取消普罗帕酮对K V 2 1 和K V l 2 的作用 通过对K c s A 钾通道的X 线分 析 这些部位被认为形成孑L 道的内面n 钉 对于 5 S 6 部位 已证实有两个氨基酸组群 3 7 2 3 7 4 和 3 8 3 3 8 4 与此有关 同时被证实也影响四乙胺的结 合力 对于S 6 部位 通道螺旋结构的细胞内侧的 几个氨基酸显著降低普罗帕酮的结合力n 综合以上的研究 表明普罗帕酮通过变构机制 进入细胞内 并作用于细胞内侧 普罗帕酮在开放 状态下阻断K v l 4 A N 的内孔 通道内面的改变会 影响普罗帕酮与作用部位的结合 S 6 残基可能减 弱或形成结合部位 最大可能是位于孔道螺旋结构 的较低部位 参考文献 1 S A T O HH H A S H I M O T OK E f f e c to fp r o p a f e n o n e o nt h em e m b r a n ec u r r e n t so f r a b b i ts i n o a t r i a ln o d e c e l l s J E u rJP h a r m a c o l 1 9 8 4 9 9 1 8 5 1 9 1 2 D u A ND F E R M I N IB N A T T E LS P o t a s s i u m 1 8 1 c h a n n e lb l o c k i n gp r o p e r t i e so fp r o p a f e n o n ei nr a b b i t a t r i a lm y o c y t e s J JP h s r m a c o lE x pT h e r 1 9 9 3 2 6 4 1 1 1 3 1 1 2 3 3 B A IJ R E NC H A OW e ta 1 C h e m i c a ls y m p a t h e t i cd e n e r v a t i o n s u p p r e s s i o no fm y o c a r d i a lt r a n s i e n t o u t w a r dp o t a s s i u mc u r r e n t a n dv e n t r i c u l a rf i b r i l l a t i o n i nt h er a t J C a nJP h y s i o IP h a r m a c o l 2 0 0 8 8 6 7 0 0 7 0 9 4 H U A N GB Q I ND E L S H E R I FN E a r l yd o w n r e g u l a t i o no fK c h a n n e lg e n e sa n dc u r r e n t si nt h e p o s t i n f a r c t i o nh e a r t J JC a r d i o v a s cE l e c t r o p h y s i o l 2 0 0 0 1 1 1 2 5 2 1 2 6 1 5 3N I S H I Y A M AA 1 S H I IDN B A c K xPH e ta 1 A l t e r e dK c h a n n e lg e n ee x p r e s s i o ni nd i a b e t i cr a t v e n t r i c l e i s o f o r ms w i t c h i n gb e t w e e nK v 4 2a n dK v l 4 J A mJP h y s i o lH e a r tC i r cP h y s i o l 2 0 0 1 2 8 1 H 1 8 0 0 1 8 0 7 6 3 李璐 王宪沛 邹安若 等 酮色林对表达在卵因细胞 上的k v l 3 通道的抑制作用 J 临床心血管病杂志 2 0 0 6 2 2 8 4 8 1 4 8 5 7 M E R G E N T H A L E RJ H A V E R K A M Pw H u T T E NH O F E RA e ta 1 B l o c k i n ge f f e c to ft h ea n t i a r r h y t h m i cd r u gp r o p a f e n o n eo nt h eH E R Gp o t a s s i u m c h a n n e l J N a u n y n S c h m i e d e b e r 9 7sA r c hP h a r m a c o l 2 0 0 1 3 6 3 4 7 2 4 8 0 8 B A U K R O w I T ZT Y E I I E NG M o d u l a t i o no fK c u r r e n tb yf r e q u e n c ya n de x t e r n a l K at a l eo ft w o i n a c t i v a t i o nm e c h a n i s m s J N e u r o n 1 9 9 5 1 5 9 5 1 9 6 0 9 W A N GSM I A USG M O R A L SMJ e ta 1 A q u a n t i t a t i v ea n a l y s i so ft h ea c t i v a t i o na n di n a c t i v a t i o n k i n e t i c so fh e r ge x p r e s s e di nX e n o p u so o c y t e s J J P h y s i o l 1 9 9 7 5 0 2 4 5 6 0 1 0 L IXY B E T TG CL J I A N GxJ e ta 1 R e g u l a t i o n o fN a n dc t y p ei n a c t i v a t i o nb yP h oa n dp o t a s s i u mi n n o r m a la n dm u t a n t K v l 4c h a n n e l s E v i d e n c ef o r t r a n s m e m b r a n ec o m m u n i c a t i o n J A mJ P h y s i o l H e a r tC i r cP h y s i o l 2 0 0 3 2 8 4 H 7 1 8 0 1 1 3W A N GSY W A N GGK Am u t a t i o ni ns e g m e n tI s 6a l t e r ss l o wi n a c t i v a t i o no fs o d i u mc h a n n e l s J B i o p h y sJ 1 9 9 7 7 2 1 6 3 3 1 6 4 0 1 2 L A B R OAJ G R y T 可因A S A N S O MMS e ta 1 A K vc h a n n e lw i t ha na l t e r e da c t i v a t i o ng a t es e q u e n c ed i s p l a y sb o t h f a s t a n d s l o w a c t i v a t i o nk i n e t i c s J A mJ P h y s i o lC e l lP h y s i o l 2 0 0 8 2 9 4 C 1 4 7 6 1 4 8 4 1 3 H E R R E R AD M A M A R B A C H IA S I M O E SM e t a 1 As i n g l er e s i d u ei nt h eS 6t r a n s m e m b r a n ed o m a i n g o v e r n st h ed i f f e r e n t i a lf l e c a i n i d es e n s i t i v i t yo fv o l t a g e g a t e dp o t a s s i u mc h a n n e l s J M o lP h a r m a e o l 2 0 0 5 6 8 3 0 5 3 1 6 1 4 K O B E R T ZWR W I L L I A M SC A N DM I L L E RC H a n g i n gg o n d o l aa t r u c t u r eo ft h eT 1d o m a i ni nav o l t a g e g a t e dK c h a n n e l J B i o c h e m i s t r y 2 0 0 0 3 9 1 0 3 4 7 1 0 3 5 2 1 5 D O Y L EDA C A B R A LJM P F U E T N E RRA e t a 1 T h es t r u c t u r eo ft h ep o t a s s i u mc h a n n e l m o l e c u l a rb a s i so fK c o n d u c t i o na n ds e l e c t i v i t y J S c i e n c e 1 9 9 8 2 8 0 6 9 7 7 收稿日期 2 0 0 9 0 1 0 4 万方数据 普罗帕酮对Kv1 4 N钾通道的作用及细胞外钾离子和pH浓度普罗帕酮对Kv1 4 N钾通道的作用及细胞外钾离子和pH浓度 变化时的影响变化时的影响 作者 王智泉 蒋学俊 任江华 巢升平 张冬 WANG Zhiquan JIANG Xuejun REN Jianghua CHAO Shengping ZHANG Dong 作者单位 王智泉 任江华 巢升平 张冬 WANG Zhiquan REN Jianghua CHAO Shengping ZHANG Dong 武 汉大学中南医院心内科 武汉 430071 蒋学俊 JIANG Xuejun 武汉大学人民医院心内科 刊名 临床心血管病杂志 英文刊名 JOURNAL OF CLINICAL CARDIOLOGY 年 卷 期 2009 25 3 被引用次数 0次 参考文献 15条 参考文献 15条 1 SATOH H HASHIMOTO K Effect of propafenone on the membrane currents of rabbit sino atrial node cells 1984 2 DUAN D FERMINI B NATTEL S Potassium channel blocking properties of propafenone in rabbit atrial myocytes 1993 3 BAI J REN C HAO W Chemical sympathetic denervation suppression of myocardial transient outward potassium current and ventricular fibrillation in the rat 2008 4 HUANG B QIN D EL SHERIF N Early down regulation of K channel genes and currents in the postinfarction heart 2000 5 NISHIYAMA A ISHII D N BACKX P H Altered K channel gene expression in diabetic rat ventricle isoform switching between Kv4 2 and Kv1 4 2001 6 李璐 王宪沛 邹安若 酮色林对表达在卵因细胞上的kv1 3通道的抑制作用 期刊论文 临床心血管病杂志 2006 08 7 MERGENTHALER J HAVERKAMP W HUTTENHOFER A Blocking effect of the antiarrhythmic drug propafenone on the HERG potassium channel 2001 8 BAUKROWITZ T YELLEN G Modulation of K current by frequency and external K a tale of two inactivation mechanisms 1995 9 WANG S M LIU S G MORALS M J A quantitative analysis of the activation and inactivation kinetics of herg expressed in Xenopus oocytes 1997 10 LI X Y BETT G C L JIANG X J Regulation of N and c type inactivation by Pho and potassium in normal and mutant Kv1 4 channels Evidence for transmembrane communication 2003 11 WANG S Y WANG G K A mutation in segment I S6 alters slow inactivation of sodium channels 1997 12 LABRO A J GROTTESI A SANSOM M S A Kv channel with an altered activation gate sequence displays both fast and slow activation kinetics 2008 13 HERRERA D MAMARBACHI A SIMOES M A single residue in the S6 transmembrane domain governs the differential flecainide sensitivity of voltage gated potassium channels 2005 14 KOBERTZ W R WILLIAMS C MILLER C Hanging gondola atructure of the T1 domain in a voltage gated K channel 2000 15 DOYLE D A CABRAL J M PFUETNER R A The structure of the potassium channel molecular basis of K conduction and selectivity 1998 相似文献 10条 相似文献 10条 1 期刊论文 冉崇昭 谢美华 型抗心律失常药物研究进展 中国医药工业杂志2001 32 10 综述了近几年来 型抗心律失常药物的发展趋势 并根据结构特点进行分类讨论 2 学位论文 周宇宏 苦参碱对心肌钾通道和钙通道的调节作用 2007 目的 研究苦参碱对豚鼠心肌钾通道和钙通道的作用 揭示其抗心律失常作用机制 方法 1 酶解法分离豚鼠单个心室肌细胞 采用全细胞膜片钳技术记录苦参碱对豚鼠单个心室肌细胞动作电位时程 APD 缓慢延迟整流钾电流 I 快速延迟整流钾电流 I 内向整流钾电流 I 的作用 2 利用离体豚鼠右心室乳头肌 以收缩张力 contraction force 收缩 舒张速率 dp dt 达峰时间为指标 leak time 研究苦参碱对豚鼠乳头肌收缩力的影响 结合全细胞膜片钳技术和激光扫描共聚焦显微镜观 察苦参碱对豚鼠单个心室肌细胞膜L 型钙电流 I 和细胞内钙 Ca i 的作用 结果 1 苦参碱呈剂量依赖性的延长APD和APD 1 10 100 M苦参碱延长APD从给药前86 2 6 84 ms至106 5 8 20 ms n 5 p 0 05 128 3 8 71 ms n 5 p 0 05 183 3 10 5 ms n 5 p 0 01 APD从给药前143 8 15 0 ms延长至168 4 15 4 ms n 5 p 0 05 191 2 11 8 ms n 5 p 0 05 243 0 24 0 ms n 5 p 0 01 苦参碱呈剂量依赖性抑制I的内向电流 在刺激电压为 120 mV时 10 100 M苦参碱使I从给药前 57 1 6 7 pA pF减少到 44 0 4 2 pA pF n 12 P 0 05 29 9 3 5 pA pF n 12 P 0 0