实验三、压片和涂片的制作,油镜的使用.doc

压片和涂片的制作，油镜的使用一、 实验目的1. 掌握植物根尖压片的制作方法2. 掌握涂片的制作方法3. 了解油镜的使用二、 实验材料和方法（一） 根尖压片1、器材：显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、刀片、烧杯等。2、试剂：Carnoy固定液（3份95%乙醇1份冰乙酸）；1mol/L HCL；改良苯酚品红3、实验材料：洋葱根尖4、步骤（1）准备将洋葱剥去外层老皮，置于盛清水的小烧杯口上，使根茎部与水接触，在25左右培养使其生根。每天换水1到2次，一般3天左右即可获得实验所需材料。（2）解离剪下根尖约1cm备用。放入1mol/L的盐酸解离1015min。（3）染色解离后吸出HCl，蒸馏水洗2次，每次35min。将根尖置于载玻片中间，切去根冠，从乳白色分生组织切取尽可能薄的一片，滴加20l改良苯酚品红染液，染色1015min。（4）压片 在经染色的材料上加一滴染液，盖上盖玻片，覆一层吸水纸，用左手一个手指压住盖玻片的一角，右手用带橡皮头的铅笔/镊子垂直敲打，或以拇指垂直紧压盖片（压片必须用力适当，注意勿使盖片移动），使材料分散压平，便于观察。（5）镜检通常染色清晰而又分散得很好的分裂相只是少数，因此压片后要认真仔细地进行镜检。（二） 根尖涂片 1.取材：细胞分裂旺盛时期取样，一般植物在上午9-12时，下午2-5时，一般取根尖、茎尖。2.预处理（观察细胞分裂时需该步骤）：目的是防止纺锤体的形成，使细胞分裂停止在中期阶段，从而获得较多的中期分裂相，同时预处理还可以使染色体收缩变短，便于观察统计。 3.前低渗：将处理后的材料放在0.075M KCl低渗液中，在20-25条件下处理30分钟左右。4去壁：倒去KCl溶液，加入2.5%混合酶液（纤维素酶与果胶酶各占2.5%），在温度25-30下处理2-5小时左右，其间将材料轻轻摇动数次，促使酶反应充分。酶液与材料的比例适当，酶液不能过少。5 后低渗：倒去酶液，用蒸馏水冲洗2-3次，然后在蒸馏水中停留5-10分钟左右后进行后低渗。6 固定：用甲醇:冰醋酸（3:1）固定液固定。7. 涂片：将去壁固定的材料放在载玻片上，加一滴固定液，然后用镊子将材料夹碎，去掉大块残渣，然后从载玻片一侧向材料轻轻吹气，使组织分散成一薄层。8. 火焰干燥：将载玻片于酒精灯上微微加热烤干。9染色：用40:1的Giemsa染液（用pH7.2的1/15M 磷酸缓冲液稀释）染色4-30分钟或更长，蒸馏水清洗，空气干燥后可用树胶封片。10. 镜检：于显微镜下观察。（三） 花粉涂片（二）、（三）根据材料的获取和时间任选一个）1. 取材：取幼嫩花序2. 固定：将花或者花序固定于卡诺固定液中，2-24小时。3. 将花取出，换入95%酒精和85%酒精浸洗，再转入70%酒精中保存。注意必须在酒精中洗净固定液中的醋酸。4. 将固定好的材料转入50%酒精。5. 经蒸馏水清洗后，取出一个花药置于清洁载玻片上，加一小滴改良的苯酚品红染色液。6. 用刀片切去花药的一端，用小镊子夹着花药，将切面放在载玻片上涂抹，成一薄层，再滴一滴45%醋酸软化分色。7. 盖上盖玻片，使花粉母细胞均匀散开。（四） 油镜观察材料和器具11218h的微生物培养物。 2染色液：草酸铵结晶紫、石碳酸复红。 3仪器及其他用具：显微镜、酒精灯、载玻片、盖玻片、接种环、废液缸、洗瓶、火柴、纱布、擦镜纸、吸水纸、无菌水、香柏油、二甲苯等。方法及步骤1、简单染色 涂片：取一块载玻片，滴一小滴（或用接种环挑取少许）无菌蒸馏水于载玻片中央，用接种环按无菌操作要求挑取少量菌体与水滴充分混匀，涂片要薄而均匀。干燥、固定：手执玻片一端，将涂有菌体的面朝上，通过火焰23次（用手指触及玻片背面，以不烫手为宜）。其目的是使细菌细胞质凝固，以固定细菌细胞形态，并使之牢固附着在载玻片上。染色：将玻片平放于玻片搁架上，在涂菌的部位滴加适量的石炭酸复红(或草酸铵结晶紫)，染色约12min。水洗：倾去染色液，用洗瓶中的自来水冲去染色液，直至涂片上流下的水无色为止。干燥：自然干燥，或用吸水纸轻轻吸干水分（注意勿擦去菌体）。镜检：待标本片完全干燥后，用油镜镜检。2油镜的使用 调节光源：将10的低倍镜转到工作的位置。上升聚光器，打开可变光阑，安装在镜座内的光源灯可通过调节电压以获得适当的照明亮度，应根据光源的强度及所用物镜的放大倍数选用凹面或凸面反光镜并调节其角度，使视野内的光线均匀，亮度适宜。 调节双筒显微镜的目镜：根据使用者的个人情况，双筒显微镜的目镜间距可以适当调节，而左目镜上一般还配有曲光度调节环，可以适应眼距不同或两眼视力有差异的观察者。 调节聚光器和物镜的数值口径相一致：取下目镜直接向镜筒内观察，先将可变光阑缩到最小，再慢慢打开，使聚光器的孔径与视野的直径一样大，然后再放回目镜。目的是使入射光所展开的角度与镜口角度相符合，否则因光圈开得太大而超过物镜的数值口径时会产生光斑，如光圈收得太小则降低分辨率，从而影响了物像的清晰度。因为各物镜的数值口径不同，所以每转一次物镜都要进行调节。 低倍镜观察：调节粗螺旋，下降载物台，将染色标本片置于载物台上，用标本夹好，移动推进器将观察的位置移到物镜的正下方，调节粗螺旋，缓慢上升载物台，调节到物像清晰为止。移动标本片，把合适的观察部位移至视野的中心。 高倍镜观察：眼睛从侧面观察，旋转转换器，将高倍镜转至正下方，注意避免与玻片相撞。眼睛从目镜观察，细心调节粗、细螺旋，直至物像清晰为止。将最适宜观察的部位移至视野的中心。注意不要移动玻片标本的位置。 油镜的观察：用高倍镜找到合适的部位后，眼睛从侧面观察，旋转转换器，使高倍镜与油镜的镜头呈“八”字形，在玻片标本的镜检部位滴一滴香柏油。然后眼睛从侧面观察，将油镜转到正下方，小心油镜的镜头与载物台相撞，小心上升载物台，使油镜的镜筒浸入香柏油中。眼睛从目镜观察，调节微螺旋，直至物像清楚为止。仔细观察并绘图(6)注意不能用粗准焦螺旋，调节要适度，特别是当载玻片过厚时应更换盖玻片。(