异烟酸-吡唑酮法测定狗内脏中氰化物的含量及方法改进.doc

异烟酸-吡唑酮法测定狗内脏中氰化物含量的方法改进The Determination of the Cyanide of the Insides of Dogs by the Improved Isonicotinic Acid Pyrazolone Spectrophotometry汪 琼1， 胡文武1， 严付华1(1长沙市疾病预防控制中心,湖南 长沙 410001)WANG Qiong1, HU Wen-wu1, YAN Fu-hua1（1 Changsha Disease Prevent and Control Centre,Hunan Changsha 41001）中图分类号摘要：针对狗内脏中氰化物含量的检测无国家标准方法，且在参照食品中氰化物含量检测方法过程中氢氰酸易挥发，导致不能准确检测氰化物含量，且显色时间长，导致工作效率低，在异烟酸-吡唑酮法的基础上改进实验方法，结果表明：氢氧化钠吸收液浓度为30g/L时，能基本吸收氢氰酸；缩短显色时间，回收率能达到95%以上。关键词：异烟酸-吡唑酮；狗内脏；氰化物AbstractAccording to the detection of the content of cyanide in dog with no national standard method,the hydrocyanic acid volatile in the detection process in reference to the food national standard method,resulting in incrorrect detection,long coloration time and low efficiency.By improved isonicotinic acid pyrazolone spectrophotometry,the results show that:the concentration of sodium hydroxide absorbent is 30g/L,can basically absorb hydrogen cyanide;shorten the color of time,the recovery rate can reach 95% or more.Key words: isonicotinic acid pyrazolone spectrophotometry;the dog; cyanide“三伏天吃狗肉避暑,三九天吃狗肉驱寒” 。狗肉现成为餐桌上佳肴。但某些违法分子利用氰化物(俗称“三步倒”)捕杀家犬或流浪狗充作狗肉卖给狗贩。氰化物的口服致死量约为0.050.25g1 。狗被毒死后,氰化物会分布于狗的血液和内脏中,毒狗肉及其内脏如被人食用,对身体健康将会造成严重的危害2。目前,动物内脏中氰化物的检测无国家标准方法3-4。因此,我们参照食品、水质、空气中氰化物检测方法测定了可疑狗样品中狗胃、狗肝中氰化物的含量5-8。由于实际操作过程中,按照国标法得到的蒸馏液pH显酸性,而氢氰酸易挥发,影响测定结果的准确性,且于蒸馏试样溶液中加入1mL氢氧化钠溶液(10g/L)后加入酚酞指示液并不变色9、10。因此,本文的主要工作是:在异烟酸-吡唑酮法的基础上探究氢氧化钠吸收液浓度对实验结果的影响,以及比色反应时间对实验结果的影响。结果表明改进的方法缩短了比色反应时间,其测定样品回收率也都在95%以上。1 实验部分1.1 仪器与试剂1.1.1试剂甲基橙指示剂（0.5g/L）;乙酸锌溶液 (100g/L);酒石酸;氢氧化钠溶液(10g/L);氢氧化钠溶液(1g/L);乙酸(1+24);酚酞-乙醇指示剂(10g/L);磷酸盐缓冲溶液(0.5 mol/L):称取34.0g无水磷酸二氢钾和35.5g无水磷酸氢二钠,溶于水并稀释至1000mL;异烟酸-吡唑酮溶液:称取1.5g异烟酸溶于24mL氢氧化钠溶液(20g/L)中,加水至100mL,另取0.25g吡唑酮,溶于20mLN-二甲基甲酰胺中,合并上述两种溶液,混匀;氯胺T溶液:称取1g氯胺T溶于100mL水中,临用时现配;氰化钾标准溶液1.1.2仪器723分光光度计;恒温水浴箱;250mL玻璃水蒸气蒸馏装置1.2 实验方法迅速称取10.00g试样，放置于250mL蒸馏瓶中，加适量水使试样全部浸没，加20mL乙酸锌溶液（100g/L），加12g酒石酸，迅速连接好全部装置，冷凝管下端插入盛有一定浓度的5mL氢氧化钠吸收液的100mL容量瓶的液面下，缓缓加热，通水蒸气进行蒸馏，收集蒸馏液100mL，取下容量瓶，加塞，混匀。于25mL比色管中加入1mL氢氧化钠溶液（10g/L），吸取0、0.3、 0.6、0.9、1.2、1.5mL氰化物标准溶液（相当于0、0.3、0.6、0.9、1.2、 1.5g氢氰酸），分别置于25mL比色管中，各加水至10mL。滴加1滴酚酞指示液，用乙酸（1+24）调至红色刚刚消失，加5mL磷酸盐缓冲溶液，加热至37左右，再加入0.25mL氯胺T溶液，加塞混合，放置5min，然后加入5mL异烟酸吡唑酮溶液，加水至25mL，混匀，于2540放置一定时间，用2cm比色杯，以零管调节零点，于波长638nm处测吸光度，记录吸光度值。以氰化氢含量对吸光度作图,绘制标准曲线。试样中氰化物(以氢氰酸计)的含量按式(1)进行计算:X=A/(mV2/V1)X试样中氰化物(以氢氰酸计)的含量,单位为mg/kg ; A测定用试样液氢氰酸的质量,单位为微克(g) ; m试样质量,单位为克(g); V1试样蒸馏液总体积,单位为毫升(mL); V2测定用蒸馏液体积,单位为毫升(mL); 计算结果保留两位有效数字。2 结果与讨论2.1 不同显色反应时间对实验结果影响在638nm,30条件下对加入0.8mL氰化物标准溶液进行比色分析,确定最佳显色反应时间。结果见表1。表1显色反应时间与吸光度显色时间(min)10152025303540吸光度(A)0.2030.2130.2120.2130.2120.2120.213如图1所示,显色反应时间为15min时吸光度已达到最大值,且在1540min内显色已基本稳定,因此本文选择显色反应时间为20min。确定显色反应时间后,按照实验操作步骤绘制标准曲线,结果见表2。表2 标准曲线标准系列(g)00.30.60.91.21.5吸光度(A)00.0770.1560.2370.3200.403由表2绘制的标准曲线r=0.9998,a=0.269,b=-0.003。2.2 不同浓度吸收液对实验结果影响吸取1.0mL氰化物标准溶液进行蒸馏收集,确定最佳氢氧化钠吸收液浓度,结果见表3。表3 吸收液浓度与吸光度吸收液浓度(g/L)10152025303540吸光度(A)0.2320.2430.2510.2570.2610.2600.261回收率(%)87.3691.4594.4296.6598.1497.7798.14由表3可知氢氧化钠吸收液浓度为30g/L时回收率已达到最高值,由于后续试验过程中需要加入乙酸调节试样溶液的酸碱度,吸收液浓度过高将影响乙酸的用量,因此本文选择吸收液的浓度为30g/L。2.3 可疑狗胃、狗肝样品测定按改进的实验步骤测定3只可疑狗的狗胃和狗肝样品,并分别平行测定3次,且在3号狗肝样品中加入氰化物标准溶液1mL,测定回收率,其结果见表4、表5。表4 可疑样品测定值样品1#狗胃1#狗肝2#狗胃2#狗肝3#狗胃3#狗肝1试样质量(g)10.63610.38010.21610.89610.7179.945吸光度0.0340.0230.3980.0200.0640.042X(mg/kg)0.140.101.40.0880.240.182试样质量(g)10.52410.3019.99310.01810.31910.726吸光度0.0390.0220.3460.0210.0640.052X(mg/kg)0.150.091.30.0890.240.193试样质量(g)9.87910.6219.97010.05710.82910.287吸光度0.0310.0230.3450.0210.0700.047X(mg/kg)0.130.091.30.0870.250.18平均值(mg/kg)0.140.091.30.0880.240.18表5 3#狗肝加标样品测定值及回收率样品号123试样质量(g)吸光度X(mg/kg)试样质量(g)吸光度X(mg/kg)试样质量(g)吸光度X(mg/kg)9.9670.3081.1610.0470.3051.149.9800.3121.17回收率(%)98.096.099.0由表4可知可疑狗中的胃和肝中均含有氰化物,其中狗胃中的氰化物的含量均高于狗肝。由表5可知3号样品狗肝中氰化物的回收率都在95%以上,改进的实验方法准确度高,适合日常分析检测要求。2.4 结论(1) 结果表明氢氧化钠吸收液的浓度为30g/L时能完全吸收蒸馏液中的氢氰酸,从而避免氢氰酸的挥发,影响实验测定结果;(2) 显色反应时间由40min缩短为20min,符合实验要求,且提高了实际工作效率。文 献1 朱江.氰化物中毒的相关特征与救治J.中国急救复苏与灾害医 学杂志,2010,5(14):467-4702李云鹏.血液中氰化物检测研究进展J.国际检验医学杂志,2007,28(5):457-4613金岚.异烟酸-巴比妥酸法测定狗肉中氰化物J.理化检验-化学分册,2005(4):432-4334金安宝.狗肉中氰化物的测定J.中国卫生检验杂志,2006,16(4):4815GB/T 5009.36-2003. 食品卫生检验方法 理化部分（一）