基因工程试题1.doc

基因工程名词解释问题： Primer参考答案： 引物。是DNA复制的先锋，就象结晶过程中的晶核，引导DNA的合成。名词解释问题： Northernblot参考答案： Northern杂交。用于检测细胞或组织样品中是否存在与探针同源的mRNA分子的检测方法。过程与Southern杂交相似，只不过在Blotting过程中转移的是RNA而不是DNA。名词解释问题： -complementation参考答案： -互补。指lacZ基因上缺失近操纵基因区段的突变体与带有完整的近操纵基因区段的-半乳糖苷酶阴性的突变体之间实现的互补。这两个无酶学活性的产物混合在一起时，可恢复-半乳糖苷酶的活性。名词解释问题： RealtimePCR参考答案： 实时PCR。通过特定设计的PCR仪器来实时检测PCR扩增过程每一轮循环产物的累积数量，推算模板的起始浓度，这种工作方式就称为实时PCR。名词解释问题： Southernblot参考答案： Southern杂交。一种检测DNA分子的方法。将DNA片段从琼脂糖凝胶转移到滤膜，结合了DNA分子的滤膜先与特定的预杂交液进行预杂交，然后与标记的核酸探针和滤膜混合。如果滤膜上的DNA分子存在与探针同源的序列，那么探针将与该分子形成杂合双链，从而吸附在滤膜上。在经过一定的洗涤程序将游离的探针分子除去后，通过放射自显影或生化检测，就可判断滤膜上是否存在与探针同源的DNA分子及其分子量。名词解释问题： lyticgrowth参考答案： 裂解生长状态。噬菌体侵染宿主细胞后，大量复制并组装成子代噬菌体颗粒，导致宿主细胞裂解的现象称裂解生长状态。名词解释问题： GenomicDNAlibrary参考答案： 指将某生物体的全部基因组DNA用限制性内切酶或机械力量切割成一定长度范围的DNA片段、与合适的载体体外重组并转化相应的宿主细胞获得的所有阳性菌落。名词解释问题： Shuttlevector参考答案： 穿梭载体。能够在两类不同的宿主中复制、增殖和选择的载体称为穿梭载体。名词解释问题： P1artificialchromosomes参考答案： P1人工染色体载体。结合了P1载体和BAC载体的特性，是P1噬菌体载体的改进载体。重组分子不能通过体外包装来感染宿主细胞，而只能通过电转化来将重组分子导入宿主细胞。名词解释问题： Singlestrandbindingprotein参考答案： 单链结合蛋白。此蛋白能协同地与ssDNA结合而不与dsDNA结合，可以削弱链内二级结构的稳定性，从而加速互补多核苷酸的重新退火，并通过消除阻碍DNA聚合酶前进的链内二级结构，而提高这些聚合酶的持续作用能力。填空题问题： 在DNA测序中，Primerwalking的定义是（）。参考答案： 从目的片段的一端开始，利用载体上的序列为依据，设计第一次反应的引物进行测序，然后，依次根据前一次测序结果，设计下一次反应引物，递进测序，直至完成。填空题问题： （）即为质粒的拷贝数，按照质粒拷贝数的多少，质粒可以分为（）和（），（）质粒多数是一些具有转移能力的大质粒；（）质粒多数是一些不具有转移能力的小质粒。参考答案： 单个细胞中所含有的质粒DNA分子数目；严谨型；松弛型；严谨型；松弛型填空题问题： 热起始是一种在PCR反应中优化目标扩增产物的方法，它可抑制（）扩增。参考答案： 非特异性填空题问题： 基因操作（Genemanipulation）的核心部分是基因克隆（genecloning），genecloning的基本要点有（），（）和（）。参考答案： 克隆基因的类型；受体的选择；载体的选择填空题问题： 绿豆核酸酶来源于绿豆芽，与S1酶相似，但比S1酶更温和，在（）上才切割，可使DNA突出端变成平端。参考答案： 大切口填空题问题： 有关感受态出现的机制，目前主要有两种假说：（）和（）。参考答案： 局部原生质化；酶受体假说填空题问题： E.coliDNA连接酶与T4DNA连接酶相似，但需（）的参与，且其平端连接效率低常用于置换合成法。参考答案： 烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD）填空题问题： Ecok的一般分子组成为R2M2S，在这些亚基中，R亚基具有（）的作用，M亚基具有（）的作用，S亚基具有（）的作用，当该该酶发生作用时，需用到的辅因子有：（）、（）、（）。参考答案： 限制酶；甲基化；识别DNA序列；ATP；SAM；Mg2+填空题问题： 在RNA的分离、纯化和检测过程中，需控制RNA酶的活性，常用的RNA酶抑制剂有（）、（）、（）。参考答案： 人胎盘Rnase抑制剂；氧铜核糖核苷复合物；硅藻土填空题问题： 核糖核酸酶A来源于牛胰，为内切核酸酶，可特异攻击（）。可除去DNA:RNA中未杂交的RNA区，可用来确定DNA或RNA中单碱基突变的位置。参考答案： RNA上嘧啶残基的3端填空题问题： 大肠杆菌中至少有三种依赖于甲基化的限制系统（）、（）、（）。它们识别的序列各不相同，但只识别经过甲基化的序列，都限制CpG甲基化酶作用的DNA。参考答案： mcrA；mcrBC；mrr填空题问题： YAC载体基本组成元件有（），（），（），（）和（）。参考答案： 复制起点；着丝粒；端粒；MCS；筛选标记填空题问题： 染色体步查指（）。参考答案： 采用一段分离自某一重组体一端的非重复DNA片段作为探针以鉴定含有相邻序列的重组克隆。填空题问题： 转化（Transformation）是在1928年由格里菲思在对（）菌进行研究时发现的。转导（Transduction）是1952年由莱德伯格在研究（）菌的遗传重组时发现的。参考答案： 肺炎双球菌（Diplococcuspneumoniae）；鼠伤寒沙门氏菌（Salmonellatyphimurium）填空题问题： Genecloning是指（），基因文库（Genelibrary）是指（）。答案： 利用重组DNA技术分离目的基因；由大量的含有基因DNA（即某一生物的全部DNA顺序）的不同DNA片段的克隆所构成的群体填空题问题： 常用的双脱氧终止法测定DNA序列，其长度一般不会超过1Kb，因此进行大分子DNA测序时，需（），常用的方法有（）、（）和（）。参考答案： 打断大段目标DNA，生成大小适合测序的小片断DNA；限制酶消化；超声处理；在Mn2存在下用胰DNA酶消化填空题问题： 重组DNA导入宿主的一般方法有（），（），（），（）和（）等。参考答案： 转化；转导；转染；感染；接合填空题问题： 利用PCR技术介导的定点诱变（Site-directedmutagenesis）。较常用的方法一般有三种即（），（）和（）。参考答案： 同源重组法；Dpn法；重叠延伸填空题问题： 重叠基因（Overlappinggene）是指（），间隔基因（Interruptedgene）是指（）参考答案： 一个基因的序列中，单个DNA序列可编码一个以上的蛋白质；在编码序列中间插入的一段无编码作用的碱基序列填空题问题： 1单位Nae或Nar的定义：（）参考答案： 切割1g腺病毒2DNA在50ul体系中1小时所需的酶量填空题问题： 质粒载体的附加功能要素主要有（），（），（）等。参考答案： 互补；ssDNAphageorigin，promotor填空题问题： 基因突变（Genemutation）的类型有（），（），（）等。参考答案： 简单的插入或缺失；单个碱基的置换；系统的缺失、插入或成串碱基的置换填空题问题： 构建Genelibrary时，应根据所要分离的外源基因的大小选择合适的载体，这些载体通常包含有噬菌体、YAC以及（）、（）和（）等。参考答案： 粘粒（cosmid）；BAC（细菌人工染色体）；质粒（plasmid）填空题问题： 启动子（Promotor）是指（）。通常一个Gene是否表达，（）是关键的一步，是起决定作用的。在转录过程中，Promoter还是（）的结合位点。参考答案： 基因转录过程中控制起始的部位；转录起始；RNA聚合酶填空题问题： Dnase为内切核酸酶，在不同的辅因子条件下，产生不同的酶切效果，当Mg2+存在时（）；当Mn2+存在时（）。参考答案： 独立作用于每条DNA链，且切割位点随机；可在两条链的大致同一位置切割dsDNA，产生平端或1到2个核甘酸突出的DNA片断选择题问题： SDS是分离DNA时常用的一种阴离子去污剂，下列对其作用描述不正确的是（）参考答案： D消除反应中的泡沫点评：消除反应中的泡沫的是异戊醇。选择题问题： 下列DNA聚合酶中，哪一种酶只切割双链DNA中的一条链，产生单链切口，即切口酶（）参考答案： ADnase点评：在Mg2+存在下，独立作用于每条DNA链，且切割位点随机。在Mn2+存在下，它可在两条链的大致同一位置切割dsDNA，产生平端或12个核苷酸突出的DNA片段；KlenowDNA聚合酶是E.coliDNApolymerase经蛋白酶（枯草杆菌蛋白酶）裂解而从全酶中除去5-3外切活性的多肽大片段，而聚合活性和3-5外切活性不受影响；T4噬菌体DNA聚合酶与KlenowDNA聚合酶相似，但3-5外切活性强200倍，且不从单链DNA模板上替换引物；T7噬菌体DNA聚合酶的活性功能与T4噬菌体DNA聚合酶和KlenowDNA聚合酶类似，但3-5外切活性为Klenow的1000倍。选择题问题： 粘粒（cosmid）是一种人工建造的载体，下列对它的描述中哪一项是不正确的（）参考答案： D进入受体细胞后，可引起溶源化反应点评：粘粒指带有将DNA包装到噬菌体颗粒中所需的cos序列的质粒。包括质粒复制起点，可以像质粒一样转化并增殖；包括cos位点，可以像噬菌体颗粒一样包装、侵染。选择题问题： 以下各项中不是PCR反应所必须的是（）参考答案： D甘油点评：甘油可以增加引物与DNA链的结合，但不是必需的。选择题问题： 限制性内切核酸酶可以特异性地识别（）参考答案： C双链DNA的特定碱基序列点评：了解限制性内切酶的识别序列。选择题问题： 用碱法分离质粒DNA时，染色体DNA之所以可以被除去，是因为（）参考答案： B染色体变性后来不及复性点评：碱法分离质粒DNA运用的核心原理就是质粒的超螺旋构象。选择题问题： 松弛型质粒：（）参考答案： A在寄主细胞中拷贝数较多点评：理解松弛型质粒的概念。选择题问题： 下面有关限制酶的叙述哪个是错误的（）参考答案： A限制酶是外切酶而不是内切酶点评：了解限制性内切酶的特性。选择题问题： 以下不属于PCR介导的克隆的为（）参考答案： DDpn法点评：DpnI法是PCR介导的诱变方法。选择题问题： 限制性内切酶一般保存在（）浓度的甘油溶液中。参考答案： C50%点评：合适浓度的甘油和二甲基亚砜可以作为冰冻保护剂，保护生物大分子的活性。选择题问题： 限制性图谱与限制性片段长度多态性（RFLP）图谱的最显著区别在于（）参考答案： A前者是物理图谱后者是连锁图点评：详细理解两者的概念选择题问题： 可以在切口部位起作用的酶是（）参考答案： BS1核酸酶BAL31核酸酶主要活性为3外切核酸酶活性，可以从线性DNA两条链的3端去掉单核苷酸；S1核酸酶可降解单链DNA或RNA，产生带5磷酸的单核苷酸或寡核苷酸，中等浓度可在切口或小缺口处切割双链；核糖核酸酶A可以特异攻击RNA上的嘧啶残基的3端，可除去DNA:RNA中未杂交的RNA区；外切核酸酶可以作用于dsDNA，持续逐一释放5单核苷酸。选择题问题： 有关PCR的描述下列哪项不正确：（）参考答案： C扩增的对象是氨基酸序列点评：理解PCR反应的工作原理。选择题问题： 以下关于T4多核苷酸激酶标记5端制备探针的描述中（）是不正确的参考答案： A能标记单链DNA点评：T4多核苷酸激酶的活性催化ATP的磷酸基转移至DNA或RNA的5末端。选择题问题： 同一种质粒DNA，以三种不同的形式存在，电泳时，它们的迁移速率是（）参考答案： BSCDNALDNAOCDNA点评：DNA分子结构越紧凑，泳动时受到的阻力越小，迁移速率越大。选择题问题： Agarose-EB电泳法分离纯化cccDNA的原理是（）参考答案： BEB不容易插入到cccDNA中，因而迁移速度快点评：了解cccDNA的性质和EB的工作原理。选择题问题： 关于cDNA的最正确的说法是（）参考答案： A以mRNA为模板合成的双链DNA点评：正确理解cDNA的概念。选择题问题： 构建cDNA文库时，首先需分离细胞的（）参考答案： C总mRNA点评：构建cDNA文库先抽提总mRNA出来，然后反转录成cDNA。选择题问题： 在下列进行DNA部分酶切的条件中，控制哪一项最好（）参考答案： D酶量点评：各种酶都有适合自己的反应温度；同时根据酶反应动力学，酶切反应一定时间后酶的活性就会减弱或丧失，所以控制酶量是最合适的选择题问题： 在DNA测序的化学裂解法中需要（）参考答案： B用同位素或荧光标记DNA5端点评：理解DNA测序的化学裂解法的原理。简答题问题： 构建粘粒文库时会遇到哪些问题？你如何解决？参考答案： 利用粘粒构建基因文库时会遇到许多困难：载体分子会自身连接，从而导致效率大大降低甚至失败。通过对载体作去磷酸化处理或使用双cos位点载体或对载体的酶切产物进行部分补平可解决这一问题；多个外源片断插入载体中，会误将两个本来不相连的DNA片断认为是基因组中的连续DNA片断。通过收集3545kb的部分酶切外源DNA片断与载体连接、使用双cos位点载体或对载体和外源片断的酶切产物进行部分补平，可解决这一问题。提取的基因组DNA长度小于200kb，将使部分酶切后形成的3545kb片断只有少部分在其两端带有酶切位点，致使目标DNA的可用性大大降低。在对外源DNA片断作部分酶切之前，应检查其大小，如果小于200kb则不能用于构建文库；提取的总DNA纯度不高，可能由于出现酶解抑制物而得不到理想的酶切产物。因此，在制备总DNA时，应小心避免混入的有机相和水相交界处的物质。如果问题依旧出现，可用氯化铯梯度离心方法纯化DNA或重新制备总DNA；在构建的文库中常常出现不含外源片断的克隆。这种“空”克隆的比例依载体的不同和操作的小心程度而不同一般而言，使用单cos位点的载体，约有5的克隆是空的。使用双cos位点的载体，产生空克隆的比例要低得多；不同重组质粒拷贝数可以有很大差异，导致收获量相差悬殊。每当对文库作一次噬菌体的扩增，这些差异将会被进一步放大；尽管文库似乎全面，但也许不能获得目的克隆。限制酶位点的非随机分布、包装蛋白污染限制酶、重组引起的序列缺失和扩增时目的克隆可能被淘汰等都是产生这种现象的原因。简答题问题： 得到一段未知功能的基因序列，如何对它进行分析？参考答案： 基因信息的序列分析。例如，两种序列的比较；基因编码领域，启动子或增强子序列的预测；蛋白质序列的氨基酸顺序的确定；新基因的发现，通过分析EST（ExpressedSequenceTag）序列结合DNAChip技术寻找新基因；基因多型性分析，分析基因多型性特别是SNP（SingleNucleotidePolymorphi），发现并定位功能性基因，作为人类群体进化，或者疾病关联标记；高级结构的预测，根据测序所得到的核酸一级结构的信息，可以预测核酸和蛋白质的二级结构及其三级结构，从而预测其功能。根据测序所得到的核酸一级结构的信息，可以预测核酸和蛋白质的二级结构及其三级结构，从而预测其功能。简答题问题： 何谓S1核酸酶作图？有何应用？参考答案： S1核酸酶作图指：预先判断mRNA的端点位置，设计一段覆盖该端点的寡核苷酸，并作末端放射性标记。然后将该标记的寡核苷酸与mRNA混合，退火，形成杂交体。在S1核酸酶作用下，呈单链状态的DNA和RNA被降解，保留DNA-RNA杂交体双链，最后通过凝胶电泳检测DNA-RNA杂交体中标记的DNA单链的分子量大小，从而推断mRNA的末端序列。简答题问题： 何为载体？一个理想的载体应具备那些特点？参考答案： 将外源DNA或目的基因携带入宿主细胞的工具称为载体。载体应具备：在宿主细胞内必须能够自主复制（具备复制原点）；必须具备合适的酶切位点，供外源DNA片段插入，同时不影响其复制；有一定的选择标记，用于筛选；其它：有一定的拷贝数，便于制备。简答题问题： 苏云金芽胞杆菌的基因组大小为5106bp，若p99，平均克隆片段为100kb，计算构建这样一个完全的基因文库所需的克隆数。参考答案： n=ln(1-p)/ln(1-f)n:一个完全基因文库所包含的重组体克隆数p:所期望的目的基因在基因文库中出现的几率f:插入片断的平均大小与基因组DNA大小的比值根据以上公式可得到所需要的克隆数为228简答题问题： 利用细胞的中断杂交（intermithybridization）可以进行基因定位，请说出其原理？参考答案： 1961年Jacob和Wollman利用中断杂交的方法建立了一种绘制E.coli物理图谱的方法。将HfrF杂交，在混合后不同时间进行搅拌，以使接合管断裂，中止染色体向受体细胞转移。越是排在前面的基因进入受体的机会越高，反之排在离起点较后的基因进入受体的机会越低，因此用不同时间来中断杂交，就能推断出基因的顺序。简答题问题： 试简述噬菌体的Lyticgrowth和Lysogenicstate两种循环的分化及其调节过程？参考答案： Lyticgrowth是噬菌体在宿主中大量复制并组装成子代噬菌体颗粒，导致宿主细胞裂解。Lysogenicstate为噬菌体基因组DNA通过位点专一性重组整合到宿主染色体DNA中随宿主的繁殖传到子代细胞。调节过程：由感染复数和细胞的营养状态决定的，感染复数越高，营养状态越差，则溶源化的