总有机酸测量.doc

气相色谱法：乳酸、乙酸、丙酸和丁酸含量，用气相色谱法测定 ，测定条件为：检测器F1D，柱2m4 mm，固定相Porapak Q(80目)，柱温220OC，汽化室和检测器温度260OC，N2=65 mLmin，Air=550 mLmin，H2=55 mLmin，灵敏度l6l0x ，纸速5mmmin酸碱滴定法测定总有机酸含量1 、氢氧化钠溶液(01 molL-1 )的配制取适量氢氧化钠加水振摇使溶解成饱和溶液，冷却后，静置，澄清后备用。取澄清的氢氧化钠饱和溶液56mL，加新沸放冷的蒸馏水使成1 000 mL，摇匀。2 、供试品溶液的制备精密称取板蓝根提取物04 g，置50mL锥形瓶中，无水乙醇溶解，即得。3、 样品含量测定供试品溶液中，加入酚酞指示液2滴，用标定好的氢氧化钠滴定液(0074 9 molL-1)滴定，滴定至溶液显粉红色。每1 mL氢氧化钠滴定液相当于9916 mg的水杨酸(C7H603)，总有机酸以水杨酸计。反相高效液色谱法测定板蓝根总有机酸中水杨酸的含量1 、色谱条件Kromasil C18柱(46 mm x 250mm，5 m)；流动相乙腈-1醋酸水溶液(25：75)，检测波长225 nm，流速10 mL/min-1，柱温为室温，理论塔板数按水杨酸计算不低于3 000。2、 对照品溶液的配制 精密称定干燥的水杨酸对照品106 mg，100 mL量瓶甲醇定容，摇匀，045m微孔滤膜过滤，即得对照品溶液。3 、供试品溶液的制备 精密称取板蓝根提取物0.25 g，置100 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取上述溶液1 mL，置100 mL量瓶，甲醇稀释至刻度，摇匀，用045m微孔滤膜滤过，取续滤液即为供试品溶液。4 、线性关系的考察 精密量取上述配制的对照品溶液0.25，10，20，30，50，60 mL置10 ml量瓶中，无水乙醇稀释至刻度，摇匀，045m微孔滤膜过滤，取上述溶液在选定的色谱条件下，分别进样10L,以峰面积为纵坐标，含量为横坐标，绘制标准曲线。回归方程Y=2760X+105.0，r=0.9998。结果水杨酸在0.0270.63g线性关系良好。5 、精密度试验对同一对照品溶液，重复进样5次，测定峰面积值，RSD 1.0。6 、重复性试验取提取物粉末5份，适量，精密称定，按上述方法制备供试品溶液，测定计算含量，RSD 1.2。液相色谱法测总有机酸： 1 仪器与试剂仪器:Water s600E 高效液相色谱仪(包括四元溶剂泵、U6 K 进样器、真空脱气机以及Water s 486紫外检测器) ,810 数据采集和色谱数据处理软件,离心机(金坛市江南仪器厂) ,p H 计(上海埃依琪实业有限公司) .试剂:乙腈和甲醇均为色谱纯; 磷酸、甲酸、乙酸、丙酸和磷酸二氢钾均为分析纯; 水为二次蒸馏水. 2 色谱分离条件色谱柱: Kromasil C18 150 mm 4 . 6 mm 柱,5 m ,流动相为0 . 015 mol/ L 磷酸二氢钾缓冲溶液2乙腈溶液( 体积比为98 % 2 %) ,用磷酸调节p H 至2 . 30 , 流速1 . 0 mL/ min , 进样量7 . 5L ,柱温为室温,冲洗方式为等度冲洗,紫外检测波长210 nm.3 流动相的配制称取1. 36 g 磷酸二氢钾,用蒸馏水溶解并定容至500 mL ,用磷酸调节p H 至2. 30 ,用0. 45m 合成纤维素酯膜进行真空超滤,用超声波脱气后备用.4 标准溶液的配制取0. 96 mL 乙酸、0. 92 mL 甲酸、1. 02 mL 丙酸放入50 mL 容量瓶中,用蒸馏水溶解并定容至50mL 配成有机酸混合标样浓度为20 g/ L 的储备液.然后取一定量的储备液,分别配制成质量浓度均为0. 05 、0. 1 、0. 5 、1. 0 和1. 5 g/ L 的系列有机酸标准溶液.5 样品预处理取采油微生物发酵液20 mL , 用滤纸过滤去除菌体, 取2 mL 滤液, 以10 000 r/ min 的速率离心10 min , 清液用0. 45m 的滤膜过滤后进行HPLC分析.有机酸及酸味剂的分离分析食品中的有机酸和酸味剂（acidulants）是食品酸味和鲜味的重要成分，也对食品的防腐保鲜起重要作用。图6-4-41为咖啡酸及其衍生物的反相键合相色谱分离图。色谱柱为Lichrosorb SI-100-C18(10m,4.2mm300mm)，流动相为20%乙酸水溶液，流量为4.5ml/min，用UVD(254nm)检测。图6-4-42为白葡萄酒中酸味剂的分析谱图。色谱柱为BioRad HPX87-H反相键合相柱(9m,7.8mm300mm)，流动相为0.0035mol/ml H2SO4溶液恒定组成洗脱，流量为0.6ml/min，柱温为65oC，进样10l，用UVD(192nm或210nm)检测。图6-4-41咖啡酸及其衍生物的分离1奎宁酸；2绿原酸；3咖啡酸；4对香豆酸；5间香豆酸；6邻香豆酸；7香豆素图6-4-42白葡萄酒中酸味剂的分析1草酸；2柠檬酸；3酒石酸；4苹果酸；5三氧化硫；6丁二酸；7乳酸；8甘油；9二甘醇；10乙酸；11甲醇；12乙醇;A白葡萄酒样品；B标准有机酸图6-4-43蜂王浆中10-羟基-2-癸烯酸的分析1 对羟基苯甲酸甲酯（内标物）；210-羟基-2-癸烯酸图6-4-43为蜂王浆中有效成分10-羟基-2-癸烯酸的分析谱图。蜂王浆是工蜂采食花粉、花蜜后，由工蜂体内王浆腺分泌出的粘稠状物质，其含有蛋白质、氨基酸、维生素、酶、激素、乙酰胆碱和有机酸等多种营养物质。其中含有的10-羟基-2-癸烯酸，又称蜂王酸，具有抗癌作用，它的色谱分析条件是色谱柱ODS(5m,4.6mm250mm)，流动相为0.03mol/L盐酸溶液/甲醇/水（10：55:35），流量为1ml/min，室温，以对羟基苯甲酸甲酯（或辛二酸）作内标物，用二极管阵列紫外吸收检测器（UV PDAD,205nm）进行检测。方法：选定柱子开机设定压力，温度，用超纯水或者25%色谱级甲醇溶液洗柱(看流动相选，不一定是甲醇)换流动相冲洗，带色谱仪稳定后，进标样配置标准溶度的标液这个要用超纯水配置标准溶液，配法按照实验中讲解的用称量天平，精确称量固体用洗净的干燥的烧杯装固体，加入适量溶剂（色谱级，水要用超纯水，避免杂质进入）溶解，加入到容量瓶中，洗涤玻璃棒及烧杯2-3次，待离刻度12cm处改用滴管缓慢加入，液面凹陷处与标线相切为止。封好容量瓶，摇晃使溶液均一后即可。用超声溶解效果一般来说更好些。配置流动相这个看你做的是什么实验了。用超纯水配置，然后要超声35min，使流动相中的气泡被完全赶走。进标样洗进样针，取一定量的标样这个要注意气泡，一般是过量取一定的标样，拉