最新显微镜讲义2000.doc

显微镜组成部分简介：显微镜是一种精密的光学仪器，是将微小物体或物体的微细部分高倍放大，以便观察的仪器或设备。光学显微镜即以可见光为光源的显微镜。创始人：光学显微镜是在1590年由荷兰的杨森父子所首创。图11复式显微镜结构图显微镜的成像原理：光学显微镜是利用光学的成像原理观察植物体结构的。利用可见光（自然光或灯光）反射到聚光器中，把光线会聚成束，穿过生物制片（样品），进入到物镜的透镜。因此所观察的制片都要很薄，光线才能穿透。经物镜将制片的结构放大，为倒的实像，再经过目镜放大，映入眼球内最后形成的为放大的倒的虚像。一、光学显微镜包括机械装置、光学系统和照明系统。（一）机械部分：是由精密而牢固的零件组成，主要包括镜座、镜臂、载物台、镜筒、物镜转换器和调焦装置等。镜座：是显微镜的底座，位于最下端，常呈马蹄形用以支持镜体的稳定性。镜柱：是镜座上面直立的部分，为镜座上面的短柱，它支撑镜臂和载物台。镜臂：一端连于镜柱，一端连于镜筒，是取放显微镜时手握部位。上置目镜下与接物镜相连，中部为握取部分，上端镜筒相连，并附有小调节器。镜筒：为一中空长桶，上接目镜下与接物镜相连。整个有镜筒附着器与镜臂相连。调节器：是装在镜柱上的大小两种螺旋，调节时使镜台作上下方向的移动。大螺旋，移动时可使镜台作快速和较大幅度的升降，所以能迅速调节物镜和标本之间的距离使物象呈现于视野中，通常在使用低倍镜时，先用粗调节器迅速找到物象。小螺旋称细调节器，移动时可使镜台缓慢地升降，多在运用高倍镜时使用，从而得到更清晰的物象，并借以观察标本的不同层次和不同深度的结构。载物台：在镜筒下方，形状有方、圆两种，用以放置玻片标本，中央有一通光孔，显微镜其镜台上装有玻片标本推进器，推进器左侧有弹簧夹，用以夹持玻片标本，镜台下有推进器调节轮，可使玻片标本作左右、前后方向的移动。物镜转换器：它是一个旋转圆盘，上有35个孔，分别装有低倍或高倍物镜镜头。转动转换器，可以调换不同倍数的物镜，当听到碰叩声时，方可进行观察，此时物镜光轴恰好对准通光孔中心，光路接通。目镜筒：位于机架上方，与机架固定，目镜插在其上。（二）光学系统目镜：它是插在目镜筒顶部的镜头，由一组透镜组成，可以使物镜成倍地分辨、放大物像，例如10X、15X等。物镜：它安装在转换器的孔上，也是由由一组透镜组成的。物镜上刻有放大倍数，常用物镜可按放大率分为低倍 (4)、中倍(10或20)、高倍 (40)和油浸物镜(100)。高倍物镜中多采用浸液物镜，即在物镜的下表面和标本片的上表面之间填充折射率为1.5左右的液体（如杉木油），它能显著的提高显微观察的分辨率。物镜一般位于显微镜筒的下方，接近所观察的物体（所以叫物镜）。（三）照明部分集光器：是位于镜台下方的集光器架上，可以上下移动，以调节光线的强弱。由聚光镜和光圈组成，其作用是可以集中透射过来的光线，使更多的光能集中到被观察的部位。光圈：又称虹彩光圈，在聚光镜下方，其外侧伸出一柄，推动它可调节其开孔的大小，以调节光量。光源：普通光学显微镜的照明光源位于聚光器的下方，为特制的照度均匀的强光灯泡，并且配有可变电阻，可以改变光线的强度。二、显微镜使用注意事项一是取镜和放置。持镜时必须是右手握臂、左手托座的姿势，不可单手提取，以免零件脱落或碰撞到其它地方。轻拿轻放，不可把显微镜放置在实验台的边缘，以免碰翻落地。二是对光调节。要求一定用低倍镜对光，用拇指和中指移动旋转器，使低倍镜对准镜台的通光孔(当转动听到碰叩声时，说明物镜光轴已对准镜筒中心)。当看到均匀光亮的圆形视野为止。打开光圈，上升集光器，以左眼在目镜上观察(右眼睁开)，时调节反光镜方向，直到视野内的光线均匀明亮为止。要养成两眼同时睁开的习惯，以左眼观察视野，右眼用以绘图和记录。三是放置玻片标本。取一玻片标本放在镜台上，一定使有盖玻片的一面朝上，切不可放反，用推片器弹簧夹夹住，然后旋转推片器螺旋，将所要观察的部位调到通光孔的正中。四是调节焦距。用手转动粗准焦螺旋，使镜筒徐徐下降，同时两眼从侧面注视物镜镜头，使镜台缓慢地上升至物镜距标本片约5毫米处时停止。（切勿在目镜上观察。一定要从右侧看着镜台上升）。用左眼向目镜内注视（注意右眼应该同时睁着），并转动粗准焦螺旋，使镜筒徐徐上升，直到看清物象为止。如果不清楚，可调节细准焦螺旋，至清楚为止。如果物象不在视野中心，可调节推片器将其调到中心(注意移动玻片的方向与视野物象移动的方向是相反的)。如果视野内的亮度不合适，可通过升降集光器的位置或开闭光圈的大小来调节。五是保持显微镜的清洁。用专门的擦镜纸；擦镜头时，先将擦镜纸折叠几次，然后朝一个方向擦，不可来回擦或转动擦；如果镜头被油污污染，则可在擦镜纸上滴几滴二甲苯，然后按上述方法擦拭，切忌口吹手抹或用布擦，机械部分用布擦拭。水滴、酒精或其它药品切勿接触镜头和镜台，如果沾污应立即擦净。不要随意取下目镜，以防止尘土落入物镜，防震防灰，也不要任意拆卸各种零件，以防损坏。六是使用完毕后，按照以下步骤操作：显微镜使用完毕后，应将玻片取下，将其机械部分用白纱布擦拭干净；转动转换器，让两个物镜偏于两旁；转动粗准焦螺旋，使镜筒下降至最低点，关闭光圈，推片器回位，盖上绸布和外罩，放回实验台柜内。最后不要忘记填写使用登记表。特别注意：使用准焦螺旋调节焦距，找到物象可以说是显微镜使用中最重要的一步，也是操作者感觉最为困难的一步。操作者在操作过程中极易出现以下错误：一是在高倍镜下直接调焦；二是不管镜筒上升或下降，眼睛始终在往目镜中看视野；三是不了解物距的临界值，物距调到23厘米时还在往上调，而且转动准焦螺旋的速度很快。前两种错误结果往往造成物镜镜头抵触到装片，损伤装片或镜头，而第三种错误则是操作者使用显微镜时最常见的一种现象。针对以上错误，操作者要注意，调节焦距一定要在低倍镜下调，先转动粗准焦螺旋，使镜筒慢慢下降，物镜靠近载玻片，但注意不要让物镜碰到载玻片，在这个过程中眼睛要从侧面看物镜，然后用左眼朝目镜内注视，并慢慢反向调节粗准焦螺旋，使镜筒徐徐上升，直当看到物像为止。一般显微镜的物距在1厘米左右，所以如果物距已远超过1厘米，但仍未看到物像，那可能是标本未在视野内或转动粗准焦螺旋速度过快，此时应调整装片位置，然后再重复上述步骤，当视野中出现模糊的物像时，就要换用细准焦螺旋调节，只有这样，才能缩小寻找范围，提高找到物像的速度。三、高倍镜的使用方法（低倍镜寻找视野,高倍镜仔细放大）一是选好目标。一定要先在低倍镜下把需进一步观察的部位调到中心，同时把物象调节到最清晰的程度，才能进行高倍镜的观察二是转动转换器。调换上高倍镜头，转换高倍镜时转动速度要慢，并从侧面进行观察(防止高倍镜头碰撞玻片)，如高倍镜头碰到玻片，说明低倍镜的焦距没有调好，应重新操作三是调节焦距。转换好高倍镜后，用左眼在目镜上观察，此时一般能见到一个不太清楚的物象，可将细调节器的螺旋逆时针移动约0.51圈，即可获得清晰的物象(切勿用粗调节器)四是如果视野的亮度不合适，可用集光器和光圈加以调节，如果需要更换玻片标本时，必须顺时针(切勿转错方向)转动粗调节器使镜台下降，方可取下玻片标本。五是注意在高倍物镜下不能取放玻片标本，防止损坏镜头。四、油镜的使用方法一是在使用油镜之前，必须先经低、高倍镜观察，然后将需进一步放大的部分移到视野的中心。二是将集光器上升到最高位置，光圈开到最大。三是转动转换器，使高倍镜头离开通光孔，在需观察部位的玻片上滴加一滴香柏油，然后慢慢转动油镜，在转换油镜时，从侧面水平注视镜头与玻片的距离，使镜头浸入油中而又不以压破载玻片为宜。四是用左眼观察目镜，并慢慢转动细调节器至物象清晰为止。如果不出现物象或者目标不理想要重找，在加油区之外重找时应按：低倍高倍油镜程序。在加油区内重找应按：低倍油镜程序，不得经高倍镜，以免油沾污镜头。五是油镜使用完毕，先用擦镜纸沾少许二甲苯将镜头上和标本上的香柏油擦去，然后再用干擦镜纸擦干净。五、制片技术横切片或纵切片。取样品欲观察的部位，经软化处理后，用手术刀片，切成10-20um的薄片，切片时现在材料和刀口蘸些水，选取平整的薄片置载玻片上，根据观察对象不同，滴加甘油醋酸试液、水和氯醛试液或者其他试液1-2滴，盖上改玻片。必要时候滴加水和氯醛试液，在酒精灯上加热透化，并滴加甘油乙醇或稀甘油，盖上盖玻片。盖玻片和载玻片一是盖玻片和载玻片的表面应相当平坦，无气泡，无划痕。最好选用无色，透明度好的，使用前应洗净。加热的制片，必须放冷后才能观察。二是盖玻片的标准厚度是0.170.02mm，如不用盖玻片或盖玻片厚度不合适，都回影响成像质量。 三是载玻片的标准厚度是1.10.04mm，一般可用范围是11.2mm，若太厚会影响聚光器效能，太薄则容易破裂。六、常用的试剂配置方法、甘油醋酸液（史氏试液）。配制：甘油、50醋酸与蒸馏水各份，混合。用于观察淀粉粒，因此液装片可以防止淀粉粒崩解。、稀甘油。