离体蛙心灌流及药物对心脏的影响.doc

离体蛙心灌流及药物对心脏的影响一、实验目的： 1、学习蛙心灌流方法。 2、了解离体心脏的自律性与环境中各因素变化的关系，观察理化因素对蛙心活动的影响。二、实验对象：蟾蜍三、实验方法：1、标本制备：取蟾蜍破坏CNS固定剪皮打开胸腔（暴露胸骨柄，用镊子把胸骨柄捏起来，用粗剪刀剪断，沿胸骨将锁骨剪断，去除多余的骨头，注意勿将心脏剪破）用眼科剪小心剪开心包膜暴露心脏在主动脉叉下方穿一根丝线备用用蛙心夹在心舒张期夹住心尖部在左侧主动脉分叉处2-3mm处剪一剪口将盛有一定量任氏液的蛙心插管插入到主动脉球将插入到主动脉球的套管稍向后退，再向左下逆时针旋转90，插入心室结扎固定剪断血管和背面静脉窦以下组织，游离标本2、连接装置：蛙心管内保持2ml灌流液，用木夹夹住蛙心套管，蛙心夹的线与张力换能器相连，换能器与电脑的相应通道相连。3、运行电脑：打开电脑Medlab实验/常用生理实验离体蛙心灌流四、实验结果：分别观察正常心脏活动曲线及加入不同溶液后的心脏活动曲线的变化。曲线规律：心脏节律； 曲线疏密：心率 曲线幅度：心室收缩强度；曲线顶点：心室收缩最大强度；曲线基线：心室舒张最大程度顺序 观察项目 药量 心肌(率、力)变化 正常任氏液 灌流 正常1 0.65%NaCl 灌流 2 2% CaCl2 12d 3 1%KCl 12d 4 1:10000 NA 12d 5 1:100000 ACh 12d 6 3% LH 12d 2.5% NaHCO3 24d 7 1:100000 Isop 1ml +任氏液1ml 8 1:1000 prop 0.2ml+任氏液1.8ml 出现效应后，抽出一半液体后 立即加入Isop1ml 五、实验讨论： 心肌细胞兴奋时，通过兴奋-收缩耦联机制，触发心肌细胞收缩。心肌收缩的特点是：1.对细胞外Ca2+浓度的依赖性高；2.“全或无”式收缩1、 0.65%NaCl灌流 与正常任氏液相比Ca2+ Ca2+内流兴奋-收缩耦联收缩力2、2%CaCl2（12滴）Ca2+Ca2+内流兴奋-收缩耦联收缩力舒张期Ca2+与肌钙蛋白不完全解离，产生Ca2+强直，基线上移。3、1%KCl（1滴）AP平台期缩短 Ca2+内流；竞争性结合肌钙蛋白兴奋-收缩耦联收缩力4、NA与心肌1受体结合激活腺苷酸环化酶细胞内cAMP激活蛋白激酶和细胞内蛋白质的磷酸化过程心肌细胞膜上Ca2+通道开放概率增加Ca2+内流肌浆网释放Ca2+兴奋-收缩耦联收缩力 离体： NA（+）1-RHR；整体：BP反射性HR5、ACh与心肌M受体结合抑制腺苷酸环化酶细胞内cAMP抑制蛋白激酶和细胞内蛋白质的磷酸化过程心肌细胞膜上Ca2+通道开放概率减少Ca2+内流肌浆网释放Ca2+兴奋-收缩耦联收缩力ACh与心肌M受体结合K+外流, Ca2+内流细胞内Ca2+兴奋-收缩耦联收缩力6、3%乳酸H+与Ca2+竞争肌钙蛋白，Ca2+不能与肌钙蛋白结合收缩力2.5NaHCO3中和H+，Ca2+与肌钙蛋白结合增加， 收缩力恢复。7、Isop1ml +任氏液1ml与心肌1受体结合激活腺苷酸环化酶细胞内cAMP激活蛋白激酶和细胞内蛋白质的磷酸化过程心肌细胞膜上Ca2+通道开 放概率增加Ca2+内流肌浆网释放Ca2+兴奋-收缩耦联收缩力Prop0.2ml+任氏液1.8ml抑制腺苷酸环化酶细胞内cAMP抑制蛋白激酶和细胞内蛋白质的磷酸化过程心肌细胞膜上Ca2+通道开放概率减少Ca2+内流肌浆网释放Ca2+兴奋-收缩耦联收缩力出现效应后，抽出一半液体后立即加入Isop，与Prop竞争性拮抗收缩力但较前次幅度小。六、实验结论：1、心肌的生理功能依靠内环境稳态；2、各种因素对心肌收缩力的影响主要通过Ca2+实现；3、K+、H+、ACh、prop可使心肌收缩力降低；4、Ca2+、NA、Isop、OH-可使心收缩力增强；5、Prop可竞争性拮抗Isop的作用。【注意事项】1、套管插入动脉球后，应及时进行换液，分别用两个吸管专管专用，防止蛙心套管下端被凝血块堵塞。2、插入到心室内后，若没有血液喷出，可将蛙心套管稍向后退，因为有时插入太深抵在心室壁上也会看不到现象。3、结扎固定时，一定要扎牢，尤其第一道线，扎好以后再在侧面的侧钩上结扎固定一下，防止滑脱。4、游离标本时注意切勿损伤静脉窦，尽量远离心脏剪。5、连接时，换能器的连线应与插管中轴在同一直线上，即与地面垂直。6、做的过