红细胞膜脂肪酸成分、膜流动性改变与糖尿病视网膜病变的关系.doc

红细胞膜脂肪酸成分、膜流动性改变与糖尿病视网膜病变的关系红细胞膜脂肪酸成分、膜流动性改变与糖尿病视网膜病变的关系2011-07-21 杨刚毅邱鸿鑫邓华聪汪恕萍张素华 【摘要】目的探讨红细胞膜脂肪酸成分和膜流动性与糖尿病视网膜病变(DR)之间的关系。方法采用高效液相色谱法和荧光偏振技术测定29例正常人和63例非胰岛素依赖型糖尿病(NIDDM)患者红细胞膜脂肪酸成分和膜微粘度。结果NIDDM病人红细胞膜花生四烯酸(C204 n-6)含量及百分组成明显低于正常对照组，而膜微粘度则明显高于对照组，且在伴有DR组其膜微粘度又明显高于不伴有DR组。患者膜微粘度与膜软脂酸(C160)和硬脂酸(C180)百分组成呈明显正相关，而与花生四烯酸和廿二碳六烯酸(C226 n-3)呈明显负相关。结论NIDDM病人红细胞膜脂酸组成对其膜流动性降低有重要影响，而后者对NIDDM微血管病变的发生和发展可能起重要作用。 【关键词】红细胞膜脂肪酸类膜流动性糖尿病视网膜病 Changes in fatty acid components and fluidity of erythrocyte membrane and diabetic retinopathyYang Gangyi, Qiu Hongxin, Deng Huacong, et al. Department of Internal Medicine, First Affiliated Hospital, Chongqing University of Medical Science, Chongqing 400016 【Abstract】ObjectiveTo investigate the relationship between erythrocyte membrane fluidity and fatty acid components and diabetic retinopathy (DR). MethodsWe examined the fatty acid components and fluidity of erythrocyte membrane in 29 normal subjects and 63 patients with type diabetcs mellitus (NIDDM) with and without DR by a high-performance liquid chromatographic (HPLC) method and fluorescence polarization technology. ResultsThe contents and constituting percentage of erythrocyte membrane arachidonate (C204n-6) were significantly lower in the diabetics than the controls. The diabetics had significantly increased erythrocyte membrane microviscosity as compared with the controls, and the membrane microviscosity was higher in diabetics with DR than those without DR. The microviscosity values were positively correlated with palmitate (C160) and stearate (C180) levels of erythrocyte membrane and negatively correlated with the arachidonate (C204n-6) and docosahexaenoate (C226n-3) in NIDDM patients. ConclusionErythrocyte membrane fatty acid component may contribute to the alteration of membrane fluidity in NIDDM patients and the alteration of membrane fluidity may play an important role in the development of diabetic microangiopathy. 【Key words】Erythrocyte membraneFatty acidsMembrane fluidityDiabetic retinopathy 糖尿病视网膜病变(DR)是糖尿病最常见的血管并发症，其发生机制尚未完全阐明。近年的研究表明，糖尿病时存在一系列红细胞流变性和功能改变，如变形能力降低，聚集性增加，物质运送功能障碍及膜酶活性和受体功能改变等，这些改变在DR的发生和发展中起重要作用。然而，导致糖尿病病人红细胞膜流动性改变的机制目前仍不清楚。为此，我们采用高效液相色谱法(HPLC)和荧光偏振技术对63例非胰岛素依赖型糖尿病(NIDDM)患者红细胞膜脂肪酸成分和膜流动性进行了分析，旨在了解糖尿病患者膜脂酸成分对膜流动性的影响及其与DR之间的关系。 对象与方法 一、对象 1.正常对照组：无糖尿病及慢性心、肝、肺、肾疾病的健康成人29例(男16例，女13例)，平均年龄559岁(4467岁)。平均体重指数(BMI)23.472.28，均经口服葡萄糖耐量试验(OGTT)排除了糖尿病和糖耐量低减(IGT)。 2.NIDDM组：根据WHO标准确诊的NIDDM患者63例(男26例，女37例)，年龄588岁(4670岁)。病程4个月35年(中位数6年)，8例患者采用普通胰岛素治疗，其余均接受饮食控制加口服降糖药治疗。根据有无视网膜病变进一步分为(1)DR组：23例(男10例，女13例)，年龄605岁，BMI 24.124.35，均经眼底荧光造影检查证实存在DR。(2)无糖尿病视网膜病变(NDR)组：40例(男16例，女24例)，年龄577岁，BMI 22.562.66，均经眼底荧光造影检查无DR。 正常对照组、DR组及NDR组3组间年龄、性别构成、BMI均具可比性。 二、方法 1.红细胞膜脂肪酸成分测定：制备红细胞膜悬液并测定膜蛋白含量。采用氯仿-甲醇混合液提取脂类后，加入0.5 mol/L HCl-乙醇溶液于80水浴酸化1小时，再加1 mol/L KOH溶液于80皂化1小时，纯氮吹干后加入2-溴苯乙酮、18-冠醚-6等在80反应20分钟，吹干后甲醇重溶，进样10 l行色谱分析。采用岛津LC-6A HPLC仪，配以SPD-6AV紫外检测器及C-R3A数据处理装置。色谱条件：采用C18反相色谱柱(1504.6 mm ID，5 m)，测定波长250 nm，柱温35，流动相：甲醇-乙腈-水(702010)，流速梯度洗脱，内标法定量。组内变异系数平均为5.09%，组间变异系数为4.08%。脂肪酸回收率平均为94.75%。磷脂脂肪酸释放率为68%1。 2.红细胞膜微粘度测定：采用以1，6-二苯基-1，3，5-己三烯(DPH)为探剂的荧光偏振法2。 3.空腹血糖(FBG)及糖化血红蛋白(HbA1c)测定：FBG测定用酶法，HbA1c测定用微柱法。 三、统计学处理 各项数据以均数标准差表示。采用F和q检验进行组间比较，指标间的关系判定采用直线相关分析。 结果 一、NIDDM组与正常对照组红细胞膜脂肪酸成分比较 NIDDM病人红细胞膜花生四烯酸(AA)含量和百分组成均明显低于对照组，差异有显著性(P0.05)，而DR与NDR两组间差异无显著性，P0.05(表1)。 二、NIDDM组与正常对照组红细胞膜微粘度、FBG、HbA1c水平比较(表2) NIDDM病人红细胞膜微粘度明显高于对照组，而DR组膜微粘度又明显高于NDR组。DR组及NDR组的FBG和HbA1c水平明显高于对照组。上述差异均具有统计学意义。 三、NIDDM患者红细胞膜流动性与膜脂肪酸成分的相关分析 NID