试剂空白和样品空白.doc

试剂空白与样本空白试剂空白：试剂空白是指由于测试试剂本身而带来的测试结果的微小的正误差。由于生化测试测量的吸光度为相对吸光度，所以从理论上说，所有终点法的测试都需要把试剂本身的吸光度扣除。试剂本身的吸光度就是试剂空白。测量方法是按照正常测试的试剂和样本量，把样本换成蒸馏水来测量。测试试剂的空白值对于一项测试尤为重要，当进行低浓度测定时应该从测试结果中扣除测试试剂的空白值。例如，如果从0.06mg/L的低浓度测试结果中减掉0.02mg/L的试剂空白值，就会使最终测定结果改变至少30%。而从1.23mg/L的高浓度测试结果中减掉0.02mg/L的试剂空白值，最终测定结果只发生了2%的变化。测定试剂的空白值时，需要使用高质量的去离子水代替待测样品，加入测试试剂，按照操作步骤，进行常规测试。然后，从样品的测定结果中减去测试试剂的空白值。不同批次的测试试剂其空白值会有所变化，所以，当使用不同批次的测试试剂时，需要重新对它的空白值进行测定。在传统手工方法中,每次测定都要做至少三个管:测定管、标准管、空白管。其中空白管是试剂加蒸馏水，测出来也就是试剂空白。因为操作环境、仪器状态、试剂稳定性等变异，所以要求每次都要测定试剂空白，称为实时试剂空白。在全自动分析仪上，大体上是模拟手工操作。但许多全自动分析仪为追求速度，在设计上采用一些折中方法来测定试剂空白。有些全自动分析仪是做不了实时试剂空白，因为它们全是先加入样本后加试剂。为了折中，只好在定标时做一个试剂空白保存起来，需要扣除试剂空白时再减这个预先保存的值。这种做法，对于比较稳定的试剂来讲，对结果影响不大。总的说来，自动生化仪上的试剂空白一般表现为零点吸光度，该吸光度是通过校准确立的。样本空白：样品空白是指在某项测试程序中，使用某个样品的浓度作为仪器的零基准。样品空白可以抵消加入测试试剂前由于样品自身存在的色度或浊度而引起的正误差。由于溶血、脂血、黄疸等情况，会导致样本本身的吸光度对测试结果造成影响。所以对样本本身吸光度的测量，即样本空白，可以去除这方面的影响。测量方法是按照正常测试的试剂和样本量，把试剂换成蒸馏水或生理盐水来进行测量。自动生化仪上，很难界定样本空白。与消除样本空白有关的大约有如下几点：a).在双试剂测定时，加入试剂1和样品后的吸光度可一定程度上扣除样本空白，所以有单试剂不能扣除样本空白的说法。b).现在优质的试剂的抗干扰能力都比较强，比如有些双试剂，R1加入后先和样本孵育一段时间，将血红蛋白、脂肪、胆红素等反应掉，再加入R2开始测定反应。在一定范围内都可以消除样本空白。c).现代全自动生化仪大多采用双波长测定。双波长测定的原则是根据干扰组分和待测物质吸收光谱的峰形特征，选择两个波长和。使干扰组分在这两个波长处的吸光系数相等，而使待测物质在两波长处的吸光系数有显著差别。以两波长分别测定分析溶液的吸光度，以两个吸光度值之差(A)计算。这也可以扣除一部分样本空白。d).有些仪器有专门的“血清信息”功能的设置。做法都是单独占用一个空白通道来计算，这也叫做样品空白校准。在使用样品空白对测试仪器进行调零后，只有样品与测试试剂发生反应而产生的色度被测定了。