药理学实验课讲义(24学时)-1.doc

实验一：不同给药途径对药物作用的影响【目的】1掌握硫酸镁的药理作用。2掌握小鼠灌胃给药及腹腔注射的方法。3观察硫酸镁不同给药途径产生的药理作用是否相同。【原理】硫酸镁是一个典型的不同给药途径产生不同药理作用的药物，其口服在胃肠道形成高渗透压，使肠腔外水份向肠腔内渗透，最终导致肠容积增大，对肠壁刺激增加，导致肠蠕动加快，出现泻下作用。静脉注射硫酸镁主要作用有：抑制中枢神经系统、扩张血管降低血压、阻断神经肌肉接头产生肌松作用等。【材料】 1. 动物 小白鼠6只2. 药品 15%硫酸镁3. 器材 小鼠灌胃器、注射器、针头、小天平【方法】1. 小白鼠标号、称重、分组。 2组 i.p. 15%MgSO4溶液 0.2ml/10g 组 i.g. 15%MgSO4溶液 0.2ml/10g3以存活或死亡观察小鼠灌胃及腹腔注射等量硫酸镁所致药物效应不同。【思考题】1给药途径不同，为什么会影响药物作用？2比较各种给药途径的优缺点？实验二：有机磷农药中毒与解救【目的】观察有机磷农药中毒的症状及阿托品、解磷定二药对有机磷农药中毒的解救效果，初步分析其解救原理。【实验原理】有机磷农药能与胆碱酯酶牢固结合，使之失去水解Ach的活性，造成突触间隙Ach大量堆积而产生一系列中毒症状（M样、N样症状等）。阿托品是M受体阻断药、氯磷啶是胆碱脂酶复活药，可不同程度的解救其中毒症状。如阿托品解除M样症状，但对肌震颤无效；解磷定可使胆碱酯酶复活，对肌震颤有效。【材料】1动物：家兔2药品：10%敌百虫溶液、0.1%硫酸阿托品溶液、2.5%解磷定溶液3器材：兔箱、注射器、5#针头、台式磅秤、瞳孔尺【方法】1取家兔1只，称重后分别观察下列各项指标：全身状况、活动情况、呼吸（次数、有无呼吸困难、呼吸道有无分泌等），瞳孔大小、唾液分泌、大小便、肌张力及有无肌震颤等，记录在表内。2耳缘静脉注射10%敌百虫溶液1ml/kg，密切观察上述的各项指标。待中毒症状明显时，立即耳缘静脉注射0.1%硫酸阿托品溶液1ml/Kg, 观察哪些症状改善，然后再自耳缘静脉注射2.5%解磷定溶液2ml/Kg，观察症状有什么变化，记录现象。【结果】将实验结果填入表中。 有机磷农药中毒及解救的情况给药情况一般活动呼吸（次/分）瞳孔（mm）唾液大便肌张力肌震颤用药前敌百虫阿托品解磷啶备注：唾液分泌、大便、肌张力、肌震颤的程度描述用（）表示。【讨论】请根据实验结果初步分析敌百虫的中毒机制和阿托品及解磷定解救的机制，后二者对抗机制上有何不同？【思考题】有机磷农药中毒的机理和解救措施。实验三：肝素和止血环酸对小鼠凝血时间的影响【目的】掌握肝素和止血环酸的抗凝血和促凝血作用及作用机理。毛细玻璃管法测定小鼠凝血时间的方法。【原理】肝素通过抑制多种凝血因子的形成而发挥抗凝作用，使凝血时间延长。止血环酸通过抑制纤溶系统，抑制纤维蛋白的溶解而产生止血效果，使凝血时间缩短。【材料】1动物：小白鼠6只，体重1822g2药品：0.4%肝素 0.1%止血环酸 生理盐水3试剂：苦味酸4器材：天平、1ml注射器、小鼠灌胃器、毛细玻璃管（内径1mm,长度10cm）【方法】1小鼠分组，称重，苦味酸标记。2组 i.p. 0.4%肝素 0.2ml/10g 组 i.p. 0.1%止血环酸 0.2ml/10g组 i.p. 生理盐水 0.2ml/10g320分钟后，以毛细玻管作眼眶内眦穿刺，取达5cm的血柱，1分钟后折断0.5cm，然后每隔30s折断毛细玻管一小截，至出现凝血丝。记录从毛细玻管采血至出现凝血丝的时间，即为凝血时间。凝血时间T=60+(n-1)30（n为折断次数）【结果】将实验结果填入表中。肝素和止血环酸对小鼠凝血时间的影响组别 动物数 药物剂量 凝血时间 凝血时间变化率（n） （g/kg） （min） （%）空白对照组肝素组止血环酸组【注意事项】1实验时室温在1418较适宜。2所用毛细玻管的内径应该均匀一致。3毛细玻管采血后不宜长时间拿在手中，以免影响凝血时间。4毛细玻管插入内眦后若无血柱出现，可将玻管轻轻旋转一下即可。【思考题】肝素和止血环酸对凝血时间有何影响？作用机制如何？临床用途有哪些？实验四：罗通定的镇痛作用一、热板法【目的】学习用热板法筛选镇痛药物的实验方法；观察罗通定的镇痛作用。【原理】热板法是筛选镇痛药的经典方法。将小鼠置于恒温的热金属板上，以热刺激小鼠足部产生疼痛反应（舔后足），通过测定小鼠痛阈值（出现疼痛反应即舔后足时间），比较用药组与对照组小鼠痛阈值的差异，判定药物有无镇痛作用。【材料】1动物：小白鼠6只，1822g，2药品：罗通定溶液（5mg/ml）、生理盐水3器材：智能热板仪、1ml注射器、5号针头、天平【方法】将热板仪温度程控开关置于550.5，筛选合格小白鼠供实验用。将小鼠放在仪器中，记录5-30秒内有无舔后足，如有可做为敏感小鼠，留做实验用，反之则淘汰。将筛选出的小鼠称重，编号，随机分为两组。一组皮下注射罗通定溶液0.1ml/10g，另一组皮下注射生理盐水0.1ml/10g，给药后30min，置于热板上，记录小鼠的痛阈值，计算痛阈提高百分率。用药后平均反应时间用药前平均反应时间痛阈提高百分比 100% 用药前平均反应时间【结果】实验结果填入表中。罗通定对小鼠的镇痛作用（热板法）组 别动物数（只）剂量(g/Kg)痛阈值（s）痛阈提高百分率（）罗通定组对照组【注意事项】1小鼠以为好，因小鼠受热后阴囊松弛触及热板，易致过敏反应。2室温对本实验有一定影响，以15-20为宜，过低小鼠反应迟钝，过高则小鼠过于敏感易引起跳跃，影响结果准确性。3正常小鼠放入热板后易出现不安、举前肢、舔前足、踢后肢等现象，这些动作不能作为疼痛指标，只有舔后足才作为疼痛指标。【思考题】影响热板法镇痛实验准确性的因素有哪些？二、扭体法【目的】学习用扭体法筛选镇痛药物的实验方法；观察罗通定的镇痛作用。【原理】扭体法是筛选镇痛药的经典方法。醋酸注入小鼠腹腔可刺激腹腔引起大面积而较持久的疼痛，致使小鼠产生“扭体”反应（腹部收缩内凹、躯体及后肢伸张、臀部抬高等）。镇痛药减轻疼痛反应，可明显地减少小鼠发生“扭体”反应的次数。【材料】1动物：小鼠6只，1822g，2药品：罗通定溶液（5mg/ml）、0.7%冰醋酸溶液、生理盐水3器材：1ml注射器、5号针头、小烧杯、天平【方法】3只小鼠皮下注射罗通定溶液0.1ml/10g，热板法实验中对照组的3只小鼠皮下注射生理盐水0.1ml/10g，15min后，IP 0.7%冰醋酸溶液0.2ml/10g，观察潜伏期（小鼠第一次出现扭体反应的时间）和15min内的扭体次数。【结果】实验结果填入表中。 罗通定对小鼠的镇痛作用（扭体法）组 别动物数（只）剂量(g/kg)潜伏期次数罗通定组对照组【注意事项】1冰醋酸有挥发性，用前宜临时配制。2每只动物腹腔注射部位和操作技术力求一致。【思考题】扭体法观察药物镇痛作用有哪些优缺点？实验五：药物对小鼠祛痰作用【目的】学习酚红从呼吸道分泌的实验方法；观察氯化铵对小鼠的祛痰作用。【原理】利用指示剂酚红自小鼠腹腔注射并经腹腔吸收后，可部分地由支气管黏液腺分泌，氯化铵口服后可刺激胃黏膜，反射性引起支气管分泌液增加的同时，由呼吸道黏膜排出的酚红量也随之增多。因而可从氯化铵对气管内酚红排泌量的影响，来观察其祛痰作用。【材料】1动物：小鼠6只，1822g，2药品：3.33氯化铵3试剂：0.5%酚红溶液、5%碳酸氢钠溶液、生理盐水4器材：灌胃针头、7号针头、手术剪、手术线、试管架、5ml小试管、1ml注射器、小烧杯、眼科镊【方法】小鼠称重，编号，随机分为两组。一组灌胃给予3.33氯化铵0.2ml/10g，另一组给等量生理盐水，30min后IP 0.5%酚红溶液0.5ml/只，30min后脱颈椎处死小鼠，剪开颈前皮肤，分离气管，用磨平的7号针头于小鼠嘴部插入气管用线结扎固定。用1ml注射器吸5%碳酸氢钠0.5ml缓慢推入气管，反复推抽，通过针头来回灌洗呼吸道3次，最后1次将灌洗液抽出注入试管中。按上述方法连续操作3次，冲洗共9次，给药组3只小鼠的灌洗液合并于一支试管，对照组合并另一只试管，与标准管比色，以酚红排出量说明氯化铵的祛痰作用。【结果】将结果填入表中。氯化铵对小鼠气管内酚红排泌量的影响组 别 鼠号剂量（g/kg）酚红分泌量（g）氯化铵组123对照组456【注意事项】1解剖时动作要轻柔，以免损伤血管。 2给药至处死的时间必须准确。3呼吸道冲洗法时，碳酸氢钠溶液用量要准确。灌洗时动作要轻，以免穿破气管或肺脏，抽推速度也尽可能相同，并尽可能将洗液抽尽。【思考题】根据实验结果，分析氯化铵祛痰作用的机制。实验六：口服SD和SASP血药浓度比较【目的】掌握SD和SASP的药动学特点。磺胺类药物血药浓度的测定方法。小鼠眼球摘除取血的方法。【原理】在苯环4位上有游离氨基的磺胺类药物可在酸性溶液中与亚硝酸钠起反应，形成重氮盐，后者在碱性溶液中与麝香草酚起反应，形成橙红色的偶氮化合物，颜色的深浅与血液中磺胺药的含量成正比。【材料】1动物 小白鼠6只，体重1822g2药品 10%SD混悬液、10%SASP混悬液、5%三氯醋酸、0.5%亚硝酸钠、5%麝香草酚（以20%NaOH为溶剂配制）、生理盐水【方法】1小白鼠标号、称重、分两组。2分别i.g.10%SD和10%SASP混悬液0.2ml/10g。 360分钟后摘除眼球采血。SD组SASP组采血0.2ml0.2ml5%三氯醋酸7.8ml7.8ml过滤滤液4.5ml4.5ml0.5%NaNO20.5ml0.5ml0.5%麝香草酚1.0ml1.0ml 注意：平行操作4.观察血液中药物的显色对比。实验七： 药物对家兔离体肠平滑肌的作用【目的】学习离体平滑肌器官的实验方法。观察拟胆碱药和抗胆碱药对离体兔肠平滑肌的作用。【原理】乙酰胆碱通过激动M受体兴奋胃肠平滑肌，阿托品可阻断M受体从而减弱或取消乙酰胆碱兴奋胃肠平滑肌的作用；氯化钡可直接兴奋胃肠平滑肌。【材料】 1.动物：家兔，体重2kg左右。 2.药品：l0-5氯化乙酰胆碱溶液、0.l硫酸阿托品溶液、10氯化钡溶液。 3.试剂：台(Tyrode)氏液。 4.主要器材：超级恒温器、生理记录仪及压力换能器、麦氏浴槽、L型通气管、充气球胆、支架、通用杠杆、手术器械、1 ml注射器等。【方法】 1.离体肠管制备：取家兔1只，左手执髂上部，右手握木棰向枕骨部猛击致死。迅速剖腹，取十二指肠、空肠及回肠，置于盛有冷台氏液之器皿中，沿肠壁剪去肠系膜，并将肠管剪成数段，轻轻压出肠内容物，再换冷台氏液，最后将肠管剪成23cm的小段备用。 2.安装离体实验装置：将超级恒温器经橡皮管与麦氏浴槽相连，使水温保持在380.5。将压力换能器与生理记录仪连接(参见图4-3-1)。 3.固定离体肠管：取兔肠一段，两端各穿一线，其中一线固定于L型通气管上，放入盛有30 ml台氏液的浴槽内，固定L型通气管，并将其与装有空气或氧气的球胆相连，缓慢通入气泡(2个气泡s)。肠管另一端与压力换能器相连，加0.51g负荷，打开记录仪，描记肠管正常活动曲线。 4.加药：用注射器依次向浴槽内加入下列药物，描记曲线变化。10-5氯化乙酰胆碱溶液0.10.2 ml，当肠管收缩显著时，立即加入。0.1硫酸阿托品溶液0.1ml，当描笔下降扫基线时再加入。10-5氯化乙酰胆碱溶液，剂量同，如果作用不显著，接着追加。换液3次。l0氯化钡溶液0.1 ml，待作用稳定后立即加入。0.1硫酸阿托品溶液0.1 ml。【结果】剪下或复制肠管收缩曲线，并在曲线下注明所加药物及剂量。【注意事项】 兔处死后应迅速剖腹，取出肠管置营养液内。肠腔内容物要洗干净，肠管周围的组织应去除干净。动作应轻柔，尽量避免牵拉肠管。 浴槽内液体量应根据浴槽大小而定，以覆盖肠管为基准，用药量应根据浴液量作适当调整，不要把药液直接加到匿肠上，以免影响结果。 浴温和肠肌的张力均可影响实验结果，应注意调节。 【思考题】 使离体平滑肌保持其收缩机能需要哪些基本条件? 用受体学说分析阿托品为什么能对抗乙酰胆碱对肠肌的收缩作用，却不能对抗氯化钡对肠肌的收缩作用？实验八 异烟肼LD50的测定【目的】掌握药物LD50测定的基本步骤，掌握改进寇氏法的计算方法；了解异烟肼的毒性反应及其程度。【原理】半数致死量（LD50）是药物、毒物及病原微生物等毒力水平的一个标志。它表示能使全部实验对象半数死亡的剂量或浓度。由于生物间存在个体差异性，因此LD50 需用一批相当数量的实验对象进行实验方能测得，并且每种药物对不同实验对象的LD50 值不同。测定LD50 的方法有很多，如目测机率单位法、直线回归法、累计法、序贯法以及Bliss法等。其中Bliss 法为最经典、最准确的方法，但需要用计算机和相应软件来完成。由于寇氏法较常用，并有计算简便、结果较准确等特点，故专门介绍之。寇氏法：将一定浓度和一定容量的药物，按一定比例、一定给药途径给予小鼠，观察不同剂量小鼠死亡情况，计算LD50，以确定药物急性毒性。【材料】1动物：KM小鼠10只，1822g，各半2药品：异烟肼3器材：50ml烧杯、100ml量筒、1ml注射器、小鼠笼、天平【方法】1预实验：取10只小鼠，以2只为一组分为5组，组间剂量比值为1：0.5，以0.2ml10g体重，分别用异烟肼腹腔注射，观察出现的症状并记录死亡数，找出引起0%（n）和100%（m）死亡率剂量的所在范围。2正式实验：据mn比值查表，选择组间剂量比值（1：0.8），计算各组间的剂量。每组同学做一个剂量组，共做4个剂量组，每组10只小鼠。据预实验结果显示m为 ml/kg 选择分组及剂量比值简表剂量比值（1：K）K=0.60.650.70.750.80.850.880.9最高和最低致死剂量相差的倍数(mn)2倍左右3-4组4组5-6组6-7组7-8组3倍左右3-4组4组4-5组5组6-8组9组4倍左右3-4组4-5组5组5-6组7-8组9组5倍左右4-5组5-6组6组7-8组9组10组10倍左右5